白菜類作物屬于十字花科（Cruciferae）蕓薹屬（Brassica）,其中不結(jié)球白菜（Brassica rapa ssp.chinensis）原產(chǎn)于中國,起源于長江下游太湖地區(qū),栽培歷史悠久,是我國廣泛種植的蔬菜作物之一。不結(jié)球白菜有著豐富的遺傳資源,國內(nèi)外廣泛引種和雜交選育,又形成了許多新的變異類型,使其遺傳背景變得更加復(fù)雜。不結(jié)球白菜不同品種的開花時間存在廣泛變異。例如,同樣在9月播種,‘五月慢’在5月開花而‘四九菜心’在11月開花。不結(jié)球白菜不同品種開花時間必須進行調(diào)整,以保證它們相互匹配。本研究分離了三個不結(jié)球白菜基因BcMAF1、BcMAF2和BcFLC2,分析了它們的組織定位及亞細胞定位,利用轉(zhuǎn)基因擬南芥和不結(jié)球白菜沉默植株研究了功能,利用酵母單雜、雙熒光素酶試驗結(jié)合定量PCR結(jié)果篩選了各自的下游基因。同時,利用sRNA測序技術(shù)挖掘不結(jié)球白菜春化相關(guān)的miRNA。研究結(jié)果如下:1采用同源克隆方法從不結(jié)球白菜中克隆得到BcMAF1的cDNA全長。分別在擬南芥和不結(jié)球白菜中對該基因進行功能描述。亞細胞定位和序列分析表明BcMAF1是一個核定位蛋白,包含了一個保守的MADS-... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２?“禹氏三角”模型圖（Ｃｈｅｎｇ?ｅｔａｌ．，２０１７）??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｔｈｅ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?“ｔｒｉａｎｇｌｅ?ｏｆ?Ｕ”（Ｃｈｅｎｇ?ｅｔ?ａｌ．，２０１７）??

?第二章不結(jié)球白菜抑制開花基因＆的分離和功能分析???３５Ｓ?ＧＦＰ?＾?ＣａＭＶ３５ｓ＂＾｜?ＨｙｇＲ?｜｜?ＮＯＳ?Ｕ?ＣａＭＶ３５Ｓ?）｜￣?ＧＦＰ?ｆ｜?ＮＯＳ?ｊ－??ＬＢ?ＲＢ??３５Ｓ?ＢＣＭＡＦ１－ＧＦＰ?＾?ＣａＭＶ３５ｓ＂＾｜?ＨｙｇＲ?）｜?ＮＯＳ?ＵＴａＭＶ３５Ｓ?）ＴｂｃＭ＞ＡＦＹ?｜?ＧＦＰ?［）?ＮＯｓ＂｜ｉ??ＬＢ?＾?ＲＢ??Ｂ?ＤＡＰ?Ｉ?Ｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?Ｂｒｉｇｈｔ?ｆｉｅｌｄ?Ｍｅｒｇｅ??圖２－３?ＢｃＭＡＦｌ蛋白的亞細胞定位??八．３５＆心／７？和＾５５１：價從４／７－（＾７５的載體結(jié)構(gòu)；８．煙草中瞬時表達３５５＊．心／：７）（標尺長度為５０叫１１）和??辦Ｓ：＆Ｍ４Ｆ／－Ｇ／ｒＰ融合蛋白（標尺長度為２０?ｐｍ）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＢｃＭＡＦｌ?ｐｒｏｔｅｉｎ??Ａ．?３５Ｓ．?ＧＦＰ?ａｎｄ?３５Ｓ：ＢｃＭＡＦｌ－ＧＦＰ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ；?Ｂ．?Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?３５Ｓ．?ＧＦＰ?（Ｓｃａｌｅ?ｂａｒｓ?＝?５０?＾ｉｍ）?ａｎｄ??３５Ｓ：ＢｃＭＡＦｌ－ＧＦＰ?ｆｕｓｉｏｎ?ｐｒｏｔｅｉｎ?（Ｓｃａｌｅ?ｂａｒｓ?＝?２０?ｊｉｍ）?ｉｎ?ｔｏｂａｃｃｏ?ｌｅａｖｅｓ??３．３擬南芥過表達導致晚開花??首先在擬南芥中過表達ＳｃＭＡＦ／來研究其在開花調(diào)控中的作用。在６個Ｔ３轉(zhuǎn)基??因株系（＃１、＃４、＃８、＃１１、＃１６和＃２３）中擴增到５９７?ｂｐ的片段（５ｃＭ４Ｆ／編碼序列），??說明５ｃＭ４Ｆ／已轉(zhuǎn)入這６個株系（圖２－４Ａ）。在４個株系（＃８、＃１１、

ｅｒ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?＃１?＃４?＃８?＃１１?＃１６?＃２３??ｌｏｏｏ?ｂｐ【?－ｍｈ、？??７物?＾?５９７?ｂｐ??５００?ｂｐ?＾＾２＇；：??Ｂ?３５Ｓ：ＢｃＭＡＦ１－ＧＦＰ?３５Ｓ：ＢｃＭＡＦ１－ＧＦＰ??＃１?＃４?Ｍａｒｋｅｒ?＃８?＃１１?＃１６?＃２３??．一＾?疆—５�？�??Ｃ?ＤＡＰＩ?Ｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?Ｂｒｉｇｈｔ?ｆｉｅｌｄ?Ｍｅｒｇｅ??３５Ｓ?ＢｃＭＡＦｌ－ＧＦＰ?Ｉ?１?Ｌ?卜：．：一?Ｄ，：．Ｖ＾?Ｓ??圖２－４?Ｔ３轉(zhuǎn)基因植株鑒定??Ａ．?Ｔ３轉(zhuǎn)基因擬南芥過表達空載（對照）和５ｃＡ以ｆ７?（＃１、＃４、＃８、＃１１、＃１６和＃２３）的ＰＣＲ檢測。擴增片段是??萬ｃＭ４ｆ７的編碼區(qū)（５９７?ｂｐ）?；?Ｂ．轉(zhuǎn)基因擬南芥一６５１６１＊１＾丨〇１檢測＆從４／；７－（＾：７？融合蛋白。融合蛋白約５０１＾＾。??ｍａｒｋｅｒ的條帶是５０ｋＤａ；?Ｃ．掰、＃／６和＃２３幼苗的ＧＦＰ熒光觀察??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｔ３?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ?ｐｌａｎｔｓ??Ａ．?ＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?Ｔ３?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ?ｐｌａｎｔｓ?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ?ｅｍｐｔｙ?ｖｅｃｔｏｒ?（ｃｏｎｔｒｏｌ）?ａｎｄ?ＢｃＭＡＦｌ?（＃１．?＃４．?＃８．?＃１１．??＃１６．?ａｎｄ?＃２３）．?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ｆｒａｇｍｅｎｔｓ?ｗｅｒｅ?ｔｈｅ?ＢｃＭＡＦｌ?ｃｏｄｉｎｇ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｗｉｔｈｏｕｔ?ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ｃｏｄｏｎ?（５９７?ｂｐ）：?Ｂ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]不結(jié)球白菜育種研究新進展[J]. 侯喜林.  南京農(nóng)業(yè)大學學報. 2003(04)



本文編號：3371962