本文關(guān)鍵詞：單核細(xì)胞增生李斯特菌譜系Ⅲ強毒株與弱毒菌株比較基因組及致病力差異機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：單核細(xì)胞增生李斯特菌(簡稱單增李斯特菌,Listeria monocytogenes)為革蘭氏陽性無芽孢桿菌,對環(huán)境耐受性強,可以在寬泛的pH(4.5-9)和溫度(0-45℃)以及高鹽(10%NaCl)條件存活并增殖。該菌是一種重要的食源性人畜共患病原菌,引起敗血癥、腦膜炎、孕婦流產(chǎn)等,病死率高達30%。單增李斯特菌可以分為四個譜系,絕大部分李斯特菌病由譜系Ⅰ和Ⅰ菌株引起；譜系Ⅲ和Ⅳ菌株很少引起人發(fā)病,但他們的致病力差異很大,表明它們?nèi)杂幸l(fā)李斯特菌病的風(fēng)險。單增李斯特菌有一套完整的毒力因子參與胞內(nèi)感染過程,包括InlA和InlB等內(nèi)化素在特異性受體介導(dǎo)下入侵宿主細(xì)胞,LLO、PlcA和PlcB等膜裂解因子裂解吞噬體膜,進入胞漿后由ActA募集宿主細(xì)胞肌動蛋白向鄰近細(xì)胞遷移,進入次級感染的細(xì)胞內(nèi)開始新的感染周期。參與這一感染過程的主要毒力因子均受PrfA正調(diào)控。然而,本實驗室已有的2株同為譜系Ⅲ菌株對小鼠的致病力差異顯著,而且兩者受PrfA調(diào)控的毒力因子表達水平也有明顯差異。此外,單增李斯特菌擁有多套抗酸應(yīng)激系統(tǒng),它們均能獨立發(fā)揮抗酸應(yīng)激作用。已有研究表明,對單增李斯特菌抗酸應(yīng)激貢獻最大的是谷氨酸脫羧酶(GAD)系統(tǒng),該系統(tǒng)由三個谷氨酸脫羧酶和兩個谷氨酸逆向轉(zhuǎn)運因子組成,但目前關(guān)于GAD系統(tǒng)各組分的作用及其抗酸應(yīng)激調(diào)控未見研究。本研究旨在：(1)通過比較基因組學(xué)分析單增李斯特菌譜系Ⅲ強毒與弱毒株致病力差異的分子基礎(chǔ)；(2)探明活化型PrfA澧以及受其調(diào)控蛋白與單增李斯特菌譜系Ⅲ強毒和弱毒株致病表型差異的關(guān)系；(3)解明單增李斯特菌GAD系統(tǒng)各組分作用差異的基礎(chǔ)及其調(diào)控。1.單增李斯特菌譜系Ⅲ強毒株與弱毒株比較基因組學(xué)分析單增李斯特菌譜系Ⅲ弱毒株M7和澳大利亞譜系Ⅲ臨床分離株Lm850658具有相同的生化反應(yīng)特性、毒力基因組成以及極近的親緣關(guān)系,但二者致病表型差異顯著。盡管M7具有強溶脂和溶血活性,但Lm850658的粘附和侵襲能力、細(xì)胞間遷移能力以及對小鼠的致病力均顯著強于M7。基因組比較發(fā)現(xiàn),Lm850658和M7基因組大小分別為2,918,502 bp和2,976,163 bp,分別編碼2885和2977個基因。Lm850658和M7共有2,761個基因的序列完全相同,另有6個基因內(nèi)部缺失和66個基因由SNP導(dǎo)致非同義突變。此外,Lm850658和M7分別有33和130個特異基因。Lm850658特異的基因由一個編碼23個基因的20,099bp(命名為20K)區(qū)域和10個噬菌體相關(guān)基因組成；而M7的特異基因則主要由兩個前噬菌體區(qū)域組成,其中38,450 bp(命名為38K)的前噬菌體編碼52個基因,而43,923bp(命名為44K)的前噬菌體編碼69個基因。其中Lm850658特異的20K區(qū)域為李斯特中首次發(fā)現(xiàn),在NCBI上無同源序列；而弱毒株特異的38K和44K則保守存在于M7、HCC23和L99基因組。通過同源重組技術(shù)敲除Lm850658的20K區(qū)域和M7的38K區(qū)域,雖然20K中有疑似分泌系統(tǒng)蛋白VirB4,38K中有編碼穿孔素和裂解素基因,但它們的缺失均不影響相應(yīng)菌株的粘附和侵襲能力、胞間遷移能力以及小鼠致病力。上述結(jié)果表明單增李斯特菌M7和Lm850658致病力差異并非由它們的前噬菌體編碼的特異基因所致,而是由其它因子決定。2.活化型PrfA對單增李斯特菌譜系Ⅲ強毒株與弱毒株致病性相關(guān)表型的影響單增李斯特菌毒力因子調(diào)控蛋白PrfA氨基酸位點突變(如L140F、G145S和G155S)可致其組成性活化。測序結(jié)果顯示弱毒株M7的prfA與Lm850658和EGDe的存在差異,M7的PrfA為組成性活化型(PrfA145S)。在BHI培養(yǎng)基或全血,M7中受PrfA調(diào)控的毒力基因轉(zhuǎn)錄水平顯著高于Lm850658和EGDe。將Lm850658和M7的prfA相互置換后。對于強毒株Lm850658, PrfA活化可以顯著增強其溶血和溶脂活性、細(xì)胞毒性以及對Caco-2和HepG2細(xì)胞的粘附和侵襲能力,而對于弱毒株M7, PrfA置換成非活化型后對細(xì)胞的粘附和侵襲能力則低于親本株;PrfA活化與否并不顯著性影響強毒和弱毒株本身的胞間遷移能力和胞內(nèi)存活能力；PrfA活化可以顯著增強Lm850658對免疫抑制ICR小鼠的致病力。我們進一步通過免疫印跡比較prfA突變株全菌蛋白中PrfA調(diào)控的毒力因子表達水平,無論是強毒株還是弱毒株,活化型PrfA均能導(dǎo)致相關(guān)毒力因子的高表達。但是分別提取細(xì)菌表面結(jié)合蛋白和培養(yǎng)上清的分析結(jié)果顯示,弱毒株M7的InlB在細(xì)菌表面的豐度顯著低于PrfA活化型的Lm850658；而在培養(yǎng)上清中的結(jié)果正好相反,野生型M7的InlB則顯著高于PrfA活化型的Lm850658。ActA、LLO和InlA在強毒和弱毒株表面和上清中的分布并無顯著性差異。上述結(jié)果表明,菌株M7的InlB(李斯特菌黏附與侵襲的主要蛋白)不能有效錨定在細(xì)菌表面可能是其黏附和侵襲力低的主要原因之一；雖然ActA在菌體表面的結(jié)合程度沒有發(fā)生改變,但其錨定方式可能不同于強毒株,進而導(dǎo)致細(xì)胞間遷移能力下降和液體培養(yǎng)基中聚集性降低；這些主要毒力因子在菌體表面錨定異�？赡苁荕7菌株致病力顯著降低的主要因素。由于ActA等蛋白的氨基酸序列在M7和Lm850658之間沒有差異,我們推測這種錨定異常可能與M7菌體細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)差異有關(guān),ActA等蛋白是通過其GW基序與磷壁酸(lipoteichoic acid)的結(jié)合錨定在菌體表面的。因此,從細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)及其與黏附和侵襲相關(guān)毒力因子在菌體表面的結(jié)合能力作為切入點,深入探索磷壁酸等細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)相關(guān)分子的代謝及其與InlB等蛋白錨定的關(guān)系,可能解開類似M7等菌株的弱毒機制。3.單增李斯特菌GAD系統(tǒng)各組分作用比較及其調(diào)控單增李斯特菌10403S的抗酸應(yīng)激能力最強,其次依次是Lm850658、M7和EGDe。比較基因組分析發(fā)現(xiàn)FoF1-ATPase系統(tǒng)保守存在于四個菌株中；10403S和EGDe擁有完整的ADI、AgDI以及GAD系統(tǒng)；而Lm850658和M7則缺失AgDI和gadDl/gadTl。在10403S中,gadD2對抗酸應(yīng)激貢獻最大,某次依次為sigB、gadD3、aguAl和arcA,而aguA2和gadDl基本不貢獻抗酸應(yīng)激作用。轉(zhuǎn)錄水平分析顯示,gadT2/gadD2在10403S中的轉(zhuǎn)錄水平最高,gadD3次之,gadD1/gadTl最低。分析不同菌株GAD系統(tǒng)的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)現(xiàn),10403S的gadT2/gadD2轉(zhuǎn)錄水平顯著高于EGDe,但它們的gadDl/gadTl和gadD3的轉(zhuǎn)水平相當(dāng)；M7和Lm850658的gadD2轉(zhuǎn)錄水平與10403S相當(dāng),但其gadT2顯著低于10403S。免疫印跡顯示,除了EGDe未檢測到GadD2的表達外,其余各菌株的GadD2相對表達量相當(dāng),且GadD2的表達量顯著高于GadD3。上述結(jié)果表明,GAD系統(tǒng)不同組分菌均具有抗酸應(yīng)激作用,但其抗酸應(yīng)激貢獻大小可能與其表達量正相關(guān)；尤其是GadT2/GadD2的表達量是決定不同菌株抗酸應(yīng)激能力差異的主要因素。分析不同菌株GAD系統(tǒng)各基因的啟動子序列發(fā)現(xiàn),10403S和EGDe之間的gadTl1、gadT2和gadD3的啟動子序列高度保守,但gfp報告基因分析結(jié)果顯示,僅PgadT2和PgadD3能啟動gfp的表達,而且在不同菌株中啟動子活性各異：PgadT2在10403S和Lm850658中的活性最強,在M7中較弱,在EGDe中無活性；PgadD3在10403S和EGDe中的活性相當(dāng),但顯著低于PgadT2,PgadD3-gfP在Lm850658和M7中不表達。上述結(jié)果表明,不同菌株間抗酸能力差異與GadT2/GadD2的表達量有關(guān),其表達量的差異可能受某個轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控。然而,通過表達水平和報告基因分析發(fā)現(xiàn)GAD系統(tǒng)并不響應(yīng)酸應(yīng)激；除gadD3受應(yīng)激調(diào)控因子SigB正調(diào)控外,gadTl和gadT2lgadD2均不受SigB調(diào)控；此外,GAD系統(tǒng)亦不受五個疑似GAD轉(zhuǎn)錄活化因子GadRs的調(diào)控。有趣的是,在pH為8.8的弱堿應(yīng)激條件下,gadT2/gadD2的轉(zhuǎn)錄水平和PgadT2報告基因表達水平顯著下調(diào)。因此,決定GAD系統(tǒng)抗酸應(yīng)激主要蛋白GadD2/GaDT2菌株間表達能力差異及其在堿性應(yīng)激條件下的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子還有待進一步研究。綜上所述,本研究證明了整合在基因組特定位置的三個前噬菌體只貢獻李斯特菌的多樣性,對致病力無影響；初步闡明了InlB等毒力因子在菌體表面的錨定異常是單增李斯特菌譜系Ⅲ菌株M7弱毒的主要因素；探明了GAD系統(tǒng)中GadD2/GaDT2菌株間表達量差異決定抗酸能力。研究結(jié)果為深入探索單增李斯特菌的致病和抗應(yīng)激機制提供了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：單核細(xì)胞增生李斯特菌 比較基因組學(xué) 毒力調(diào)控因子PrfA 谷氨酸脫羧酶 抗酸應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 摘要11-15
• ABSTRACT15-20
• 第一部分20-58
• 1 單核細(xì)胞增生李斯特菌概述22
• 2 單核細(xì)胞增生李斯特菌的致病力22-28
• 3 單核細(xì)胞增生李斯特菌的致病機理28-30
• 4 單核細(xì)胞增生李斯特菌的毒力因子及其調(diào)控30-52
• 4.1 粘附與侵襲相關(guān)因子30-39
• 4.2 細(xì)胞內(nèi)增殖相關(guān)因子39-45
• 4.3 細(xì)胞間遷移相關(guān)因子45-48
• 4.4 單核細(xì)胞增生李斯特菌的毒力調(diào)控因子48-52
• 5 單核細(xì)胞增生李斯特菌的抗酸應(yīng)激作用52-56
• 5.1 酸耐受反應(yīng)52
• 5.2 精氨酸脫亞胺酶和鯡精氨脫亞胺酶系統(tǒng)52-53
• 5.3 F_0F_1-ATPase系統(tǒng)53-54
• 5.4 谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)54-56
• 6 研究目的56-58
• 第二部分58-198
• 第一章 單核細(xì)胞增生李斯特菌譜系Ⅲ強毒株與弱毒株比較基因組60-112
• 第一節(jié) 單核細(xì)胞增生李斯特菌強毒株與弱毒菌株的生物學(xué)特性60-79
• 摘要60-61
• 1 材料與方法61-69
• 1.1 菌株及培養(yǎng)條件61-62
• 1.2 主要試劑62
• 1.3 譜系Ⅲ菌株生化特性與基因分析62
• 1.4 生長特性與溶脂溶血活性62-63
• 1.5 小鼠毒力試驗63-64
• 1.6 粘附與侵襲試驗64-65
• 1.7 全菌多抗制備與免疫熒光65-66
• 1.8 細(xì)胞間遷移試驗66-68
• 1.9 巨噬細(xì)胞內(nèi)生長試驗68-69
• 2 結(jié)果69-79
• 2.1 生化反應(yīng)特性69
• 2.2 毒力基因與看家基因分析69-73
• 2.3 生長特性73
• 2.4 溶脂與溶血表型73-74
• 2.5 小鼠毒力74-75
• 2.6 粘附與侵襲能力75
• 2.7 全菌多抗效果75-76
• 2.8 細(xì)胞間遷移能力76-78
• 2.9 巨噬細(xì)胞中生存能力78-79
• 第二節(jié) 單核細(xì)胞增生李斯特菌譜系Ⅲ強毒株與弱毒株全基因組比較79-90
• 摘要79-80
• 1 材料與方法80-82
• 1.1 菌株及培養(yǎng)條件80
• 1.2 主要試劑80
• 1.3 基因組DNA的提取80-81
• 1.4 全基因組測序81-82
• 1.5 基因組序列注釋與分析82
• 2 結(jié)果82-90
• 2.1 基因組DNA的質(zhì)量82
• 2.2 強毒株與弱毒株基因組特點82-83
• 2.3 強毒株與弱毒株基因組差異分析83-90
• 第三節(jié) 前噬菌體對單核細(xì)胞增生李斯特菌致病力的影響90-109
• 摘要90-91
• 1 材料與方法91-97
• 1.1 菌株及培養(yǎng)條件91
• 1.2 主要試劑91-92
• 1.3 譜系Ⅲ強毒株與弱毒株特異性區(qū)域分析92-93
• 1.4 基因缺失株的構(gòu)建93-97
• 1.5 粘附與侵襲試驗97
• 1.6 細(xì)胞間遷移試驗97
• 1.7 小鼠毒力試驗97
• 2 結(jié)果97-109
• 2.1 20K、38K和44K特異區(qū)域的基因構(gòu)成97-102
• 2.2 20K、38K和44K特異區(qū)域在單增李斯特菌中的分布102-105
• 2.3 20K、38K和44K缺失株的鑒定105-106
• 2.4 20K、38K和44K區(qū)域缺失對單增李斯特菌致病力的影響106-109
• 第四節(jié) 討論109-112
• 1 單核細(xì)胞增生李斯特菌譜系Ⅲ菌株的致病性109
• 2 單核細(xì)胞增生李斯特菌比較基因組109-110
• 3 前噬菌體對單核細(xì)胞增生李斯特菌致病性的影響110-112
• 第二章 單核細(xì)胞增生李斯特菌譜系Ⅲ強毒株與弱毒株致病力差異機制的探索112-155
• 第一節(jié) 主要毒力因子抗體制備與表達GFP的李斯特菌的構(gòu)建112-122
• 摘要112-113
• 1 材料與方法113-118
• 1.1 菌株及培養(yǎng)條件113-114
• 1.2 主要試劑114
• 1.3 主要毒力因子表達質(zhì)粒構(gòu)建與誘導(dǎo)表達114-116
• 1.4 蛋白純化116
• 1.5 抗體制備116-117
• 1.6 構(gòu)建表達GFP的單增李斯特菌117-118
• 2 結(jié)果118-122
• 2.1 原核表達質(zhì)粒的鑒定118-119
• 2.2 蛋白表達與純化119
• 2.3 抗體效價與特異性119-120
• 2.4 GFP表達質(zhì)粒的鑒定120
• 2.5 表達GFP的單增李斯特菌的篩選120-121
• 2.6 表達GFP的單增李斯特菌用于感染試驗121-122
• 第二節(jié) 活化型PrfA對單核細(xì)胞增生李斯特菌譜系Ⅲ強毒株與弱毒株致病力的影響122-137
• 摘要122-123
• 1 材料與方法123-129
• 1.1 菌株與細(xì)胞及其培養(yǎng)條件123
• 1.2 主要試劑123-124
• 1.3 PrfA序列分析124
• 1.4 受PrfA調(diào)控的毒力基因轉(zhuǎn)錄水平分析124-126
• 1.5 強毒株與弱毒株prfA置換突變株的構(gòu)建126-127
• 1.6 溶脂溶血活性與細(xì)胞毒性127-128
• 1.7 粘附與侵襲試驗128
• 1.8 細(xì)胞間遷移試驗128
• 1.9 小鼠毒力試驗128-129
• 2 結(jié)果129-137
• 2.1 PrfA序列分析129
• 2.2 PrfA調(diào)控的毒力基因轉(zhuǎn)錄水平129-130
• 2.3 prfA突變株的溶脂溶血活性和細(xì)胞毒性130-132
• 2.4 prfA突變株的粘附與侵襲能力132-134
• 2.5 prfA突變株的細(xì)胞間遷移能力134-135
• 2.6 prfA突變株對小鼠的致病力135-137
• 第三節(jié) 單核細(xì)胞增生李斯特菌強毒株與弱毒株感染能力差異的分子基礎(chǔ)探索137-152
• 摘要137-138
• 1 材料與方法138-143
• 1.1 菌株及培養(yǎng)條件138
• 1.2 主要試劑138-139
• 1.3 細(xì)菌表面蛋白和培養(yǎng)上清蛋白的提取139
• 1.4 免疫印跡分析139-140
• 1.5 質(zhì)譜分析140
• 1.6 細(xì)菌沉降試驗140
• 1.7 透射電鏡140-141
• 1.8 抗生素敏感性分析141
• 1.9 分泌系統(tǒng)及細(xì)胞壁代謝相關(guān)基因差異分析141
• 1.10 細(xì)胞壁代謝相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平分析141-143
• 2 結(jié)果143-152
• 2.1 PrfA活化型菌株的相關(guān)毒力因子高表達143
• 2.2 弱毒株M7中高表達的InlB不能有效錨定在細(xì)菌表面143-145
• 2.3 差異蛋白質(zhì)譜鑒定145
• 2.4 ActA介導(dǎo)單增李斯特菌的沉降145-146
• 2.5 細(xì)胞壁的透射電鏡分析146
• 2.6 對靶向細(xì)胞壁的抗生素的敏感性146-147
• 2.7 李斯特菌分泌系統(tǒng)和細(xì)胞壁代謝相關(guān)基因的差異147-148
• 2.8 李斯特菌細(xì)胞壁代謝相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平分析148-152
• 第四節(jié) 討論152-155
• 1 活化型PrfA與單核細(xì)胞增生李斯特菌的致病力的關(guān)系152-153
• 2 毒力因子錨定與單核細(xì)胞增生李斯特菌致病力的關(guān)系153-155
• 第三章 單核細(xì)胞增生李斯特菌譜系Ⅲ強毒株與弱毒株抗酸應(yīng)激能力差異機制155-198
• 第一節(jié) 單核細(xì)胞增生李斯特菌抗酸應(yīng)激系統(tǒng)及其抗酸應(yīng)激作用155-165
• 摘要155-156
• 1 材料與方法156-158
• 1.1 菌株及培養(yǎng)條件156
• 1.2 主要試劑156-157
• 1.3 抗酸應(yīng)激系統(tǒng)比較157
• 1.4 谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)缺失株構(gòu)建157-158
• 1.5 抗酸應(yīng)激試驗158
• 2 結(jié)果158-165
• 2.1 強毒株與弱毒株的抗酸應(yīng)激能力158-159
• 2.2 強毒株與弱毒株的抗酸應(yīng)激系統(tǒng)159-162
• 2.3 谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)基因缺失株的鑒定162
• 2.4 不同抗酸應(yīng)激系統(tǒng)的抗酸應(yīng)激作用比較162-165
• 第二節(jié) 單核細(xì)胞增生李斯特菌谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)抗酸應(yīng)激作用差異的基礎(chǔ)165-176
• 摘要165-166
• 1 材料與方法166-170
• 1.1 菌株及培養(yǎng)條件166-167
• 1.2 主要試劑167
• 1.3 熒光定量PCR167-168
• 1.4 谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)相關(guān)蛋白表達與抗體制備168
• 1.5 免疫印跡168-169
• 1.6 抗酸應(yīng)激試驗169-170
• 2. 結(jié)果170-176
• 2.1 谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平分析170-171
• 2.2 原核表達蛋白純化與抗體制備171-173
• 2.3 谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)相關(guān)基因表達水平分析173-174
• 2.4 谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)表達量與抗酸應(yīng)激能力的相關(guān)性174-176
• 第三節(jié) 單核細(xì)胞增生李斯特菌谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)的調(diào)控176-195
• 摘要176-177
• 1 材料與方法177-182
• 1.1 菌株及培養(yǎng)條件177
• 1.2 主要試劑177-178
• 1.3 谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)報告基因的構(gòu)建178-179
• 1.4 酸應(yīng)激對GAD系統(tǒng)的調(diào)控作用179-180
• 1.5 應(yīng)激調(diào)控因子SigB對谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)的調(diào)控作用180
• 1.6 GadR對GAD系統(tǒng)的調(diào)控作用180-181
• 1.7 堿應(yīng)激對GAD系統(tǒng)的調(diào)控作用181-182
• 2 結(jié)果182-195
• 2.1 不同菌株中谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)啟動子序列分析182-185
• 2.2 不同菌株中報告基因的表達情況185-188
• 2.3 酸應(yīng)激對谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)表達的影響188-189
• 2.4 應(yīng)激調(diào)控因子SigB對GAD系統(tǒng)的調(diào)控189-191
• 2.5 GadR不參與調(diào)控谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)191-192
• 2.6 堿應(yīng)激對谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)的影響192-195
• 第四節(jié) 討論195-198
• 1 單增李斯特菌的抗酸應(yīng)激系統(tǒng)及其抗酸應(yīng)激能力195-196
• 2 單增李斯特菌谷氨酸脫羧酶系統(tǒng)的抗酸應(yīng)激作用及其調(diào)控196-198
• 全文結(jié)論198-200
• 創(chuàng)新點200-202
• 展望202-203
• 參考文獻203-224
• 作者簡介224-226
• 攻讀博士學(xué)位期間的科研成果226-228
• 致謝228-229

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 梁啟平;陳健舜;陳巧妙;勞華均;黃紹棠;方維煥;;進口水產(chǎn)品中單增李斯特菌的分子流行病學(xué)特點[J];微生物學(xué)報;2009年06期

  本文關(guān)鍵詞：單核細(xì)胞增生李斯特菌譜系Ⅲ強毒株與弱毒菌株比較基因組及致病力差異機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：256391