豬瘟（Classical swine fever,CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重的傳染病。干擾素（Interferon,IFN）通過(guò)誘導(dǎo)干擾素刺激基因（Interferon-stimulated genes,ISGs）轉(zhuǎn)錄和表達(dá)來(lái)建立機(jī)體的天然免疫防線,在機(jī)體抵御和清除病毒過(guò)程中發(fā)揮重要作用。因此,深入探究ISGs抗病毒機(jī)制具有重要意義。在IFN信號(hào)通路中,干擾素刺激基因15（ISG15）是有效的抗病毒分子之一。ISG15通過(guò)結(jié)合靶蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞生命過(guò)程或以單體形式作用于病毒發(fā)揮其抗病毒作用。本文主要圍繞ISG15對(duì)CSFV復(fù)制的影響及抗病毒機(jī)制展開(kāi)研究,獲得了以下結(jié)果:1.ISG15具有抑制CSFV復(fù)制的作用（1）設(shè)計(jì)針對(duì)ISG15的過(guò)表達(dá)引物及3條shRNA序列分別插入慢病毒過(guò)表達(dá)載體和干擾載體中,借助重組慢病毒的包裝和感染建立了穩(wěn)定過(guò)表達(dá)和穩(wěn)定敲低ISG15表達(dá)的豬肺泡巨噬細(xì)胞（Porcine alveolar macrophage,PAM）株。用CSFV石門(mén)株分別感染過(guò)表達(dá)和敲低ISG15的細(xì)胞株,檢... 

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【部分圖文】：

豬瘟病毒基因組結(jié)構(gòu)模式圖（引自SuLietal.2017）

導(dǎo)對(duì)于建立有效的細(xì)胞自主抗病毒程序至關(guān)重要。這些抗病毒程序的建立由 IRF 與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子和轉(zhuǎn)錄激活因子共同調(diào)節(jié)，例如 IRF3 和 IRF7 作用于 IFN 產(chǎn)生過(guò)程；STAT1-STAT2-IRF9 則作用于 ISG 的表達(dá)（如圖 2-1）(Stark et al. 2012)。由于這些轉(zhuǎn)錄因子是對(duì)抗病毒反應(yīng)起決定性作用的最終調(diào)節(jié)因子，因此其識(shí)別染色質(zhì)、調(diào)節(jié)核小體結(jié)構(gòu)、與 RNA 聚合酶結(jié)合以及與一些特異性或非特異性的轉(zhuǎn)錄因子相互作用功能的分子機(jī)制具有基礎(chǔ)性生物醫(yī)學(xué)意義。機(jī)體內(nèi) IFN 產(chǎn)生的起始于非自身核酸監(jiān)測(cè)以及病原體識(shí)別受體的檢測(cè)介導(dǎo)的 IRF和 NF-κB 轉(zhuǎn)錄因子的激活(Bruns et al. 2012)。這些 IFN 調(diào)節(jié)因子通過(guò)協(xié)同作用和獨(dú)立激活的方式激活Ⅰ型 IFN 基因以及許多主要的抗病毒應(yīng)答基因的表達(dá)(Apostolou et al.2008; Freaney et al. 2013)。受病毒感染的細(xì)胞分泌到細(xì)胞外的 IFN 與其跨膜受體結(jié)合，通過(guò)酪氨酸磷酸化和 SH2 結(jié)構(gòu)域誘導(dǎo)的異二聚化激活 STAT1 和 STAT2。STATs 再與IRF9 結(jié)合形成 ISGF3(Borden et al. 2007)。ISGF3 通過(guò)募集一般和特異性的共激活因子重塑染色質(zhì)和組裝 PolⅡ的方式來(lái)啟動(dòng) ISGs 的轉(zhuǎn)錄。IFN 和 ISGs 效應(yīng)子的表達(dá)迅速在機(jī)體中產(chǎn)生廣泛且強(qiáng)大的細(xì)胞抗病毒狀態(tài)。調(diào)節(jié) IFN 和 ISGs 基因網(wǎng)絡(luò)的核心就是協(xié)調(diào)染色質(zhì)重塑、活化共激活因子和 PolⅡ的組裝的過(guò)程，以激活 IFN 和 ISGs 表達(dá)。

圖 2-2 ISG15 的胞內(nèi)和胞外活性（引自 Manuel Albert et al. 2018）Fig. 2-2 Intracellular and extracellular activities of ISG15 (From Manuel Albert et al. 2018)2.2.2 ISG15 和 ISG 化的抗病毒作用在發(fā)現(xiàn) ISG15 敲除小鼠比其野生型更易受病毒感染后，ISG15 和 ISG 化相關(guān)的抗病毒活性已被廣泛研究(Perng et al. 2018)。用 ISG15 敲除小鼠的早期研究表明，ISG15對(duì)甲型流感病毒（Influenza virus，IAV）、單純皰疹病毒（Herpes simplex virus-1，HSV-1）和辛德畢斯病毒（Sindbis virus，SINV）的致死性感染具有保護(hù)作用(Lenschow et al. 2007)。同樣，缺乏 UbE1l（ISG15 的 E1 酶）的小鼠也更容易受到 SINV 的致死性感染(Giannakopoulos et al. 2009)。此外，重組嵌合表達(dá)外源型 ISG15 的 SINV 疫苗可保護(hù)IFNAR 敲除小鼠免受全身和致死性感染，而將 ISG15 與靶蛋白共價(jià)結(jié)合位點(diǎn)突變的突變體則沒(méi)有顯示這種保護(hù)作用，這表明是 ISG15 抗病毒作用依靠 ISG 化過(guò)程的參與(Lenschow et al. 2005)。而且，這種抗病毒作用可能是源于病毒和細(xì)胞蛋白的 ISG 化。也有研究發(fā)現(xiàn)游離型 ISG15 可以促進(jìn)針對(duì)基孔肯雅病毒（Chikungunya virus，CHIKV）感染的抗病毒反應(yīng)(Werneke et al. 2011)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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