高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome,HP-PRRS）,又稱高致病性豬藍(lán)耳病,被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病,其致病因子為高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV）。自2006年我國(guó)首次爆發(fā)HP-PRRS后,十多年來(lái)該病已經(jīng)給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。HP-PRRS主要是以各階段豬群的呼吸系統(tǒng)疾病以及妊娠母豬早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎等繁殖障礙為特征,并且造成較高的死亡率。近年來(lái),隨著HP-PRRS防控手段的多元化,疫病態(tài)勢(shì)趨于良好,但仍存在散毒范圍較廣、毒株變異等問(wèn)題,防控形勢(shì)依然嚴(yán)峻�！秶�(guó)家高致病性豬藍(lán)耳病防治指導(dǎo)意見(jiàn)（2017—2020年）》中指出,堅(jiān)持以預(yù)防為主仍是當(dāng)前的防控原則。進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研制安全有效的HP-PRRS疫苗將有利于從源頭控制疫病發(fā)生,有助于最終實(shí)現(xiàn)凈化目標(biāo)。病毒載體疫苗因兼?zhèn)漭d體病毒... 

【文章來(lái)源】：軍事科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：127 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

重組病毒的構(gòu)建策略Figure1.1Constructionstrategyofrecombinantviruses

軍事科學(xué)院博士學(xué)位論文第26頁(yè)提取HP-PRRSVGD株RNA，并反轉(zhuǎn)錄成cDNA。以其為模板，通過(guò)ORF3-F/ORF5-R引物進(jìn)行PCR，成功擴(kuò)增得到大小為1695bp的ORF3-ORF5片段（圖1.2）。M1.DL5000M2.DL20001.目的片段ORF3-ORF52.陰性對(duì)照?qǐng)D1.2ORF3-ORF5目的片段的獲取Figure1.2AmplificationresultsofORF3-ORF5fragments以pMD19-T為載體，通過(guò)TA連接酶成功構(gòu)建質(zhì)粒19T-ORF3-ORF5。將該質(zhì)粒進(jìn)行HindIII和BamHI雙酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定呈現(xiàn)出雙條帶（2692bp和1695bp），與預(yù)期的載體片段和目的片段大小相一致（圖1.3）。將質(zhì)粒送往吉林庫(kù)美生物科技有限公司測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與預(yù)期的目的片段相符。M1.DL2000M2.DL50001.原質(zhì)粒2.雙酶切產(chǎn)物圖1.3質(zhì)粒19T-ORF3-ORF5雙酶切鑒定結(jié)果Figure1.3Identificationof19T-ORF3-ORF5bydoubleenzymesdigestion1.3.2同源重組目的片段的獲取

軍事科學(xué)院博士學(xué)位論文第26頁(yè)提取HP-PRRSVGD株RNA，并反轉(zhuǎn)錄成cDNA。以其為模板，通過(guò)ORF3-F/ORF5-R引物進(jìn)行PCR，成功擴(kuò)增得到大小為1695bp的ORF3-ORF5片段（圖1.2）。M1.DL5000M2.DL20001.目的片段ORF3-ORF52.陰性對(duì)照?qǐng)D1.2ORF3-ORF5目的片段的獲取Figure1.2AmplificationresultsofORF3-ORF5fragments以pMD19-T為載體，通過(guò)TA連接酶成功構(gòu)建質(zhì)粒19T-ORF3-ORF5。將該質(zhì)粒進(jìn)行HindIII和BamHI雙酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定呈現(xiàn)出雙條帶（2692bp和1695bp），與預(yù)期的載體片段和目的片段大小相一致（圖1.3）。將質(zhì)粒送往吉林庫(kù)美生物科技有限公司測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與預(yù)期的目的片段相符。M1.DL2000M2.DL50001.原質(zhì)粒2.雙酶切產(chǎn)物圖1.3質(zhì)粒19T-ORF3-ORF5雙酶切鑒定結(jié)果Figure1.3Identificationof19T-ORF3-ORF5bydoubleenzymesdigestion1.3.2同源重組目的片段的獲取

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]美洲型、歐洲型PRRSV及PCV2基因工程疫苗構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫研究[D]. 任靜強(qiáng).吉林大學(xué) 2014
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碩士論文
[1]表達(dá)高致病性豬藍(lán)耳病GP3、GP5基因DNA疫苗構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫研究[D]. 趙冠宇.吉林大學(xué) 2019
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本文編號(hào)：3342297