α干擾素（IFN-α）是一類具有抗病毒活性、免疫調(diào)節(jié)活性、抗腫瘤活性的細(xì)胞因子,主要來源于漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞（pDCs）。多項(xiàng)研究證實(shí),豬α干擾素（pIFN-α）能在體內(nèi)和體外抑制多種病毒的增殖,具有良好的療效。從白細(xì)胞分離IFN-α是制備IFN-α常用的一種方法,但存在成本高、安全性低、質(zhì)量控制不統(tǒng)一、以及療效不穩(wěn)定等缺點(diǎn)。開發(fā)高活性、低成本、易于規(guī)模生產(chǎn)的重組豬干擾素（rPoIFN-α）制劑對(duì)防治豬的病毒性疫病具有重要意義。本研究采用畢赤酵母菌KM71表達(dá)系統(tǒng)獲得rPoIFN-α,并進(jìn)行了純化和凍干,體內(nèi)外試驗(yàn)結(jié)果顯示其具有較強(qiáng)的抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）復(fù)制作用,表明rPoIFN-α在豬病毒性疾病防控方面具有重要應(yīng)用前景。主要內(nèi)容如下:1.重組豬α干擾素在巴斯德畢赤酵母中的高效發(fā)酵表達(dá)與純化采用7L高密度發(fā)酵和Do-Stat反饋控制模式,進(jìn)行畢赤酵母菌KM71培養(yǎng)及誘導(dǎo)表達(dá),建立了畢赤酵母中高效分泌表達(dá)rPoIFN-α工藝技術(shù)。并依次用親和層析方法、離子交換方法、分子篩三種柱層析方法進(jìn)行了純化,用SDS-PAGE進(jìn)行純度檢測(cè)。結(jié)果表明,誘導(dǎo)84h時(shí),rPoIFN-α表... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２－５不同誘導(dǎo)時(shí)間表達(dá)ｒＰｏｌＦＮ－ａ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析

圖２－６?ｉ＇ＰｏＩＦＮ－ａ的Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析??Ｍ：蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)；ＬＫＭ７１對(duì)照；?丨：ＫＭ７１對(duì)照；２－５：誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間分別為２４ｈ、??

圖２－９不同誘導(dǎo)時(shí)間ＫＭ７１表達(dá)ｒＰｏＩＦＮ－ｃｔ??Ｍ：蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)；１－４：誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間分別為１２ｈ、３６ｈ、６０ｈ、８４ｈ??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]口蹄疫病毒多基因及豬α干擾素共表達(dá)載體的構(gòu)建及其免疫豚鼠效果研究[J]. 鄭華斌,張中旺,呂建亮,潘麗,張永光.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2017(05)
[2]甘油及甲醇補(bǔ)料策略對(duì)畢赤酵母表達(dá)豬α-干擾素的影響[J]. 王丙蓮,馮東,梁曉輝,史建國(guó),劉仲匯.  激光生物學(xué)報(bào). 2016(06)
[3]重組豬α干擾素治療高致病性豬藍(lán)耳病的研究[J]. 王韋華,范曉玲.  基層醫(yī)學(xué)論壇. 2016(04)
[4]不同補(bǔ)料方式對(duì)釀酒酵母高密度發(fā)酵的影響[J]. 榮博涵,甄玉國(guó),趙小麗,劉乙辰,冀紅芹.  中國(guó)釀造. 2015(02)
[5]干擾素在控制禽病毒性傳染病上的應(yīng)用[J]. 許英民.  獸醫(yī)導(dǎo)刊. 2015(03)
[6]重組干擾素-α增強(qiáng)口蹄疫重組疫苗免疫效果的研究[J]. 蘇春霞,段相國(guó),曹瑞兵,陳溥言.  寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(12)
[7]重組干擾素-α增強(qiáng)口蹄疫重組疫苗誘導(dǎo)濾泡輔助性T細(xì)胞的研究[J]. 蘇春霞,段相國(guó),徐廣賢,鄭潔.  免疫學(xué)雜志. 2014(12)
[8]基于乙醇在線測(cè)量的DO-Stat甘油流加策略穩(wěn)定重組畢赤酵母生產(chǎn)豬α干擾素的性能[J]. 侯國(guó)力,高敏杰,丁健,梁克學(xué),于瑞嵩,李震,史仲平.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2014(01)
[9]豬基因工程干擾素對(duì)PCV2滅活疫苗抗體水平的影響[J]. 章紅兵.  金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào). 2013(03)
[10]畢赤酵母工程菌高密度發(fā)酵的研究進(jìn)展[J]. 夏姍,武福軍,趙洪亮,薛沖,劉志敏.  生物技術(shù)通訊. 2013(01)



本文編號(hào)：3241060