致病菌感染是威脅人類健康的主要原因之一,全球范圍內(nèi)每年因致病菌感染而死亡的人數(shù)超過1500萬。金黃色葡萄球菌是社區(qū)和醫(yī)院相關(guān)感染的主要致病菌,嚴重威害人類健康并造成巨大經(jīng)濟損失。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中,由金黃色葡萄球菌引起的奶牛乳腺炎是奶牛養(yǎng)殖業(yè)中最常見的病癥之一,不僅會導(dǎo)致奶牛泌乳量下降,還會導(dǎo)致牛奶品質(zhì)發(fā)生變化,進而造成乳制品產(chǎn)業(yè)的重大損失。因此,遏制金葡菌感染對于畜牧生產(chǎn)和人類健康具有重要意義。外泌體是一種由細胞分泌的直徑約為100nm的囊泡,廣泛存在于包括牛奶在內(nèi)的各種體液中。外泌體中含有大量具有生物功能的內(nèi)容物（如蛋白、脂質(zhì)和核酸等）,這些內(nèi)容物可以通過外泌體的內(nèi)在化進入受體細胞,從而調(diào)控相關(guān)生理生化過程。同時,外泌體內(nèi)容物成分和數(shù)量的變化也能夠反映出供體細胞的不同生理狀況,指示出供體細胞的生理生化變化。但在由致病菌感染引起的相關(guān)疾病中,關(guān)于外泌體功能的研究尚不明確,尤其是關(guān)于外泌體中具有生物學(xué)功能的非編碼RNA在致病菌感染過程中發(fā)揮怎樣作用的研究不夠深入。因此,本試驗以我國西北地區(qū)泌乳中期荷斯坦奶牛的牛奶來源外泌體為研究對象,以金黃色葡萄球菌感染引起的奶牛乳腺炎為模型,探索致病菌感染... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：221 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻綜述
    第一章 外泌體非編碼RNA在奶牛健康養(yǎng)殖中的功能
        1.1 奶牛健康養(yǎng)殖
        1.2 奶牛乳腺炎
            1.2.1 奶牛乳腺炎的臨床表現(xiàn)
            1.2.2 乳腺炎的發(fā)病機理
            1.2.3 乳腺炎的危害
            1.2.4 奶牛乳腺炎的檢測
            1.2.5 引起奶牛乳腺炎的主要致病菌
        1.3 牛奶來源外泌體
            1.3.1 外泌體概述
            1.3.2 外泌體的生物學(xué)起源
            1.3.3 外泌體內(nèi)容物
            1.3.4 外泌體的分離純化方法
            1.3.5 外泌體與疾病
            1.3.6 乳汁中外泌體的攝取
        1.4 非編碼RNA的生物學(xué)特征
            1.4.1 非編碼RNA概述
            1.4.2 非編碼RNA的分類及功能
            1.4.3 miRNA轉(zhuǎn)錄組(miRNAome)概述
            1.4.4 circRNA簡述
        1.5 本研究的目的和意義
試驗部分
    第二章 牛奶來源金黃色葡萄球菌和外泌體的分離鑒定
        2.1 試驗材料
            2.1.1 試驗動物
            2.1.2 主要試驗試劑
            2.1.3 主要試驗儀器
            2.1.4 引物
        2.2 試驗方法
            2.2.1 奶牛及乳區(qū)的選擇
            2.2.2 樣品采集
            2.2.3 金黃色葡萄球菌的分離
            2.2.4 金黃色葡萄球菌的生化鑒定
            2.2.5 牛奶來源外泌體的分離
            2.2.6 牛奶來源外泌體的鑒定
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 奶牛乳腺炎來源葡萄球菌的分離鑒定結(jié)果
            2.3.2 牛奶來源外泌體的分離和鑒定
        2.4 討論
            2.4.1 奶牛乳腺炎致病菌在我國西北地區(qū)的分布
            2.4.2 超速離心法提取牛奶來源外泌體
        2.5 小結(jié)
    第三章 金黃色葡萄球菌感染誘導(dǎo)牛奶來源外泌體中miRNA的表達量發(fā)生變化
        3.1 試驗材料
            3.1.1 試驗樣品
            3.1.2 主要試驗試劑
            3.1.3 主要試驗儀器
            3.1.4 引物
        3.2 試驗方法
            3.2.1 牛奶來源外泌體中總RNA的提取及鑒定
            3.2.2 miRNA文庫的構(gòu)建及高通量測序
            3.2.3 已知的mi RNA的檢測與新發(fā)現(xiàn)的mi RNA的鑒定
            3.2.4 牛奶外泌體來源miRNA表達差異分析
            3.2.5 牛奶外泌體來源差異表達miRNA的體外檢測
            3.2.6 牛奶外泌體來源差異表達miRNA的靶基因預(yù)測
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 牛奶來源外泌體中總RNA的特征分析
            3.3.2 牛奶來源外泌體中miRNA的特征分析
            3.3.3 金黃色葡萄球菌感染和健康牛奶來源外泌體中miRNA的差異表達分析
            3.3.4 表達量有顯著差異的已知的miRNA的靶基因預(yù)測及功能研究
            3.3.5 奶牛金黃色葡萄球菌感染關(guān)鍵miRNA的篩選
        3.4 討論
            3.4.1 牛奶來源外泌體中的RNA
            3.4.2 牛奶來源外泌體中miRNA的測序
            3.4.3 牛奶來源外泌體中差異表達的miRNA
        3.5 小結(jié)
    第四章 金葡菌感染過程中奶牛關(guān)鍵miRNA靶基因鑒定及功能研究
        4.1 試驗材料
            4.1.1 試驗樣品
            4.1.2 主要試驗試劑
            4.1.3 主要實驗儀器
            4.1.4 引物
        4.2 試驗方法
            4.2.1 關(guān)鍵mi RNA分子bta-mi R-378和bta-mi R-185 靶基因的篩選
            4.2.2 雙熒光素酶報告載體psi CHECKTM-2 的構(gòu)建
            4.2.3 點突變雙熒光素酶報告載體的構(gòu)建
            4.2.4 雙熒光素酶報告載體檢測bta-mi R-378和bta-mi R-185 靶基因
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 bta-mi R-378和bta-mi R-185 候選靶基因預(yù)測
            4.3.2 bta-mi R-378和bta-mi R-185 候選靶基因的雙熒光素酶檢測
            4.3.3 點突變雙熒光素酶報告載體的構(gòu)建
            4.3.4 bta-mi R-378和bta-mi R-185 靶基因的雙熒光素酶檢測
        4.4 討論
            4.4.1 miRNA的靶基因預(yù)測
            4.4.2 奶牛金葡菌感染分子標志物靶基因的功能
        4.5 小結(jié)
    第五章 金黃色葡萄球菌感染誘導(dǎo)牛奶來源外泌體中circRNA表達差異分析
        5.1 試驗材料
        5.2 試驗方法
            5.2.1 circRNA文庫的構(gòu)建及高通量測序
            5.2.2 參考基因組比對分析
            5.2.3 牛奶來源外泌體circRNA外顯子、內(nèi)含子、基因間隔區(qū)域分布評估
            5.2.4 牛奶來源外泌體circRNA的預(yù)測
            5.2.5 金葡菌感染牛奶來源外泌體circRNA差異表達分析
            5.2.6 金葡菌感染牛奶來源外泌體circRNA功能分析
        5.3 結(jié)果
            5.3.1 牛奶來源外泌體中circRNA的特征描述
            5.3.2 金葡菌感染誘導(dǎo)牛奶來源外泌體中circRNA差異表達
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
    第六章 circRNA進入外泌體中的“選擇性包裝機制”研究
        6.1 試驗材料
        6.2 試驗方法
            6.2.1 circRNA的驗證
            6.2.2 circRNA向外泌體中選擇性分泌的研究
        6.3 結(jié)果
            6.3.1 circRNA存在于牛奶來源體細胞及外泌體中
            6.3.2 circRNA選擇性包裝進入外泌體
        6.4 討論
        6.5 小結(jié)
第七章 論文總結(jié)
參考文獻
附錄
縮略詞
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]健康養(yǎng)殖——畜牧業(yè)未來發(fā)展趨勢[J]. 朱艷麗.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2018(01)
[2]奶牛乳腺炎的診斷與防治[J]. 劉明永.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2017(10)
[3]發(fā)展水產(chǎn)健康養(yǎng)殖 做好病害防治工作[J]. 黃太壽.  中國水產(chǎn). 1995(12)



本文編號：3165779