本文關鍵詞：雞小腸中多種轉錄因子的表達變化及其對糖轉運蛋白GLUT2的表達調控，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：生長速度慢,飼料轉化率低是我國地方雞種普遍存在的問題。雞腸道的發(fā)育直接影響雞生長速度和飼料轉化率。糖類營養(yǎng)物質的吸收是個體發(fā)育過程中組織器官功能實現的必要條件。這一吸收過程主要由糖類營養(yǎng)轉運蛋白來完成,而糖類營養(yǎng)轉運蛋白基因何時表達,表達量的多少等都要受到多個轉錄調控因子的調控。本研究旨在從腸道營養(yǎng)轉運蛋白表達調控的角度來研究營養(yǎng)吸收問題,在分子水平闡明營養(yǎng)吸收的分子機制,為實現飼料轉化率高的優(yōu)良雞種的育種目標提供研究基礎。本研究選用剛出雛體重相近、發(fā)育正常的雄性愛拔益加肉雞和白來航蛋雞各200只,隨機分為兩組,共四組進行飼養(yǎng)。飼養(yǎng)情況分別為：肉雞飼喂肉雞飼料,肉雞飼喂蛋雞飼料,蛋雞飼喂肉雞飼料及蛋雞飼喂蛋雞飼料。分別測定各組試驗雞1、3、7、14和28日齡的體重、小腸重和小腸長,并檢測了USF1 (Upstream Stimulatory Factor 1, USF1)和GATA3 (GATA Binding Protein 3, GATA3)基因的絕對表達量。研究飼料、雞種及其交互作用對雞小腸USF1和GATA3基因表達量變化與雞生長性狀的影響。另外,糖類營養(yǎng)轉運蛋白GLUT2 (Glucose Transporter 2, GLUT2)是雞小腸中主要的糖類轉運載體,它的表達直接影響雞腸道糖類營養(yǎng)物質的吸收。為了探索轉錄因子CDXA (Caudal Type Homebox Transcription Factor A)、USF1和GATA3通過結合3LUT2基因5’端上游順式作用元件調控該基因表達的機制,本研究構建了真核表達載體pcDNA3.1-CDXA、 pcDNA3.1-USF1和pcDNA3.1-GATA3。對雞小腸上皮細胞(Intestina Epithelial Cells, ICE)進行體外培養(yǎng),通過轉染使轉錄因子CDXA、USF1和GATA3過表達,用絕對熒光定量PCR檢測比較轉染后GLUT2基因表達量的變化。獲得以下主要結果：(1)隨著日齡的增加,愛拔益加肉雞和白來航蛋雞的體重、小腸重和小腸長均在不斷增長,并且USF1和GATA3基因表達量隨著日齡的增加均有極顯著差異(P0.01)。(2)愛拔益加肉雞體重、小腸重和小腸長明顯大于白來航蛋雞(P0.01)。不同飼料對14日齡的雞體重影響差異極顯著(P0.01),而對小腸重影響差異顯著(P0.05),對3日齡和7日齡的雞體重影響差異顯著(P0.05),對28日齡的雞小腸重和小腸長影響差異極顯著(P0.01)。飼料與雞種存在互作效應,對14日齡的雞體重影響差異極顯著(P0.01),對3日齡的雞小腸重影響差異顯著(P0.05),而對7日齡的雞小腸重影響差異極顯著(P0.01),對7日齡的雞小腸長影響差異顯著(P0.05)。(3)愛拔益加肉雞和白來航蛋雞相關性狀及USF1基因表達量在不同飼料間的差異均不顯著(P0.05),而不同飼料間GATA3基因表達量差異顯著(P0.05)。飼料和雞種互作效應對28日齡USF1基因的表達量影響差異顯著(P0.05)。(4)雞種和飼料交互作用對雞生長性狀及USF1和GATA3基因表達量的影響差異均不顯著(P0.05)。(5)CDXA、USF1和GATA3三種轉錄因子過表達后,比較各組糖轉運蛋白基因GLUT2表達量的變化。研究發(fā)現轉錄因子CDXA過表達對IEC細胞中GLUT2基因的表達有抑制作用；轉錄因子USF1和GATA3過表達對GLUT2基因的表達有正調控作用。綜上所述,本研究不僅為家禽營養(yǎng)和育種的研究提供了部分基因表達調控信息,為闡明糖代謝過程中各基因間互作機制提供理論依據,而且為培育具有高飼料轉化率遺傳特性的優(yōu)良雞種提供了研究基礎。
【關鍵詞】：生長性狀 CDXA USF1 GATA3 GLUT2
【學位授予單位】：山西農業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S831
【目錄】：

• 摘要8-10
• 第一章 文獻綜述10-29
• 1 飼料轉化率10-12
• 1.1 飼料轉化率的影響因素10-11
• 1.2 愛拔益加肉雞11
• 1.3 白來航蛋雞11-12
• 2 腸道糖類營養(yǎng)物質的吸收12-19
• 2.1 糖轉運蛋白GLUT212-13
• 2.2 真核轉錄調控13-19
• 3 真核表達載體的構建19-22
• 4 本研究的目的與意義22-24
• 參考文獻24-29
• 第二章 肉雞和蛋雞小腸轉錄因子USF1和GATA3表達分析29-58
• 1 材料與方法29-36
• 1.1 試驗材料29-31
• 1.2 試驗方法31-36
• 2 試驗結果36-51
• 2.1 飼料轉化率分析36-38
• 2.2 各生長階段蛋雞和肉雞的體重、小腸重、小腸長的比較38-43
• 2.3 USF1和GATA3基因標準曲線和熔解曲線43-46
• 2.4 USF1和GATA3基因mRNA表達量測定結果46-50
• 2.5 生長性狀與USFl和GATA3基因表達量相關性分析50-51
• 3 討論51-54
• 3.1 影響飼料轉化率的因素51
• 3.2 雞種、飼料及其互作效應對不同生長階段的雞體重、小腸重和小腸長的影響51-52
• 3.3 實時熒光定量PCR的應用52-53
• 3.4 雞種、飼料及其互作效應對雞小腸中USF1 mRNA表達量的影響53-54
• 3.5 雞種、飼料及其互作效應對雞小腸中GATA3 mRNA表達量的影響54
• 4 小結54-56
• 參考文獻56-58
• 第三章 轉錄因子CDXA、USF1和GATA3真核表達載體的構建58-76
• 1 材料與方法58-69
• 1.1 試驗材料58-60
• 1.2 試驗方法60-69
• 2 結果與分析69-73
• 2.1 基因CDXA、USF1、和GATA3的擴增片段69-70
• 2.2 真核表達載體的酶切鑒定70-73
• 3 討論73-74
• 3.1 真核表達載體73
• 3.2 影響真核表達載體構建的因素73-74
• 4 小結74-75
• 參考文獻75-76
• 第四章 轉錄因子CDXA、USF1、GATA3過表達對糖轉運蛋白GLUT2表達的影響76-98
• 1 材料與方法76-86
• 1.1 試驗材料76-78
• 1.2 試驗方法78-86
• 2 結果與分析86-93
• 2.1 轉錄因子CDXA、USF1和GATA3在GLUT2基因5'調控區(qū)結合位點情況86-87
• 2.2 雞小腸上皮細胞體外分離培養(yǎng)及鑒定結果87-88
• 2.3 雞小腸上皮細胞轉染后形態(tài)學觀察88
• 2.4 IEC中RNA提取結果88-89
• 2.5 GLUT2絕對熒光定量標準曲線和熔解曲線89-90
• 2.6 CDXA基因絕對熒光定量標準曲線和熔解曲線90-91
• 2.7 目的基因mRNA的表達量檢測結果91-93
• 3 討論93-95
• 3.1 雞IEC體外分離培養(yǎng)及轉染93-94
• 3.2 轉錄因子CDXA對GLUT2基因表達的影響94
• 3.3 轉錄因子USF1對GLUT2基因表達的影響94-95
• 3.4 轉錄因子GATA3對GLUT2基因表達的影響95
• 4 小結95-96
• 參考文獻96-98
• 全文結論98-99
• 特色與創(chuàng)新99-100
• 不足與展望100-102
• Abstract102-104
• 附錄104-106
• 致謝106

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