本研究的主要目的是闡明低溫引發(fā)的低溫獲能和獲能發(fā)生機制差異以及探究冷凍稀釋液中添加CLC對凍融豬配子質(zhì)量的影響。試驗主要分三部分,第一部分主要研究獲能、頂體反應(yīng)及低溫獲能處理對豬精子蛋白32（sp32）及其酪氨酸磷酸化的表達水平的影響;第二部分主要研究添加CLC對凍融豬精子獲能狀態(tài)線粒體膜電位以及質(zhì)量特性的研究;第三部分主要研究添加CLC對凍融的GV期線粒體膜電位、促凋亡基因表達、透明帶泛素化水平以及精子-ZP結(jié)合能力的影響。試驗結(jié)果如下:1.獲能、頂體反應(yīng)及低溫獲能處理后結(jié)果表明,獲能和頂體反應(yīng)處理組sp32的表達水平顯著高于鮮精組和低溫獲能處理組（P<0.05）;2.獲能和頂體反應(yīng)處理組sp32酪氨酸磷酸化水平顯著高于鮮精組和低溫獲能處理組（P<0.05）;3.冷凍稀釋液中添加CLC（0,0.5,1.0和2.0mg/mL）處理后結(jié)果表明,0.5 mg/mLCLC組活力、存活率和頂體完整率均高于其他三處理組組（P<0.05）;而獲能和頂體反應(yīng)百分比低于其他三組（P<0.05）;4.添加CLC能夠顯著提高4℃處理組和玻璃化冷凍處理組精子的線粒體跨膜電位（P<... 

【文章來源】：延邊大學吉林省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 綜述
    1.1 配子的冷凍保存
        1.1.1 精子的冷凍保存
        1.1.2 卵母細胞的冷凍保存
    1.2 獲能與受精
        1.2.1 葡萄糖和精子獲能
        1.2.2 線粒體OXPHOS和精子獲能
    1.3 低溫獲能
    1.4 獲能精子的酪氨酸磷酸化
        1.4.1 SACY調(diào)節(jié)中的cAMP,HCO3-和Ca2+
        1.4.2 PKA作為cAMP靶標的作用
        1.4.3 PKA激活的下游事件
        1.4.4 酪氨酸磷酸化的調(diào)節(jié):Src激酶家族和ser/thr磷酸酶的作用
        1.4.5 在精子獲能期間觀察到的其他磷酸化途徑
        1.4.6 獲能過程中磷酸化的調(diào)控模型
    1.5 包埋膽固醇的甲基-β-環(huán)糊精(CLC)
        1.5.1 CLC對卵母細胞的作用
        1.5.2 CLC對精子的作用
    1.6 細胞的凋亡
    1.7 線粒體膜電位與細胞凋亡的關(guān)系
    1.8 精子-卵母細胞的識別
第二章 豬精子頂體膜sp32的表達及其酪氨酸磷酸化水平的變化
    2.1 試驗材料
        2.1.1 豬精液和精子
        2.1.2 試驗主要儀器
        2.1.3 試驗主要藥品
    2.2 試驗方法
        2.2.1 藥品的配制
        2.2.2 試驗步驟
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 頂體膜蛋白的SDS-PAGE分析結(jié)果
        2.3.2 頂體膜蛋白中的sp32蛋白免疫印跡結(jié)果
        2.3.3 體膜蛋白中的酪氨酸磷酸化水平
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 添加CLC對精子冷凍保存質(zhì)量的影響
    3.1 試驗材料
    3.2 試驗方法
        3.2.1 藥品的配制
        3.2.2 試驗步驟
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 CLC對精子前向運動、存活率和頂體完整率的影響
        3.3.2 CLC對精子獲能和頂體反應(yīng)的影響
        3.3.3 CLC對精子線粒體跨膜電位的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 在玻璃化冷凍前添加CLC對體外成熟的豬卵母細胞質(zhì)量的影響
    4.1 試驗材料
        4.1.1 試驗主要儀器
        4.1.2 試驗主要藥品
    4.2 試驗方法
        4.2.1 藥品的配制
        4.2.2 試驗步驟
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 添加CLC后,膽固醇與卵母細胞的結(jié)合情況
        4.3.2 CLC對玻璃化冷凍解凍后GV期卵母細胞的正常率和成熟率的影響
        4.3.3 CLC對GV期玻璃化冷凍的成熟豬卵母細胞線粒體跨膜電位的影響
        4.3.4 CLC對GV期玻璃化的成熟豬卵母細胞中促凋亡基因的mRNA表達水平的影響
        4.3.5 CLC對GV期玻璃化的成熟豬卵母細胞的ZP蛋白泛素化的影響
        4.3.6 CLC對精子與GV期玻璃化的成熟豬卵母細胞結(jié)合的影響
    4.4 討論
        4.4.1 CLC對線粒體跨膜電位的影響
        4.4.2 CLC對促凋亡基因的mRNA表達水平的影響
        4.4.3 CLC對ZP蛋白泛素化的影響
        4.4.4 CLC對受精率的影響
    4.5 小結(jié)
第五章 結(jié)論
參考文獻
附錄一 英文簡寫縮略表
附錄二 攻讀學位期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3191249