反芻動(dòng)物瘤胃微生物發(fā)酵產(chǎn)生的短鏈脂肪酸（SCFA）是反芻動(dòng)物主要的能量來(lái)源,可提供機(jī)體所需能量的60-80%;SCFA更是調(diào)節(jié)生命活動(dòng)的信號(hào)因子。研究表明日糧精料水平影響瘤胃上皮的生長(zhǎng),但其中的機(jī)理不完全清楚。本論文旨在研究日糧精料水平對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制。第一章日糧精料水平對(duì)山羊瘤胃上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及SCFA和pH的作用12只山羊隨機(jī)分成低精料組（LC,n=6）和中等精料組（MC,n=6）,飼喂粗料分別添加10%與35%精料的兩種日糧。實(shí)驗(yàn)期間,山羊于每日的8:00與18:00飼喂,且自由飲水。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行21天后,山羊在晨飼后6小時(shí)屠宰,采集瘤胃液及瘤胃上皮樣品。體外實(shí)驗(yàn)選取8只健康山羊,屠宰采集瘤胃上皮,胰蛋白酶消化獲得瘤胃上皮細(xì)胞后進(jìn)行原代培養(yǎng),待24 h細(xì)胞附著后,分別接受以下處理:pH7.4、pH 6.8、pH7.4+SCFA（20 mM SCFA）與pH6.8+SCFA處理。處理24h小時(shí),收集細(xì)胞待檢。采用氣相色譜法測(cè)定瘤胃內(nèi)揮發(fā)性脂肪酸（SCFA）含量,用組織切片法光鏡觀察瘤胃上皮各層層數(shù),細(xì)胞數(shù)量,大小和體積變化。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)瘤胃上皮細(xì)胞周期變... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
本文部分縮寫的中英文對(duì)照
引言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 瘤胃上皮的生長(zhǎng)發(fā)育及其調(diào)節(jié)
        1 瘤胃上皮的生長(zhǎng)發(fā)育
        2 瘤胃上皮生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)節(jié)
            2.1 日糧營(yíng)養(yǎng)水平
            2.2 瘤胃內(nèi)代謝產(chǎn)物
            2.3 激素和生長(zhǎng)因子
        參考文獻(xiàn)
    第二章 瘤胃上皮的結(jié)構(gòu)功能及其調(diào)節(jié)
        1 瘤胃上皮的結(jié)構(gòu)
            1.1 瘤胃上皮的解剖學(xué)特點(diǎn)
            1.2 瘤胃上皮的細(xì)胞學(xué)特點(diǎn)
            1.3 瘤胃上皮的超微結(jié)構(gòu)
        2 瘤胃上皮的功能及其調(diào)節(jié)
            2.1 瘤胃上皮功能的發(fā)育
            2.2 SCFA的吸收
            2.3 氮的吸收
            2.4 離子的吸收
        參考文獻(xiàn)
    第三章 細(xì)胞凋亡
        1 細(xì)胞凋亡的概況
        2 細(xì)胞凋亡的發(fā)生過(guò)程和分子機(jī)制
        3 調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的主要因素
        參考文獻(xiàn)
    第四章 細(xì)胞周期
        1 細(xì)胞周期及其調(diào)節(jié)
            1.1 細(xì)胞周期概述
            1.2 細(xì)胞周期的調(diào)控
            1.3 IGF-1對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)
                1.3.1. IGF-1對(duì)G1期進(jìn)程的調(diào)節(jié)
                1.3.2 IGF-1的作用機(jī)制
                    1.3.2.1 IGF-1R
                    1.3.2.2 IGF-1受體后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
            1.4 調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的主要因素
        參考文獻(xiàn)
第二篇 實(shí)驗(yàn)研究
    第一章 日糧精料水平對(duì)山羊瘤胃上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及SCFA和pH的作用
        第一節(jié) 日糧精料水平影響山羊瘤胃上皮生長(zhǎng)的體內(nèi)研究
            1 材料與方法
                1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與動(dòng)物飼養(yǎng)
                1.2 日糧化學(xué)組成檢測(cè)
                1.3 樣品采集
                1.4 瘤胃pH及SCFA測(cè)定
                1.5 瘤胃上皮形態(tài)觀察
                    1.5.1 瘤胃上皮組織切片的制作
                    1.5.2 H.E染色
                    1.5.3 切片觀察和分析
                1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)山羊瘤胃上皮細(xì)胞周期
                    1.6.1 瘤胃上皮細(xì)胞的分離與固定
                    1.6.2 碘化丙啶（PI）染色與流式細(xì)胞儀檢測(cè)
                1.7 TUNEL檢測(cè)瘤胃上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)
                    1.7.1 樣品預(yù)處理
                    1.7.2 標(biāo)記與檢測(cè)
                    1.7.3 樣品分析
                1.8 RNA提取及Real-time PCR
                1.9 數(shù)據(jù)分析
            2 結(jié)果與分析
                2.1 日糧精料水平對(duì)山羊瘤胃液pH值和SCFA濃度的影響
                2.2 日糧精料水平對(duì)山羊瘤胃上皮細(xì)胞層數(shù)和細(xì)胞數(shù)量的影響
                2.3 日糧精料水平對(duì)山羊瘤胃上皮細(xì)胞周期的影響
                2.4 日糧精料水平對(duì)山羊瘤胃上皮細(xì)胞凋亡的影響
                2.5 日糧精料水平對(duì)山羊瘤胃上皮細(xì)胞增殖相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響
                2.6 日糧精料水平對(duì)山羊瘤胃上皮細(xì)胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響
        第二節(jié) 酸性pH及SCFA處理對(duì)原代培養(yǎng)山羊瘤胃上皮細(xì)胞的增殖和凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響
            1 材料與方法
                1.1 樣品采集和細(xì)胞培養(yǎng)
                1.2 RNA提取及Real-time PCR
                1.3 數(shù)據(jù)分析
            2. 結(jié)果與分析
                2.1 酸性pH（pH6.8）及SCFA處理對(duì)原代培養(yǎng)山羊瘤胃上皮細(xì)胞增殖相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響
                2.2 酸性pH（pH6.8）及SCFA處理對(duì)原代培養(yǎng)山羊瘤胃上皮細(xì)胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響
        討論
        小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第二章 日糧精料水平對(duì)奶牛瘤胃上皮生長(zhǎng)的影響及SCFA和酸性pH的作用
        第一節(jié) 日糧精料水平影響奶牛瘤胃上皮生長(zhǎng)的體內(nèi)研究
            1 材料與方法
                1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與動(dòng)物飼養(yǎng)
                1.2 日糧化學(xué)組成檢測(cè)
                1.3 樣品采集
                1.4 瘤胃pH及SCFA測(cè)定
                1.5 瘤胃上皮形態(tài)觀察
                    1.5.1 瘤胃上皮組織切片的制作
                    1.5.2 H.E染色
                    1.5.3 切片觀察和分析
                1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞周期
                    1.6.1 瘤胃上皮細(xì)胞的分離與固定
                    1.6.2 碘化丙啶（PI）染色與流式細(xì)胞儀檢測(cè)
                1.7 TUNEL檢測(cè)瘤胃上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)
                    1.7.1 樣品預(yù)處理
                    1.7.2 標(biāo)記與檢測(cè)
                    1.7.3 樣品分析
                1.8 RNA提取及Real-time PCR
                1.9 數(shù)據(jù)分析
            2 結(jié)果與分析
                2.1 日糧精料水平對(duì)奶牛瘤胃液pH值和SCFA濃度的影響
                2.2 日糧精料水平對(duì)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞層數(shù)和細(xì)胞數(shù)量的影響
                2.3 日糧精料水平對(duì)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞周期的影響
                2.4 日糧精料水平對(duì)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞凋亡的影響
                2.5 日糧精料水平對(duì)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞增殖相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響
                2.6 日糧精料水平對(duì)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響
        第二節(jié) 酸性pH及SCFA處理對(duì)原代培養(yǎng)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響
            1 材料與方法
                1.1 樣品采集和細(xì)胞培養(yǎng)
                1.2 樣品采集和細(xì)胞培養(yǎng)
                1.3 數(shù)據(jù)分析
            2 結(jié)果與分析
                2.1 酸性pH（pH6.8）及SCFA處理對(duì)原代培養(yǎng)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞增殖相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響
                2.2 酸性pH（pH6.8）及SCFA處理對(duì)原代培養(yǎng)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響
        討論
        小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第三章 TNFα對(duì)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究
        第一節(jié) 日糧精料水平影響奶牛瘤胃上皮cyclin D1, CDK4, A-Caspase 3,TNFα及其受體表達(dá)的體內(nèi)研究
            1 材料與方法
                1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與動(dòng)物飼養(yǎng)
                1.2 日糧化學(xué)組成檢測(cè)
                1.3 樣品采集
                1.4 蛋白提取及Western-blot檢測(cè)
                1.5 數(shù)據(jù)分析
            2 結(jié)果與分析
                2.1 日糧精料水平對(duì)奶牛瘤胃上皮cyclin D1,CDK4和A-Caspase 3蛋白表達(dá)的影響
                2.2 日糧精料水平對(duì)奶牛瘤胃上皮TNFα,TNFR1,TNFR2和TRADD蛋白表達(dá)的影響
                2.3 日糧精料水平對(duì)奶牛瘤胃上皮ERK1/2蛋白表達(dá)的影響
                2.4 日糧精料水平對(duì)奶牛瘤胃上皮JNK蛋白磷酸化的影響
                2.5 日糧精料水平對(duì)奶牛瘤胃上皮p38蛋白表達(dá)的影響
        第二節(jié) TNFα對(duì)影響原代培養(yǎng)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞cyclin D1,CDK4和A-Caspase 3表達(dá)的體外研究
            1 材料與方法
                1.1 樣品采集和細(xì)胞培養(yǎng)
                1.2 RNA提取及Real-time PCR
                1.3 蛋白提取及Western-bolt
                1.4 數(shù)據(jù)分析
            2 結(jié)果與分析
                2.1 TNFα對(duì)原代培養(yǎng)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞ERK1/2蛋白磷酸化的影響
                2.2 TNFα對(duì)原代培養(yǎng)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞JNK蛋白磷酸化的影響
                2.3 TNFα對(duì)原代培養(yǎng)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞p38蛋白磷酸化的影響
                2.4 TNFα及幾種抑制劑對(duì)原代培養(yǎng)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞cyclin D1與CDK4mRNA表達(dá)的影響
                2.5 TNFα及幾種抑制劑對(duì)原代培養(yǎng)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞Caspase 3 mRNA表達(dá)的影響
                2.6 TNFα及幾種抑制劑對(duì)原代培養(yǎng)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞cyclin D1蛋白表達(dá)的影響
                2.7 TNFα及幾種抑制劑對(duì)原代培養(yǎng)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞CDK4蛋白表達(dá)的影響
                2.8 TNFα及幾種抑制劑對(duì)原代培養(yǎng)奶牛瘤胃上皮細(xì)胞A-caspase 3蛋白表達(dá)的影響
        討論
        小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
本文創(chuàng)新點(diǎn)
致謝
博士期間發(fā)表和完成的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞自噬與凋亡研究進(jìn)展[J]. 代景友,張新晨,楊維良,吳德全.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2012 (07)
[2]細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路的研究進(jìn)展[J]. 王力儉,田可川,吳偉偉,徐新明,張廷虎,張艷花,哈尼克孜.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2011(10)
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[4]p53基因研究進(jìn)展[J]. 閆毓秀,張淑萍,滑靜.  北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào). 2009(02)
[5]不同蛋白質(zhì)來(lái)源對(duì)早期斷奶犢牛胃腸道形態(tài)發(fā)育的影響(二)[J]. 李輝,刁其玉,張乃鋒,屠焰.  動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2009(02)
[6]腫瘤抑制基因p53的研究進(jìn)展[J]. 成秀梅.  現(xiàn)代診斷與治療. 2008(03)
[7]影響犢牛瘤胃發(fā)育的因素研究[J]. 張海濤,王加啟,卜登攀,周凌云,魏宏陽(yáng).  乳業(yè)科學(xué)與技術(shù). 2008(02)
[8]反芻動(dòng)物瘤胃上皮發(fā)育規(guī)律及影響因素[J]. 何軍,陳代文.  中國(guó)草食動(dòng)物. 2007(05)
[9]Bcl-2/Bax比率與細(xì)胞“命運(yùn)”[J]. 王衛(wèi)東,陳正堂.  中國(guó)腫瘤生物治療雜志. 2007(04)
[10]Bcl-2蛋白家族和p53基因在細(xì)胞凋亡中的調(diào)控效應(yīng)[J]. 周桔,羅榮保,湯長(zhǎng)發(fā),瞿樹林.  中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2007(10)



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