甜瓜（Cucumis melo L.）是世界各地廣泛栽培的園藝作物,具有重要的經(jīng)濟價值。甜瓜生長期相對較短,基因組相對較小,依其果實成熟時呼吸特性不同,可分為呼吸躍變型和非呼吸躍變型兩類,這些特點使得甜瓜適宜作為研究果實發(fā)育和性別分化的模式植物。microRNA（miRNA）是一種廣泛存在于動植物中的非編碼小RNA調(diào)控分子。在植物中,miRNA通常長20-24nt,其前體由RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄形成。miRNA在植物生長發(fā)育、生物和非生物脅迫耐受以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等過程中發(fā)揮著重要作用,然而miRNA在果實發(fā)育、成熟過程中的作用的研究還相對較少。因此更深入的了解miRNA在果實成熟過程中的作用有助于加深我們對果實發(fā)育成熟過程的認識,從而更好的提高果實的品質(zhì)和經(jīng)濟價值。為此,本研究以甜瓜品種河套蜜瓜為實驗材料,河套蜜瓜為內(nèi)蒙古自治區(qū)巴彥淖爾市特產(chǎn),獲得全國農(nóng)產(chǎn)品地理標志。實驗以河套蜜瓜自交系果實為材料,利用二代測序技術(shù)、瞬時表達技術(shù)、構(gòu)建過表達和基因編輯的穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化植株等方法對甜瓜果實中的miRNA進行了分析、鑒定和功能的研究,主要的結(jié)果與結(jié)論如下:（1）以甜瓜果實四個發(fā)育時期（生長期（18 D... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：134 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

miRNA的生物合成（引自Tzuu-fenLeeetal.，2012）

10圖1.2miRNA在果實生長發(fā)育中的作用（引自Chenetal.2018）Figure1.2theroleofmiRNAinfruitgrowthanddevelopment(fromChenetal.2018)1.2.2果實生長發(fā)育中miRNA與其靶向的植物激素信號途徑相關(guān)基因植物生長素在植物的生長、發(fā)育等過程中起到重要的作用。ARFs是植物生長素信號途徑的下游應(yīng)答的轉(zhuǎn)錄因子，在生長素信號途徑中起到重要作用。植物中miR160、miR167和miR390負調(diào)節(jié)不同ARF的表達。擬南芥中miR160的靶向三個ARF基因（ARF10、ARF16和ARF17），擬南芥miR160a的表達受到生長素的正向調(diào)節(jié)，同時還發(fā)現(xiàn)在miR160a基因上游有三個生長素應(yīng)答元件（AuxRE），這三個元件的受損會導(dǎo)致不正常的miR160a的表達，進而出現(xiàn)異常的胚、種子和花的發(fā)育，但是生長素是如何與miR160a作用進而調(diào)節(jié)擬南芥生長的還需要進一步的研究[61]。而在番茄中低表達miR160會出現(xiàn)不正常的梨形的果實形態(tài)。提

21圖2.1果實采后呼吸速率測定結(jié)果9-1—9-5：授粉后40天果實樣品。Figure.2.1Post-harvestrespirationrateoffruit9-1-9-5:40daysafterpollinationfruitsamples.2015年，僅對18DAP和36DAP的果實樣品進行了測序；2016年測定了呼吸躍變期果實，同時采集了生長期（18DAP，G)、成熟期（36DAP，R）、呼吸躍變期（Climacteric，C，約40DAP）和呼吸躍變后期（Post-climacteric，P，約42DAP）的果實樣品并隨后進行測序。兩次測序均采用相同的實驗方法和測序公司進行測序。后續(xù)的分析結(jié)果以2016年測序結(jié)果為主，2015年測序結(jié)果作為對2016年實驗的驗證分析。2.1.2實驗試劑TRIzonReagent（康為世紀，CW0580M）,DNaseI（Takara，2270A），RNase-freeWater（Takara，9012），氯仿、異丙醇、無水乙醇、TRIS堿、冰醋酸、Na2EDTA等均為進口或國產(chǎn)分析純試劑。


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