主要組織相容性復(fù)合體I（Major Histocompatibility Complex,MHCI）表達在有核細胞表面,遞呈內(nèi)源性抗原至CD8+T淋巴細胞,使其識別并清除病毒感染的細胞或癌細胞。近三十年來人和鼠MHC I類分子抗原加工和遞呈的相關(guān)研究頗為廣泛。但有關(guān)貓MHC I（Feline Leucocyte Antigen,FLA I）分子多態(tài)性的研究報道較少,尤其是在結(jié)構(gòu)生物學(xué)領(lǐng)域的研究。貓免疫缺陷病毒（Feline immunodeficiency virus,FIV）是引起貓獲得性免疫缺陷綜合征的重要病原體,與人類免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）同屬于慢病毒屬并具有相似的感染過程。因此,FIV/貓成為研究HIV感染的最小天然模型。MHC I分子能夠呈遞病毒多肽供細胞毒性T細胞識別,對于清除HIV等病毒的感染具有關(guān)鍵作用。但FLAI分子的結(jié)構(gòu)和和功能并不清晰,則限制了對于抗FIV感染的深入研究。首先,本文通過PCR技術(shù)從12只家貓的外周血淋巴細胞中克隆了24條FLA I的E等位基因序列,進行多態(tài)性分析。將組成MHCI多肽結(jié)合槽（P... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 引言
    1.1 MHC Ⅰ類分子的研究進展
        1.1.1 MHC分子的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 MHC Ⅰ類分子的功能
        1.1.3 病原和腫瘤逃逸MHC Ⅰ類分子遞呈抗原策略
        1.1.4 MHC Ⅰ類分子的結(jié)構(gòu)
        1.1.5 基于MHC技術(shù)檢測抗原應(yīng)答T細胞的研究進展
        1.1.6 貓MHC Ⅰ類分子的研究進展
        1.1.7 FIV的基因組結(jié)構(gòu)和分子特征
        1.1.8 CD8分子的結(jié)構(gòu)
    1.2 研究目的與意義
    1.3 研究內(nèi)容和技術(shù)路線
    1.4 研究目標
第二章 FLA Ⅰ多態(tài)性分析
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 貓
        2.2.2 載體及菌株
        2.2.3 主要試劑
        2.2.4 儀器設(shè)備
        2.2.5 常用溶液及試劑的配制
    2.3 方法
        2.3.1 引物設(shè)計
        2.3.2 貓外周血淋巴細胞的分離
        2.3.3 總RNA提取
        2.3.4 FLA Ⅰ基因克隆
        2.3.5 軟件及公式
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 FLA Ⅰ基因擴增與鑒定
        2.4.2 FLA Ⅰ基因序列的測定及分析
        2.4.3 FLA Ⅰ等位基因系統(tǒng)進化樹分析
        2.4.4 FLA Ⅰ α1、α2和α3各區(qū)變異分析
    2.5 討論
        2.5.1 FLA Ⅰ的克隆及其分子特征
        2.5.2 FLA Ⅰα1、α2和α3區(qū)氨基酸變異頻率的分析
        2.5.3 高變異位點對FLA Ⅰ多肽遞呈規(guī)律的影響
    2.6 小結(jié)
第三章 pFLA Ⅰ遞呈抗原多肽功能機制研究
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 載體與菌株
        3.2.2 引物設(shè)計與合成
        3.2.3 多肽的預(yù)測與合成
        3.2.4 主要試劑
        3.2.5 儀器設(shè)備
        3.2.6 常用溶液及配制
    3.3 方法
        3.3.1 FLA-E~*01801_(-63E/N)和FLA-E~*01801_(-167W/S)表達載體的構(gòu)建
        3.3.2 FLA-E~*01801_(-63E/N)和FLA-E~*01801_(-167W/S)分子的表達
        3.3.3 FLA-E~*01801_(-63E/N)和FLA-E~*01801_(-167W/S)包涵體的提取
        3.3.4 FLA-E~*01801_(-63E/N)或FLA-E~*01801_(-167W/S)、fβ2m及多肽的體外共復(fù)性與純化
        3.3.5 FLA-E~*01801_(-167W/SRMA-PlD)蛋白結(jié)晶
        3.3.6 FLA-E~*01801_(-RMA)和FLA-E~*01801_(-167W/S-RMA-PlD)結(jié)構(gòu)分析
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 FLA-E~*01801_(-63E/N)和FLA-E~*01801_(-167W/S)胞外區(qū)成熟肽表達載體的構(gòu)建
        3.4.2 FLA-E~*01801_(-63E/N)、FLA-E~*0180_(167W/S)、fβ2m蛋白表達
        3.4.3 FLA-E~*01801_(-167W/s-RMA-PlD)體外復(fù)性結(jié)果
        3.4.4 FLA-E~*01801_(-167W/S-RMA-PlD)復(fù)合物蛋白的結(jié)晶、數(shù)據(jù)收集及結(jié)構(gòu)解析
        3.4.5 FLA-E~*01801_(-RMA9)和FLA-E~*01801_(-167W/S-RMA-PlD)蛋白晶體結(jié)構(gòu)分析
    3.5 討論
        3.5.1 A口袋的限制性
        3.5.2 A口袋限制性因素的分析
        3.5.3 FIV的抗原肽譜
    3.6 小結(jié)
第四章 pFLA Ⅰ結(jié)合基序的鑒定
    4.1 引言
    4.2 材料
        4.2.1 隨機肽的合成
        4.2.2 FLA-E~*01801、fβ2m蛋白/分子生物學(xué)試劑/菌株/儀器
    4.3 方法
        4.3.1 FLA-E~*01801、fβ2m及隨機多肽的體外復(fù)性及純化
        4.3.2 隨機多肽的處理
        4.3.3 色譜分離前樣本處理
        4.3.4 LC-MS/MS檢測
        4.3.5 高效液相色譜分離
        4.3.6 質(zhì)譜分析
        4.3.7 多肽統(tǒng)計
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 FLA-E~*01801/fβ2m/隨機多肽的體外復(fù)性結(jié)果
        4.4.2 LC-MS/MS TIC和Base Peak譜圖分析
        4.4.3 De Novo數(shù)據(jù)解析
        4.4.4 隨機多肽譜圖質(zhì)量分析
        4.4.5 結(jié)合FLA-E~*01801的九肽每一位氨基酸的偏好性分析
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
第五章 家貓CD8αα晶體結(jié)構(gòu)研究
    5.1 引言
    5.2 材料
        5.2.1 設(shè)計引物
        5.2.2 合成編碼貓CD8α鏈胞外區(qū)IgSF結(jié)構(gòu)域的基因序列
        5.2.3 菌株及載體
        5.2.4 分子生物學(xué)試劑及儀器
    5.3 方法
    5.4 結(jié)果
        5.4.1 fCD8α蛋白表達
        5.4.2 fCD8αα蛋白的復(fù)性及純化
        5.4.3 fCD8αα蛋白的結(jié)晶條件及晶體外觀
        5.4.4 fCD8αα蛋白晶體衍射數(shù)據(jù)的收集
        5.4.5 fCD8αα蛋白晶體結(jié)構(gòu)解析
        5.4.6 fCD8αα晶體結(jié)構(gòu)分析
    5.5 討論
        5.5.1 fCD8αα分子的結(jié)構(gòu)特點
        5.5.2 fCD8αα的CDR1 loop具有剛性特征
    5.6 小結(jié)
第六章 結(jié)論
第七章 創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3193800