花椒籽（學(xué)名椒目）是花椒（Zanthoxylum bungeanum Maxim）生產(chǎn)中的主要副產(chǎn)物,其中富含油脂、蛋白質(zhì)、黑色素、膳食纖維等成分,但長(zhǎng)期以來(lái)并未得到充分利用。本論文首先利用生物信息學(xué)工具和多肽組學(xué)技術(shù)對(duì)花椒籽蛋白酶解液中的抗菌肽進(jìn)行快速篩選和鑒定,并通過(guò)抑菌實(shí)驗(yàn)進(jìn)行活性驗(yàn)證;繼而研究所獲得抗菌肽的理化性質(zhì);最后探討所得抗菌肽對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌機(jī)理。研究結(jié)果將為新型天然抗菌肽的快速篩選鑒定提供新的思路,同時(shí)為花椒籽抗菌肽及花椒籽資源的綜合開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供重要的理論和技術(shù)支撐。取得的主要研究結(jié)果如下:1、利用nanoLC-ESI-MS/MS技術(shù)和3個(gè)生物信息學(xué)軟件CAMP_R3、APD3和AntiBP2對(duì)花椒籽蛋白胃蛋白酶解液中的全部肽段進(jìn)行鑒定和預(yù)測(cè),得到16條疑似抗菌肽序列,以大腸桿菌（ATCC 25922）、金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）、銅綠假單胞菌（ATCC 27853）、枯草芽孢桿菌（ATCC 6633）、釀酒酵母（CGMCC 2.3973）為測(cè)試菌株通過(guò)抑菌圈實(shí)驗(yàn)和最小抑菌濃度測(cè)定驗(yàn)證預(yù)測(cè)結(jié)果,得到4條具有抗菌活性的肽段... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說(shuō)明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 花椒簡(jiǎn)介
    1.2 花椒籽及其應(yīng)用研究現(xiàn)狀
        1.2.1 花椒籽的主要成分
            1.2.1.1 油脂
            1.2.1.2 蛋白質(zhì)
            1.2.1.3 黑色素
            1.2.1.4 膳食纖維
        1.2.2 花椒籽的功能性質(zhì)及開(kāi)發(fā)利用
    1.3 抗菌肽及其獲得方式
        1.3.1 抗菌肽的分類(lèi)
        1.3.2 抗菌肽的理化性質(zhì)與生物學(xué)功能
        1.3.3 抗菌肽的獲得方式
    1.4 影響抗菌肽活性的因素
        1.4.1 抗菌肽的序列長(zhǎng)度
        1.4.2 抗菌肽的正電荷性
        1.4.3 抗菌肽的兩親性
        1.4.4 抗菌肽的疏水性
        1.4.5 抗菌肽的螺旋度
        1.4.6 二硫鍵、鉸鏈結(jié)構(gòu)
        1.4.7 氨基酸構(gòu)型
    1.5 抗菌肽的作用機(jī)制
        1.5.1 膜損傷機(jī)制
        1.5.2 非膜損傷機(jī)制
    1.6 生物信息學(xué)、多肽組學(xué)在抗菌肽研究中的應(yīng)用
    1.7 抗菌肽的應(yīng)用
        1.7.1 在農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)上的應(yīng)用
        1.7.2 在食品工業(yè)上的應(yīng)用
        1.7.3 在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用
    1.8 本研究目的意義、主要內(nèi)容及技術(shù)路線(xiàn)
        1.8.1 本研究的目的意義
        1.8.2 本研究的主要內(nèi)容
        1.8.3 本研究的技術(shù)路線(xiàn)
第二章 基于生物信息學(xué)與多肽組學(xué)的花椒籽抗菌肽的篩選鑒定
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料、試劑及主要儀器
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.2.1 花椒籽蛋白及其酶解液的制備
            2.2.2.2 多肽樣品的初步純化
            2.2.2.3 Nano LC-ESI-MS/MS分離鑒定花椒籽蛋白酶解液中的多肽
            2.2.2.4 序列分析
            2.2.2.5 疑似抗菌肽的預(yù)測(cè)
            2.2.2.6 疑似抗菌肽的化學(xué)合成
            2.2.2.7 抗菌活性的驗(yàn)證
            2.2.2.8 殺菌動(dòng)力曲線(xiàn)的測(cè)定
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 Nano LC-ESI-MS/MS結(jié)果
        2.3.2 疑似抗菌肽預(yù)測(cè)
        2.3.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
        2.3.4 殺菌動(dòng)力曲線(xiàn)測(cè)定
    2.4 討論
        2.4.1 生物信息學(xué)在生物活性多肽研究中的應(yīng)用
        2.4.2 三磷酸甘油醛脫氫酶在生物體防御系統(tǒng)中的作用
    2.5 小結(jié)
第三章 花椒籽抗菌肽的性質(zhì)研究
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料、試劑及主要儀器
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            3.2.2.1 花椒籽抗菌肽的理化性質(zhì)預(yù)測(cè)
            3.2.2.2 花椒籽抗菌肽空間結(jié)構(gòu)的模擬
            3.2.2.3 圓二色譜測(cè)定花椒籽抗菌肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)
            3.2.2.4 溶血活性的測(cè)定
            3.2.2.5 加熱溫度對(duì)花椒籽抗菌肽抗菌活性的影響
            3.2.2.6 反復(fù)凍融對(duì)花椒籽抗菌肽抗菌活性的影響
            3.2.2.7 紫外燈照射對(duì)花椒籽抗菌肽抗菌活性的影響
            3.2.2.8 pH對(duì)花椒籽抗菌肽抗菌活性的影響
            3.2.2.9 鹽離子對(duì)花椒籽抗菌肽抗菌活性的影響
            3.2.2.10 蛋白酶對(duì)花椒籽抗菌肽抗菌活性的影響
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 花椒籽抗菌肽的理化性質(zhì)預(yù)測(cè)
        3.3.2 花椒籽抗菌肽的空間結(jié)構(gòu)模擬
        3.3.3 花椒籽抗菌肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定
        3.3.4 花椒籽抗菌肽的溶血活性測(cè)定
        3.3.5 花椒籽抗菌肽的熱穩(wěn)定性
        3.3.6 花椒籽抗菌肽的凍融穩(wěn)定性
        3.3.7 花椒籽抗菌肽的紫外照射穩(wěn)定性
        3.3.8 花椒籽抗菌肽的pH穩(wěn)定性
        3.3.9 花椒籽抗菌肽的鹽離子穩(wěn)定性
        3.3.10 蛋白酶對(duì)花椒籽抗菌肽活性的影響
            3.3.10.1 胃蛋白酶的影響
            3.3.10.2 胰蛋白酶的影響
            3.3.10.3 蛋白酶K的影響
    3.4 討論
        3.4.1 花椒籽抗菌肽的溶血活性
        3.4.2 花椒籽抗菌肽的結(jié)構(gòu)特征與其功能的關(guān)系
        3.4.3 花椒籽抗菌肽的穩(wěn)定性研究
    3.5 小結(jié)
第四章 花椒籽抗菌肽NP-6對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌機(jī)理研究
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料、試劑及主要儀器
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            4.2.2.1 NP-6 對(duì)細(xì)菌表面特性的影響
            4.2.2.2 NP-6 對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜的影響
            4.2.2.3 NP-6 與細(xì)菌核酸的相互作用
            4.2.2.4 NP-6 對(duì)細(xì)菌胞內(nèi)酶活性的影響
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 NP-6 對(duì)細(xì)菌表面特性的影響
            4.3.1.1 NP-6 對(duì)細(xì)菌表面Zeta電位的影響
            4.3.1.2 掃描電鏡觀察NP-6 處理后細(xì)菌表面形態(tài)變化
        4.3.2 NP-6 對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜的影響
            4.3.2.1 透射電鏡觀察NP-6 對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜的影響
            4.3.2.2 NP-6 對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜通透性的影響
            4.3.2.3 流式細(xì)胞儀分析NP-6 對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜完整性的影響
            4.3.2.4 激光共聚焦顯微鏡觀察NP-6 對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜完整性的影響
        4.3.3 NP-6 對(duì)細(xì)菌核酸的影響
            4.3.3.1 NP-6 與溴化乙錠競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合細(xì)菌基因組DNA的熒光光譜分析
            4.3.3.2 DNA-肽結(jié)合凝膠阻滯試驗(yàn)
            4.3.3.3 RNA-肽結(jié)合凝膠阻滯試驗(yàn)
        4.3.4 NP-6 對(duì)細(xì)菌胞內(nèi)酶活的影響
    4.4 討論
        4.4.1 抗菌肽NP-6 對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜的破壞作用
        4.4.2 抗菌肽NP-6 的胞內(nèi)靶點(diǎn)
    4.5 小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
    5.3 論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]四川花椒產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及對(duì)策分析研究[J]. 王麗華,趙衛(wèi)紅,彭曉曦,秦茂,熊量,吳宗興.  四川林業(yè)科技. 2018(02)
[2]家蠅天蠶素抗菌肽Cec4對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌抑菌活性的研究[J]. 龍慧玲,楊舉豪,彭建,吳建偉.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2017 (12)
[3]響應(yīng)面法優(yōu)化花椒籽仁蛋白質(zhì)鹽提工藝條件[J]. 李超,蒲彪,劉興艷,徐丹萍,羅松明,王春霞,蔣培基,潘姝璇,李強(qiáng),付本寧.  中國(guó)油脂. 2017(06)
[4]不同產(chǎn)地紅花椒籽油脂肪酸組成的比較研究[J]. 張仁鳳,陳光靜,屈立武,闞建全.  中國(guó)調(diào)味品. 2017(06)
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[6]幾種豆科植物抗菌肽的生物信息學(xué)預(yù)測(cè)與分析[J]. 鄒謀勇,朱新貴.  中國(guó)釀造. 2016(10)
[7]花椒研究概況[J]. 陳旅,楊途熙,魏安智,馮世靜,劉永紅.  中國(guó)調(diào)味品. 2016(10)
[8]抗菌肽F1對(duì)金黃色葡萄球菌的胞內(nèi)作用機(jī)制[J]. 陳飛龍,劉漁珠,彭勃,陳詠春,苗建銀,曹庸.  食品科學(xué). 2017(06)
[9]花椒籽粉對(duì)肉雞生產(chǎn)性能、免疫器官指數(shù)及肉品質(zhì)的影響[J]. 付興周,路志芳,申海燕.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(09)
[10]花椒籽黑色素體外抗氧化能力研究[J]. 董小華,課敬璇,申光輝,黎杉珊,張志清.  中國(guó)油脂. 2016(08)

博士論文
[1]α-螺旋型膜活性多肽對(duì)不同細(xì)胞膜的構(gòu)效關(guān)系及作用機(jī)理研究[D]. 黃金豐.吉林大學(xué) 2011
[2]BuforinⅡ抗菌肽的分子設(shè)計(jì)及對(duì)DNA作用抑菌機(jī)理研究[D]. 郝剛.江南大學(xué) 2009
[3]新疆家蠶抗菌肽結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系及抗菌作用機(jī)理的研究[D]. 劉忠淵.新疆大學(xué) 2008

碩士論文
[1]速激肽來(lái)源抗菌肽的促傷口愈合活性研究[D]. 李思思.蘭州大學(xué) 2017
[2]花椒嫁接砧木對(duì)形態(tài)和結(jié)實(shí)的影響[D]. 安曉龍.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]四川花椒品種選育評(píng)價(jià)指標(biāo)體系構(gòu)建[D]. 趙瓊慧.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[4]花椒籽油制備生物柴油的工藝研究[D]. 黃文捷.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2008
[5]花椒籽蛋白質(zhì)分離提取及功能性質(zhì)的研究[D]. 寇明鈺.西南大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3193760