哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞的生發(fā)泡（germinal vesicle,GV）染色質(zhì)最初是不凝集的,隨著卵母細(xì)胞生長(zhǎng),染色質(zhì)會(huì)凝集成不同的構(gòu)型。生發(fā)泡染色質(zhì)構(gòu)型與卵母細(xì)胞發(fā)育能力相關(guān)。然而,過(guò)去報(bào)導(dǎo)的卵母細(xì)胞生發(fā)泡染色質(zhì)構(gòu)型分類標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一,并且不能很好地與卵母細(xì)胞發(fā)育能力聯(lián)系起來(lái)。因此,亟需建立卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型分類標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)而明確其與發(fā)育能力的關(guān)系。此外,玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）可進(jìn)入食物鏈引起健康問(wèn)題,因此研究其對(duì)卵母細(xì)胞的毒性作用對(duì)人類和動(dòng)物的健康生殖都具有重要意義。體內(nèi)和體外ZEN暴露都損傷卵母細(xì)胞的發(fā)育能力,但其作用機(jī)理并不清楚。本研究目的是對(duì)卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型進(jìn)行分類,探究ZEN對(duì)染色質(zhì)構(gòu)型的影響。從GV期染色質(zhì)構(gòu)型角度探索其影響卵母細(xì)胞質(zhì)量的潛在機(jī)制,深入研究卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型與發(fā)育能力的關(guān)系。首先,本研究利用改進(jìn)的能夠清楚地觀察到卵母細(xì)胞核仁和染色質(zhì)的Hoechst33342染色方法,將豬和小鼠GV期卵母細(xì)胞按照染色質(zhì)圍繞核仁凝集程度和在核質(zhì)中的分布情況分為8種構(gòu)型。然后比較大小卵泡、健康與閉鎖、卵巢運(yùn)輸與保存和不同培養(yǎng)基的染色質(zhì)構(gòu)型分布確定各構(gòu)型的發(fā)育能力。最... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：122 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
符號(hào)說(shuō)明
中文摘要
Abstract
1.前言
    1.1 卵母細(xì)胞的成熟
        1.1.1 核成熟與胞質(zhì)成熟
        1.1.2 卵母細(xì)胞的體外成熟
        1.1.3 卵母細(xì)胞胞質(zhì)成熟的標(biāo)志
        1.1.4 影響卵母細(xì)胞成熟和發(fā)育的因素
    1.2 卵母細(xì)胞生發(fā)泡染色質(zhì)構(gòu)型
        1.2.1 卵母細(xì)胞生發(fā)泡
        1.2.2 卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型的概念
        1.2.3 卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型的分類
        1.2.4 卵母細(xì)胞生長(zhǎng)和成熟期間GV染色質(zhì)構(gòu)型變化
        1.2.5 卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型與轉(zhuǎn)錄活性的關(guān)系
        1.2.6 卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型與發(fā)育能力的關(guān)系
        1.2.7 卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型與卵泡閉鎖的關(guān)系
        1.2.8 其他影響卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型的因素
    1.3 玉米赤霉烯酮對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育能力的影響
        1.3.1 玉米赤霉烯酮對(duì)雌性動(dòng)物生殖的影響
        1.3.2 玉米赤霉烯酮對(duì)卵母細(xì)胞紡錘體組裝與染色體整倍性的影響
        1.3.3 玉米赤霉烯酮與氧化應(yīng)激
        1.3.4 玉米赤霉烯酮與染色體畸變
        1.3.5 玉米赤霉烯酮與基因轉(zhuǎn)錄
    1.4 本研究的主要內(nèi)容和目的意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要試劑及配制
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)及小鼠超排處理
        2.2.2 小鼠玉米赤霉烯酮注射方案
        2.2.3 豬卵巢的收集與處理
        2.2.4 豬健康卵泡與閉鎖卵泡的判定
        2.2.5 卵母細(xì)胞的收集
        2.2.6 卵母細(xì)胞生發(fā)泡染色質(zhì)構(gòu)型的觀察
        2.2.7 豬卵丘細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.2.8 卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)
        2.2.9 卵母細(xì)胞的孤雌激活和胚胎培養(yǎng)
        2.2.10 小鼠卵母細(xì)胞ROS水平檢測(cè)
        2.2.11 小鼠卵母細(xì)胞MI期紡錘體染色
        2.2.12 小鼠MII期卵母細(xì)胞染色體延展
        2.2.13 小鼠卵母細(xì)胞JC-1染色
        2.2.14 小鼠卵母細(xì)胞谷胱甘肽水平檢測(cè)
        2.2.15 總體轉(zhuǎn)錄活性的檢測(cè)
        2.2.16 熒光定量PCR
        2.2.17 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 豬和小鼠卵母細(xì)胞GV染色質(zhì)構(gòu)型分類
        3.1.1 豬卵母細(xì)胞GV染色質(zhì)構(gòu)型分類
        3.1.2 小鼠卵母細(xì)胞GV染色質(zhì)構(gòu)型分類
    3.2 豬不同大小卵泡卵母細(xì)胞GV染色質(zhì)構(gòu)型和體外成熟率
        3.2.1 豬1-2mm和3-6mm卵泡的卵母細(xì)胞GV染色質(zhì)構(gòu)型
        3.2.2 豬1-2mm和3-6mm卵泡的卵母細(xì)胞體外成熟率
    3.3 豬健康和閉鎖卵泡卵母細(xì)胞GV染色質(zhì)構(gòu)型和體外成熟率
        3.3.1 豬健康和閉鎖卵泡的卵母細(xì)胞的形態(tài)學(xué)判定
        3.3.2 豬健康和閉鎖卵泡的卵丘細(xì)胞凋亡情況
        3.3.3 豬卵巢直徑1-2mm健康和閉鎖卵泡卵母細(xì)胞GV染色質(zhì)構(gòu)型比例
        3.3.4 豬1-2mm健康和閉鎖卵泡卵母細(xì)胞體外成熟率
        3.3.5 豬卵巢3-6mm健康和閉鎖卵泡卵母細(xì)胞GV染色質(zhì)構(gòu)型比例
        3.3.6 豬3-6mm健康和閉鎖卵泡卵母細(xì)胞體外成熟率
    3.4 卵巢處理對(duì)豬卵母細(xì)胞GV染色質(zhì)構(gòu)型和體外成熟的影響
        3.4.1 卵巢處理對(duì)豬卵母細(xì)胞GV染色質(zhì)構(gòu)型的影響
        3.4.2 卵巢處理對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響
    3.5 豬卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中染色質(zhì)構(gòu)型的動(dòng)態(tài)改變
        3.5.1 豬1-2mm健康卵泡卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中的染色質(zhì)構(gòu)型轉(zhuǎn)變
        3.5.2 豬3-6mm健康卵泡卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中的染色質(zhì)構(gòu)型變化
        3.5.3 豬1-2mm閉鎖卵泡卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中的染色質(zhì)構(gòu)型變化
    3.6 培養(yǎng)基對(duì)豬卵母細(xì)胞GV染色質(zhì)構(gòu)型和體外成熟的影響
        3.6.1 培養(yǎng)基對(duì)豬1-2mm健康卵泡卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型的影響
        3.6.2 培養(yǎng)基對(duì)豬1-2mm健康卵泡卵母細(xì)胞成熟率的影響
        3.6.3 培養(yǎng)基對(duì)豬3-6mm健康卵泡卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型的影響
        3.6.4 培養(yǎng)基對(duì)豬3-6mm健康卵泡卵母細(xì)胞成熟率的影響
    3.7 豬卵母細(xì)胞不同染色質(zhì)構(gòu)型的整體轉(zhuǎn)錄活性
        3.7.1 豬卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型與轉(zhuǎn)錄活性的關(guān)系
        3.7.2 豬卵母細(xì)胞各染色質(zhì)構(gòu)型發(fā)生轉(zhuǎn)錄活動(dòng)的比例
    3.8 Roscovitine抑制GVBD后的豬卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型和發(fā)育能力
        3.8.1 Roscovitine抑制GVBD后的豬卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型
        3.8.2 Roscovitine抑制GVBD后的豬卵母細(xì)胞體外發(fā)育能力
    3.9 豬卵母細(xì)胞GV染色質(zhì)構(gòu)型的轉(zhuǎn)變通路
    3.10 ZEN對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟和染色質(zhì)構(gòu)型的影響
        3.10.1 ZEN對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響
        3.10.2 ZEN對(duì)豬卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型的影響
    3.11 ZEN對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體外成熟胚胎發(fā)育能力的影響
    3.12 ZEN暴露對(duì)小鼠卵母細(xì)胞紡錘體形態(tài)的影響
        3.12.1 ZEN暴露對(duì)小鼠卵母細(xì)胞MI期紡錘體形態(tài)的影響
        3.12.2 ZEN暴露對(duì)小鼠卵母細(xì)胞染色體整倍性的影響
    3.13 ZEN暴露對(duì)小鼠卵母細(xì)胞內(nèi)氧化還原水平的影響
        3.13.1 ZEN暴露對(duì)小鼠卵母細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽水平的影響
        3.13.2 ZEN暴露對(duì)小鼠卵母細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽水平的影響
        3.13.3 ZEN暴露對(duì)小鼠卵母細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的影響
    3.14 ZEN暴露對(duì)小鼠卵母細(xì)胞GV染色質(zhì)構(gòu)型的影響
    3.15 ZEN暴露對(duì)小鼠卵母細(xì)胞GV期基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.15.1 ZEN暴露后小鼠卵母細(xì)胞各染色質(zhì)構(gòu)型與轉(zhuǎn)錄活動(dòng)
        3.15.2 ZEN暴露對(duì)小鼠不同構(gòu)型卵母細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)錄比例的影響
        3.15.3 ZEN暴露對(duì)不同構(gòu)型卵母細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄強(qiáng)度的影響
        3.15.4 ZEN對(duì)小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育能力、紡錘體組裝、氧化還原能力和凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響
4 討論
    4.1 卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型的新分類
        4.1.1 豬卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型的新分類
        4.1.2 小鼠卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型的新分類
    4.2 卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型轉(zhuǎn)變與發(fā)育能力的關(guān)系
        4.2.1 生長(zhǎng)過(guò)程中的卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型轉(zhuǎn)變與發(fā)育能力的關(guān)系
        4.2.2 卵巢處理后的卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型轉(zhuǎn)變與發(fā)育能力的關(guān)系
        4.2.3 閉鎖卵泡中的卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型轉(zhuǎn)變與發(fā)育能力的關(guān)系
        4.2.4 體外培養(yǎng)過(guò)程中的卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型轉(zhuǎn)變與發(fā)育能力的關(guān)系
        4.2.5 不同培養(yǎng)基中卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型轉(zhuǎn)變與發(fā)育能力的關(guān)系
    4.3 各染色質(zhì)構(gòu)型的整體轉(zhuǎn)錄水平轉(zhuǎn)錄與發(fā)育能力
    4.4 ZEN體內(nèi)暴露模型的有效性
    4.5 ZEN暴露損害卵母細(xì)胞的發(fā)育能力
    4.6 ZEN破壞卵母細(xì)胞紡錘體組裝和染色體分離
    4.7 ZEN引起卵母細(xì)胞氧化應(yīng)激
    4.8 ZEN引起卵母細(xì)胞染色質(zhì)構(gòu)型提前凝集
    4.9 ZEN引起卵母細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄水平下降
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：3149573