本研究的主要目的是闡明低溫引發(fā)的低溫獲能和獲能發(fā)生機(jī)制差異以及探究冷凍稀釋液中添加CLC對(duì)凍融豬配子質(zhì)量的影響。試驗(yàn)主要分三部分,第一部分主要研究獲能、頂體反應(yīng)及低溫獲能處理對(duì)豬精子蛋白32（sp32）及其酪氨酸磷酸化的表達(dá)水平的影響;第二部分主要研究添加CLC對(duì)凍融豬精子獲能狀態(tài)線粒體膜電位以及質(zhì)量特性的研究;第三部分主要研究添加CLC對(duì)凍融的GV期線粒體膜電位、促凋亡基因表達(dá)、透明帶泛素化水平以及精子-ZP結(jié)合能力的影響。試驗(yàn)結(jié)果如下:1.獲能、頂體反應(yīng)及低溫獲能處理后結(jié)果表明,獲能和頂體反應(yīng)處理組sp32的表達(dá)水平顯著高于鮮精組和低溫獲能處理組（P<0.05）;2.獲能和頂體反應(yīng)處理組sp32酪氨酸磷酸化水平顯著高于鮮精組和低溫獲能處理組（P<0.05）;3.冷凍稀釋液中添加CLC（0,0.5,1.0和2.0mg/mL）處理后結(jié)果表明,0.5 mg/mLCLC組活力、存活率和頂體完整率均高于其他三處理組組（P<0.05）;而獲能和頂體反應(yīng)百分比低于其他三組（P<0.05）;4.添加CLC能夠顯著提高4℃處理組和玻璃化冷凍處理組精子的線粒體跨膜電位（P<... 

【文章來(lái)源】：延邊大學(xué)吉林省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：102 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 綜述
    1.1 配子的冷凍保存
        1.1.1 精子的冷凍保存
        1.1.2 卵母細(xì)胞的冷凍保存
    1.2 獲能與受精
        1.2.1 葡萄糖和精子獲能
        1.2.2 線粒體OXPHOS和精子獲能
    1.3 低溫獲能
    1.4 獲能精子的酪氨酸磷酸化
        1.4.1 SACY調(diào)節(jié)中的cAMP,HCO3-和Ca2+
        1.4.2 PKA作為cAMP靶標(biāo)的作用
        1.4.3 PKA激活的下游事件
        1.4.4 酪氨酸磷酸化的調(diào)節(jié):Src激酶家族和ser/thr磷酸酶的作用
        1.4.5 在精子獲能期間觀察到的其他磷酸化途徑
        1.4.6 獲能過(guò)程中磷酸化的調(diào)控模型
    1.5 包埋膽固醇的甲基-β-環(huán)糊精(CLC)
        1.5.1 CLC對(duì)卵母細(xì)胞的作用
        1.5.2 CLC對(duì)精子的作用
    1.6 細(xì)胞的凋亡
    1.7 線粒體膜電位與細(xì)胞凋亡的關(guān)系
    1.8 精子-卵母細(xì)胞的識(shí)別
第二章 豬精子頂體膜sp32的表達(dá)及其酪氨酸磷酸化水平的變化
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 豬精液和精子
        2.1.2 試驗(yàn)主要儀器
        2.1.3 試驗(yàn)主要藥品
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 藥品的配制
        2.2.2 試驗(yàn)步驟
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 頂體膜蛋白的SDS-PAGE分析結(jié)果
        2.3.2 頂體膜蛋白中的sp32蛋白免疫印跡結(jié)果
        2.3.3 體膜蛋白中的酪氨酸磷酸化水平
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 添加CLC對(duì)精子冷凍保存質(zhì)量的影響
    3.1 試驗(yàn)材料
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 藥品的配制
        3.2.2 試驗(yàn)步驟
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 CLC對(duì)精子前向運(yùn)動(dòng)、存活率和頂體完整率的影響
        3.3.2 CLC對(duì)精子獲能和頂體反應(yīng)的影響
        3.3.3 CLC對(duì)精子線粒體跨膜電位的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 在玻璃化冷凍前添加CLC對(duì)體外成熟的豬卵母細(xì)胞質(zhì)量的影響
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 試驗(yàn)主要儀器
        4.1.2 試驗(yàn)主要藥品
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 藥品的配制
        4.2.2 試驗(yàn)步驟
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 添加CLC后,膽固醇與卵母細(xì)胞的結(jié)合情況
        4.3.2 CLC對(duì)玻璃化冷凍解凍后GV期卵母細(xì)胞的正常率和成熟率的影響
        4.3.3 CLC對(duì)GV期玻璃化冷凍的成熟豬卵母細(xì)胞線粒體跨膜電位的影響
        4.3.4 CLC對(duì)GV期玻璃化的成熟豬卵母細(xì)胞中促凋亡基因的mRNA表達(dá)水平的影響
        4.3.5 CLC對(duì)GV期玻璃化的成熟豬卵母細(xì)胞的ZP蛋白泛素化的影響
        4.3.6 CLC對(duì)精子與GV期玻璃化的成熟豬卵母細(xì)胞結(jié)合的影響
    4.4 討論
        4.4.1 CLC對(duì)線粒體跨膜電位的影響
        4.4.2 CLC對(duì)促凋亡基因的mRNA表達(dá)水平的影響
        4.4.3 CLC對(duì)ZP蛋白泛素化的影響
        4.4.4 CLC對(duì)受精率的影響
    4.5 小結(jié)
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄一 英文簡(jiǎn)寫(xiě)縮略表
附錄二 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3191249