嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）是一種常見(jiàn)的條件致病菌,廣泛存在于水環(huán)境中,能導(dǎo)致多種淡水魚(yú)暴發(fā)出血性敗血癥,也能引起人類食物中毒、感染性腹瀉、敗血癥等。Ⅵ型分泌系統(tǒng)（T6SS）是許多革蘭陰性菌用于靶向真核宿主細(xì)胞或者其他細(xì)菌的一種多功能武器,在細(xì)菌的毒力作用和細(xì)菌間競(jìng)爭(zhēng)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。溶血素共調(diào)節(jié)蛋白（Hcp）是T6SS的重要結(jié)構(gòu)成分和效應(yīng)分子,其分泌被認(rèn)為是T6SS發(fā)揮功能的標(biāo)志。然而到目前為止,T6SS在嗜水氣單胞菌的功能仍未被報(bào)道過(guò)。本研究對(duì)已完成全基因組測(cè)序的14株嗜水氣單胞菌進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)T6SS基因簇在嗜水氣單胞菌不同分離株中具有多樣性;在此基礎(chǔ)上,分別對(duì)嗜水氣單胞菌中國(guó)分離株NJ-35和美國(guó)分離株ML09-119的T6SS效應(yīng)分子Hcp進(jìn)行了功能分析,并評(píng)價(jià)了重組Hcp蛋白在常見(jiàn)淡水養(yǎng)殖魚(yú)類—鯽魚(yú)中的免疫原性和保護(hù)效力;同時(shí),對(duì)嗜水氣單胞菌NJ-35中的一組新型抗菌效應(yīng)蛋白/免疫蛋白對(duì)TseP/TsiP進(jìn)行了鑒定及功能分析。1.嗜水氣單胞菌中國(guó)分離株NJ-35 T6SS基因簇的鑒定及Hcp家族蛋白多樣性分析對(duì)已完成全基因組測(cè)序的1... 

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圖２－１?ＶＩ型分泌系統(tǒng)（Ｔ６ＳＳ）的結(jié)構(gòu)和機(jī)制示意圖ｌ：Ｑｌ??Ｆｉｇ?２－１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｔ６ＳＳ?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ａｎｄ?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ??

?嗜水氣單胞菌ＶＩ型分泌系統(tǒng)效應(yīng)分子Ｈｅｐ的功能分析???ｎ＾—??ＳＢ?３〉??Ｑ?Ｓｐｃａａｔｅ？ＪｒＨ？ｔ〇ｒｃｉｏ＜ｒ？ｎ?＇?５?＇??Ａａｗｊｏｒｙｐｒａｔ＾ｎ??ＩＭｆｆｌ？？??Ｔｒｅｎｃｔｓ?ｍ?Ｍ（ｃｒｏｂ＊ｏｌｏｇｙ??圖２－２?Ｔ６ＳＳ效應(yīng)蛋白遞送模式圖＾??Ｆｉｇ?２－２?Ｍｏｄｅｓ?ｏｆ?Ｅｆｆｅｃｔｏｒ?Ｄｅｌｉｖｅｒｙ?ｂｙ?ｔｈｅ?Ｔｙｐｅ?ＶＩ?Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ?Ｓｙｓｔｅｍ?（Ｔ６ＳＳ）??Ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ?ｓｅｃｒｅｔｅｄ?ｖｉａ?ｔｈｅ?Ｔ６ＳＳ?ｈａｖｅ?ｂｅｅｎ?ｄｉｖｉｄｅｄ?ｉｎｔｏ?ｓｐｅｃｉａｌｉｓｅｄ?（１－３）?ａｎｄ?ｃａｒｇｏ?（４－６）?ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ．??對(duì)比之下，貨物效應(yīng)蛋白不與Ｔ６ＳＳ裝置的任何組分融合，并且在某些情況下，不??與Ｔ６ＳＳ的其他任何基因相鄰。然而，大量的效應(yīng)蛋白編碼基因被發(fā)現(xiàn)與ｖｇｒＧ、六＃??或基因相毗鄰，表明它們的分泌與鄰近的核心成分有關(guān)。學(xué)者在遲鈍愛(ài)德華菌中??首先發(fā)現(xiàn)了?Ｈｅｐ依賴性效應(yīng)蛋白的易位，證實(shí)了效應(yīng)蛋白ＥｖｐＰ與Ｈｅｐ之間的直接作??用［６４］。對(duì)銅綠假單胞菌Ｈ１－Ｔ６ＳＳ中ＨｃｐＩ和Ｔｓｅ２之間相互作用的研究發(fā)現(xiàn)，Ｔｓｅ２能??夠直接與Ｈｃｐｌ相互作用，并且可以被定位到Ｈｃｐｌ小管的內(nèi)表面［６５］。此外，由銅綠??假單胞菌的Ｈ１－Ｔ６ＳＳ遞送的４種小的效應(yīng)蛋白也是由Ｈｃｐｌ固定，表明Ｈｅｐ能夠發(fā)揮??一種伴侶蛋白的作用，并且在其他細(xì)菌中可能也發(fā)揮這種作用。ＶｇｒＧ和ＰＡＡＲ蛋白??同樣也被認(rèn)為能夠特異性結(jié)合效應(yīng)蛋白，進(jìn)而能夠在分泌過(guò)程中引導(dǎo)它們的遞送。事??實(shí)上，在霍亂弧菌中，磷脂酶效應(yīng)蛋白Ｔｓｅ

第二篇試驗(yàn)研究第三章嗜水氣單胞菌中國(guó)分離株ＮＪ－３５Ｔ６ＳＳ基因簇的鑒定及Ｈｅｐ家族蛋白多樣性分析??ｄ５?ｄ１?Ｆ?ｄ３??—＞?—＞?—＞?—＞??＜—?／?＜—?＜—??６２?Ｒ?ｄ４?ｄ６??厶ｔａｒｇｅｔ?ｇｅｎｅ??圖３－ｌ嗜水氣單胞菌基因缺失構(gòu)建模式圖??Ｆｉｇ?３－ｌ?Ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｅ?ｄｅｌｅｔｉｏｎ?ｍｕｔａｎｔ?ｉｎ?Ａ．?ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ??表３－２本研究相關(guān)引物??Ｔａｂｌｅ?３－２?Ｐｒｉｍｅｒｓ?ｕｓｅｄ?ｉｎ?ｔｈｉｓ?ｓｔｕｄｙ??Ｐｒｉｍｅｒ?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ?（５ｆ?—？?３；）ａ?Ｆｕｎｃｔｉｏｎ???Ｈｃｐ－Ｆ?ＧＧＡＡＴＴＣＡＴＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＧＴＴＡＴＡＴＣＡＧ?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ／；ｃｐ?ｇｅｎｅ??（￡ｃｏＲ?Ｉ）??Ｈｃｐ－Ｒ?ＣＣＧＣＴＣＧＡＧＴＴＡＧＧＣＣＴＣＧＡＴＣＧＧＣ?（Ｘｈｏ?Ｉ）??ｈｃｐｌ－ｄ＼?ＣＡＧＧＴＣＧＡＣＴＣＴＡＧＡＧＧＡＴＣＣＴＴＧＡＴＧＴＡＧＴ?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｈｅｐ?ｌ??ＣＡＴＡＧＡＧＧＣＴＧＴＣ?（ＢａｍＷ＼）?ｄｅｌｅｔｉｏｎ?ｍｕｔａｎｔ??ｈｃｐｌ－ｄｌ?ＴＡＡＧＡＡＡＧＧＧＧＴＧＴＡＴＧＣＴＣＣＴ?Ａ?Ａ?ＡＴ?ＡＧ?ＡＴＴ??ＧＧ??ｈｃｐｌ－ｄ３?ＧＡＧＣＡＴＡＣＡＣＣＣＣＴＴＴＣＴＴＡＴＴＴＴＧＧＡＡＴＴＣＣ??ｈｃｐＪ－ｄ４?ＧＡＧＣＴＣＧＧＴＡＣＣＣＧＧＧＧＡＴＣＣＴＣＡＣＴＡＣＣＣＣ??ＧＣＡＣＡＣＴＣＴ?（Ｂａｍｌｌｌ）??ｈｃｐｌ－ｄ５?ＡＡＡＧＧＣ?ＡＴＴ?ＡＧ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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