本文關(guān)鍵詞：Cited2水平對小鼠和人卵子質(zhì)量和胚胎發(fā)育的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2015年

Cited2水平對小鼠和人卵子質(zhì)量和胚胎發(fā)育的影響

方園  

【摘要】：Cited2是調(diào)節(jié)著床后胚胎(胎兒)正常發(fā)育的轉(zhuǎn)錄輔助因子之一。目前,關(guān)于Cited2在卵母細(xì)胞成熟及早期胚胎發(fā)育過程中的作用未見報(bào)道,本研究旨在探索Cited2在卵母細(xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育過程中的作用。 蛋白表達(dá)分析結(jié)果表明：Cited2蛋白主要表達(dá)于生長卵泡中。隨后,通過對GV、GVBD. MI和Mil階段的卵母細(xì)胞進(jìn)行Cited2基因表達(dá)分析,研究其在卵母細(xì)胞成熟過程中的表達(dá)情況。結(jié)果表明：Cited2mRNA水平在卵母細(xì)胞成熟過程中基本保持不變；Cited2蛋白在小鼠GV期卵母細(xì)胞中表達(dá)量較高并且主要定位于生發(fā)泡中,而在小鼠MⅡ期卵母細(xì)胞中表達(dá)最低并彌散于胞質(zhì)中。相對于發(fā)育潛力高的SN型(surrounded nucleolus,染色質(zhì)凝聚于核仁周圍成環(huán)狀)GV期卵母細(xì)胞,Cited2蛋白在發(fā)育潛力低的NSN (non surrounded nucleolus,染色質(zhì)松散)型GV期卵母細(xì)胞中表達(dá)更高。此外,Cited2蛋白水平在發(fā)育潛力低(形態(tài)異常)的小鼠GV期卵母細(xì)胞中顯著高于發(fā)育潛力高(形態(tài)正常)的GV期卵母細(xì)胞,在體外老化的小鼠卵母細(xì)胞顯著高于未老化的卵母細(xì)胞。隨后,通過注射siRNA減少GV期卵母細(xì)胞中Cited2蛋白水平,加速了卵母細(xì)胞核成熟；而注射GFP-Cited2mRNA升高卵母細(xì)胞中Cited2蛋白水平,則抑制了卵母細(xì)胞GVBD的發(fā)生和極體排出。 同時(shí),Cited2基因在(1-、2-、4-和8-細(xì)胞)卵裂期胚胎、桑葚胚、囊胚和孵化囊胚各發(fā)育階段胚胎中的表達(dá)量也逐漸降低。通過注射GFP-Cited2mRNA升高小鼠原核期胚胎的Cited2水平將會阻滯胚胎后期發(fā)育,主要表現(xiàn)為2-細(xì)胞期胚胎發(fā)育阻滯。RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)p21waf/cip1mRNA水平在Cited2基因超表達(dá)的小鼠胚胎中顯著高于對照組胚胎。以上小鼠研究結(jié)果表明：Cited2水平和小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育質(zhì)量相關(guān)。隨后,本實(shí)驗(yàn)探討Cited2的水平過高是否也會影響人和家畜的卵母細(xì)胞質(zhì)量。 卵母細(xì)胞老化是影響家畜卵母細(xì)胞質(zhì)量和發(fā)育潛力的重要原因之一。通過RT-PCR檢測,本研究發(fā)現(xiàn)Cited2水平在體外老化的豬卵母細(xì)胞中顯著升高。隨后,通過H2O2和防線菌酮(CHX)處理分別升高和降低豬卵母細(xì)胞胞內(nèi)活性氧物質(zhì)(ROS)水平,發(fā)現(xiàn)ROS水平升高是豬卵細(xì)胞老化和碎裂的原因之一。隨后,RT-PCR分析表明ROS水平升高促進(jìn)老化豬卵母細(xì)胞中Cited2、PPARy和bim的表達(dá)。 現(xiàn)有研究表明：卵丘細(xì)胞中相關(guān)基因的表達(dá)水平能夠在一定程度上反映胚胎的發(fā)育潛力,因此本實(shí)驗(yàn)就卵丘細(xì)胞中Cited2水平利人胚胎發(fā)育潛力的關(guān)系進(jìn)行研究。蛋白表達(dá)分析結(jié)果表明：病人卵丘細(xì)胞中的Cited2蛋白水平各不相同。本研究將卵丘細(xì)胞中Cited2水平在整體均值以上的IVF病人歸入Cited2高表達(dá)組,均值以下則歸入低表達(dá)組。隨后,按分組統(tǒng)計(jì)IVF病人的臨床數(shù)據(jù)和胚胎數(shù)據(jù)。在Cited2高表達(dá)組病人中,這些病人在IVF周期中獲取的卵母細(xì)胞表現(xiàn)出較低的受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、著床率和妊娠率。此外,Cited2高表達(dá)組病人血清中基礎(chǔ)卵泡刺激激素(FSH)水平明顯下降,其卵丘細(xì)胞表現(xiàn)出較高的活性Caspase-3表達(dá)水平。定量RT-PCR分析表明,Cited2高表達(dá)組病人卵丘細(xì)胞中葡萄糖代謝相關(guān)基因(PCK1)和孕酮受體(PR)基因的表達(dá)及胞內(nèi)葡萄糖水平也明顯升高。對于ICSI病人,卵丘細(xì)胞中Cited2蛋白水平升高也會導(dǎo)致胚胎發(fā)育潛力下降。 綜上,我們得到以下結(jié)論：1) Cited2水平過高會抑制小鼠卵母細(xì)胞核成熟和早期胚胎發(fā)育。2) Cited2水平升高與卵母細(xì)胞發(fā)育潛力下降相關(guān)。3)人卵丘細(xì)胞中Cited2水平過高與受精后胚胎發(fā)育潛力下降相關(guān)。本研究首次發(fā)現(xiàn)了Cited2基因在小鼠卵母細(xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育過程中的表達(dá)規(guī)律和作用,以及Cited2水平升高與卵母細(xì)胞和胚胎發(fā)育潛力下降的關(guān)系。豐富了哺乳動物的卵母細(xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育理論,為人胚胎發(fā)育潛力預(yù)測提供新的理論依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S814
【目錄】：

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