豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是急性、高度傳染性豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea,PED）的致病原,可感染所有日齡的豬,并在哺乳仔豬中引起較高的死亡率。本研究主要對(duì)PEDV編碼的結(jié)構(gòu)或非結(jié)構(gòu)蛋白進(jìn)行表達(dá)純化,并以此為檢測(cè)抗原建立敏感有效的血清學(xué)檢測(cè)方法,對(duì)感染或免疫PEDV后不同日齡豬體內(nèi)的抗體消長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行監(jiān)測(cè);同時(shí)以制備的抗PEDV的單抗為基礎(chǔ),對(duì)PEDV入侵機(jī)制進(jìn)行初步研究。根據(jù)PEDV G2毒株（GenBank accession no.KU558701）基因序列設(shè)計(jì)特異性引物,以其cDNA為模板分別擴(kuò)增PEDVS1、E、ORF3C、非結(jié)構(gòu)蛋白nsp1、nsp2 以及nsp3 中 Ac（Acidic domain）、ADRP（ADP-ribose-1-monophosphatase domain）功能域,克隆到真核或原核表達(dá)載體中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒,利用真核或原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)相應(yīng)蛋白,并進(jìn)行層析純化,經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)、Westernblot鑒定正確后,作為免疫原,免疫新西蘭大白兔,... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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圖１－３ＳＤＳ－ＰＡＧＥ檢測(cè)ＯＲＦ３Ｃ重組蛋白（Ａ）和Ｅ重組蛋白（Ｂ）的表迗??

Ｍ．?Ｍａｒｋｅｒ；?１．未誘導(dǎo)菌；２．誘導(dǎo)菌Ｉ；?３．未誘導(dǎo)菌ＩＩ；?４．誘導(dǎo)菌ＩＩ；??５．菌ＩＩ裂解上清；６．菌ＩＩ裂解沉淀??圖１－６ＳＤＳ－ＰＡＧＥ檢測(cè)ＡＤＲＰ重組蛋白的表達(dá)??Ｆｉｇ．?１?－６?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｔｈ

Ｍ．?Ｍａｒｋｅｒ；?１．流穿液；２．含２０?ｍＭ咪哩的洗滌液；３．含４０?ｍＭ咪哩的洗滌液；??４、５均是含８０?ｍＭ咪唑的洗滌液；６、７、８均是含５００ｍＭ咮唑的洗脫液??圖１－７重組蛋白ＡＤＲＰ的純化??Ｆｉｇ．?１－７?Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬Delta冠狀病毒、豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒多重RT-PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J]. 韋學(xué)雷,梁青青,曹貝貝,張君濤,韓麗,蘭培英,胡慧.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(01)
[2]我國(guó)部分省份豬流行性腹瀉的流行病學(xué)監(jiān)測(cè)[J]. 張志,董雅琴,劉爽,吳發(fā)興,邵衛(wèi)星,李曉成.  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2014(10)
[3]廣西豬流行性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查[J]. 杜堅(jiān),蔣玉雯,白安斌,梁家幸,梁保忠,黃安國(guó),姚瑞英,陳西寧.  動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué). 2004(06)



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