柔嫩艾美耳球蟲（E.tenella）可以引起以出血和腸道潰爛為特征的雞的球蟲病,給養(yǎng)雞業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前抗球蟲藥物和弱毒疫苗是控制球蟲病的主要手段,然而球蟲耐藥性和活疫苗毒力反強(qiáng)等問題的出現(xiàn)阻礙了對(duì)球蟲病的有效防治,其原因之一是人們對(duì)于雞球蟲的細(xì)胞及分子生物學(xué)特性的了解不夠深入。許多原蟲都含有雙鏈RNA病毒,它們可以影響原蟲的毒力或繁殖能力。有報(bào)道稱攜病毒E.tenella比不攜病毒E.tenella對(duì)雞的感染能力更強(qiáng),而E.tenella病毒和E.tenella之間的關(guān)系目前還不清楚。RNA依賴性RNA聚合酶（RDRP）是E.tenella病毒編碼的一種具有復(fù)制和轉(zhuǎn)錄雙重功能的蛋白。本研究利用酵母雙雜交技術(shù)篩選出RDRP的互作蛋白OTU,并分析了其活性。另有報(bào)道稱OTU是一種端粒相關(guān)蛋白且與端粒酶活性有關(guān),故本研究又通過酵母雙雜交和pull down試驗(yàn)確定了E.tenella端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶RNA結(jié)合區(qū)（TRBD）和E.tenella OTU蛋白的互作關(guān)系,并在此基礎(chǔ)上探討了OTU對(duì)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（TERT）活性的影響。主要研究?jī)?nèi)容如下:柔嫩艾美球蟲病毒RDRP互作蛋白的篩選... 

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【部分圖文】：

pGBKT7-RDRP雙酶切鑒定電泳圖

pGBKT7-RDRP 雙酶切鑒定電15000 DNA marker)；1：pGBKT7-R2：pGBKT7-RDRP 質(zhì)粒圖togram of double enzyme digestioDNAmarker); 1: The result of pGBKTn; 2: The plasmid DNA of pGBKT7-R母細(xì)胞中表達(dá)情況及自激活作 與pGBKT7質(zhì)粒的酵母菌用珠子簽抗體為一抗，山羊抗鼠 HR組蛋白大小為53kDa，如圖1.2活性，且其對(duì)酵母無(wú)毒性作用，

提取酵母蛋白。以 Myc 標(biāo)簽抗體為一抗，山羊抗鼠 HRP 標(biāo)記的 IgG 為二抗，western-blot結(jié)果顯示，試驗(yàn)組蛋白大小為53kDa，如圖1.2所示。α-半乳糖苷酶試驗(yàn)結(jié)果顯示誘餌質(zhì)粒無(wú)自激活活性，且其對(duì)酵母無(wú)毒性作用，鑒定結(jié)果如圖1.3所示。圖 1.2 western-blot 鑒定重組 pGBKT7-RDRP 蛋白在 Y187 中的表達(dá)1：轉(zhuǎn)化重組誘餌載體 pGBKT7-RDRP 的 Y187 酵母蛋白；2：轉(zhuǎn)化 pGBKT7 的 Y187 酵母蛋白Fig.1.2 DetectiontheexpressionofrecombinantRDRPinY187yeastcelllbywestern-blot1: The yeast cell Y187 lysates transformed with pGBKT7-RDRP;2: The yeast cell Y187 lysates transformed with pGBKT724

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]犬賈第蟲病毒轉(zhuǎn)染載體介導(dǎo)的錘頭狀核酶對(duì)KRR1基因體外轉(zhuǎn)錄體切割效果的研究[J]. 陳麗鳳,李建華,鄒亞學(xué),趙月平,曹利利,張西臣.  中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2007(04)
[2]抗病基因Bdv2抑制大麥黃矮病毒復(fù)制和運(yùn)動(dòng)的分子證據(jù)（英文）[J]. 劉曉東,張?jiān)銎G,劉艷,辛志勇.  遺傳學(xué)報(bào). 2005(09)

博士論文
[1]c-Maf的泛素化及其泛素連接酶的研究[D]. 陳國(guó)棟.蘇州大學(xué) 2013

碩士論文
[1]一個(gè)新的TPP1相互作用蛋白OTUB1參與端粒長(zhǎng)度調(diào)節(jié)的作用研究[D]. 王丹.中山大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3131722