實蠅Fruit Flies,隸屬于雙翅目Diptera,實蠅科Tephritidae,全世界廣泛分布,是多種熱帶、亞熱帶水果和蔬菜的重要害蟲,以卵、幼蟲或蛹隨寄主果實、包裝物或交通工具等進行遠距離的人為傳播。由于非成蟲態(tài)實蠅難以進行形態(tài)學(xué)鑒定,其分子鑒定成為植物檢疫以及生物入侵防控領(lǐng)域亟需開展的研究。本研究針對我國檢疫性實蠅開展分子鑒定技術(shù)體系的研究。主要研究結(jié)果如下：（1）構(gòu)建了我國檢疫性實蠅DNA條形碼庫,其中收錄來自亞洲、大洋洲、非洲、歐洲、北美洲和南美洲的實蠅DNA條形碼序列共計6屬181種2252條。以果實蠅屬為例,對實蠅DNA條形碼鑒定有效性進行分析,結(jié)果表明DNA條形碼可實現(xiàn)除復(fù)合體以外的實蠅物種的準確鑒定。（2）基于DNA條形碼序列,設(shè)計并篩選出27種我國主要檢疫性實蠅（墨西哥按實蠅Anastrepha ludens.西印度按實蠅A.obliqua.蒲桃果實蠅Bactrocera albistrigata、番石榴果實蠅B.correcta、楊桃果實蠅B.carambolae、橘小實蠅B.dorsalis、辣椒果實蠅B.latifrons、銹紅果實蠅B.rubigina、... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：179 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 我國檢疫性實蠅概述
        1.1.1 檢疫性實蠅種屬及分類特征
        1.1.2 實蠅生活史及傳播途徑
        1.1.3 實蠅進境檢疫截獲及監(jiān)測情況
        1.1.4 實蠅復(fù)合體研究進展
    1.2 主要分子鑒定技術(shù)概述
        1.2.1 DNA條形碼技術(shù)
        1.2.2 常規(guī)PCR技術(shù)
        1.2.3 實時熒光PCR技術(shù)
        1.2.4 集成流路芯片技術(shù)
    1.3 研究內(nèi)容與目的意義
        1.3.1 研究內(nèi)容
        1.3.2 研究目的和意義
        1.3.3 技術(shù)路線
第二章 我國檢疫性實蠅DNA條形碼庫的構(gòu)建
    2.1 研究材料
        2.1.1 實蠅樣品的采集與保存
        2.1.2 主要儀器與試劑
    2.2 研究方法
        2.2.1 實蠅形態(tài)鑒定
        2.2.2 實蠅DNA條形碼序列測定
        2.2.3 實蠅DNA條形碼庫的建立
        2.2.4 果實蠅屬DNA條形碼鑒定有效性分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 實蠅樣品的采集與形態(tài)鑒定
        2.3.2 實蠅DNA條形碼序列測定
        2.3.3 實蠅DNA條形碼庫
        2.3.4 果實蠅屬DNA條形碼鑒定有效性
    2.4 小結(jié)
第三章 我國檢疫性實蠅常規(guī)PCR鑒定技術(shù)研究
    3.1 研究材料
        3.1.1 供試實蠅樣品
        3.1.2 主要儀器與試劑
    3.2 研究方法
        3.2.1 特異引物設(shè)計
        3.2.2 特異引物篩選與反應(yīng)體系優(yōu)化
        3.2.3 常規(guī)PCR靈敏度檢測
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 篩選出的特異引物
        3.3.2 常規(guī)PCR技術(shù)方法的建立
        3.3.3 引物特異性及靈敏度檢測
    3.4 小結(jié)
第四章 我國檢疫性實蠅實時熒光PCR鑒定技術(shù)研究
    4.1 研究材料
        4.1.1 供試實蠅樣品
        4.1.2 主要儀器與試劑
    4.2 研究方法
        4.2.1 TaqMan-MGB探針設(shè)計
        4.2.2 TaqMan-MGB探針篩選與反應(yīng)體系優(yōu)化
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 篩選出的TaqMan-MGB探針
        4.3.2 實時熒光PCR技術(shù)方法的建立
        4.3.3 TaqMan-MGB探針和引物特異性及靈敏度檢測
    4.4 小結(jié)
第五章 我國檢疫性實蠅集成流路芯片鑒定技術(shù)研究
    5.1 研究材料
        5.1.1 供試實蠅樣品
        5.1.2 主要儀器與試劑
    5.2 研究方法
        5.2.1 反應(yīng)體系優(yōu)化
        5.2.2 引物和TaqMan-MGB探針特異性檢測
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 集成流路芯片技術(shù)方法的建立
        5.3.2 引物和TaqMan-MGB探針特異性
    5.4 小結(jié)
第六章 我國檢疫性實蠅分子鑒定技術(shù)的初步應(yīng)用及比較
    6.1 研究材料
        6.1.1 供試實蠅樣品
        6.1.2 主要儀器與試劑
    6.2 研究方法
        6.2.1 DNA條形碼技術(shù)的初步應(yīng)用
        6.2.2 常規(guī)PCR技術(shù)的初步應(yīng)用
        6.2.3 實時熒光PCR技術(shù)的初步應(yīng)用
        6.2.4 集成流路芯片技術(shù)的初步應(yīng)用
        6.2.5 四種分子鑒定技術(shù)的比較
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 非成蟲態(tài)實蠅基因組DNA濃度及純度
        6.3.2 基于DNA條形碼技術(shù)的鑒定結(jié)果
        6.3.3 基于常規(guī)PCR技術(shù)的鑒定結(jié)果
        6.3.4 基于實時熒光PCR技術(shù)的鑒定結(jié)果
        6.3.5 基于集成流路芯片技術(shù)的鑒定結(jié)果
        6.3.6 四種分子鑒定技術(shù)的比較結(jié)果
    6.4 小結(jié)
第七章 結(jié)論與討論
    7.1 結(jié)論
    7.2 討論
        7.2.1 本研究的創(chuàng)新性
        7.2.2 本研究的局限性
        7.2.3 實蠅分子鑒定技術(shù)研究與應(yīng)用展望
參考文獻
致謝
附錄
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]實蠅類害蟲分子鑒定研究進展[J]. 陳韶萍,黃振,郭瓊霞,劉長明.  生物安全學(xué)報. 2014(03)
[2]SYBR Green實時熒光PCR快速鑒定棗實蠅技術(shù)[J]. 程曉甜,阿地力·沙塔爾,張偉,李新泉,瑪依拉.  林業(yè)科學(xué). 2014(04)
[3]棗實蠅及其他5種檢疫性實蠅的PCR-RFLP快速鑒定[J]. 程曉甜,阿地力·沙塔爾,張偉,李新泉.  南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2014(01)
[4]利用DNA條形碼技術(shù)對截獲瓜實蠅幼蟲的鑒定研究[J]. 龔秀澤,Buahom Nopparat,盧厚林,李志紅,張君潮.  植物檢疫. 2014(01)
[5]棗實蠅特異引物PCR鑒定技術(shù)[J]. 程曉甜,阿地力·沙塔爾,張偉,溫俊寶,李新泉,陳夢.  林業(yè)科學(xué). 2013(11)
[6]實蠅科害蟲入侵防控技術(shù)研究進展[J]. 李志紅,姜帆,馬興莉,方焱,孫壯志,秦譽嘉,王巧鈴.  植物檢疫. 2013(02)
[7]數(shù)字PCR技術(shù)進展[J]. 林彩琴,姚波.  化學(xué)進展. 2012(12)
[8]以霧靈山夜蛾科為材料評估進化模型對DNA條碼分類的影響[J]. 遲美妍,韓輝林,高強,楊聰慧,金倩,李俊,陳付強,武春生,張愛兵.  昆蟲學(xué)報. 2012(10)
[9]AllGlo實時熒光PCR快速檢測6種按實蠅[J]. 徐浪,余道堅,李建光,王銀竹,陳志粦.  植物檢疫. 2010(05)
[10]中國果實蠅屬一新紀錄種（雙翅目,實蠅科）（英文）[J]. 劉曉飛,汪興鑒,葉輝.  動物分類學(xué)報. 2009(03)

博士論文
[1]檢疫性實蠅分子生物學(xué)快速鑒定技術(shù)的研究[D]. 余道堅.中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院） 2005

碩士論文
[1]DNA條形碼技術(shù)在主要實蠅類害蟲識別中的應(yīng)用[D]. 劉慎思.西南大學(xué) 2012
[2]地中海實蠅及其近緣種和桔小實蠅復(fù)合種基因芯片的研制及應(yīng)用[D]. 李文芬.湖南師范大學(xué) 2008
[3]五種實蠅的分子系統(tǒng)發(fā)育分析與分子快速鑒定研究[D]. 張長禹.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[4]陜西省常見四種實蠅的分子鑒定[D]. 張紅梅.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2004



本文編號：3294830