本文關(guān)鍵詞：PCV2體外培養(yǎng)特性的研究及HMGCR對PCV2復(fù)制的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《吉林大學(xué)》 2015年

PCV2體外培養(yǎng)特性的研究及HMGCR對PCV2復(fù)制的影響

楊鑫  

【摘要】：豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）引起的豬圓環(huán)病毒病（PCVAD）呈世界性分布，，是近幾年影響世界養(yǎng)豬業(yè)最重要的病毒性傳染病之一，目前本病尚無特效藥物。一方面由于該病毒生長較為緩慢，在體外培養(yǎng)時病毒滴度較低；另一方面PCV2基因組小，編碼蛋白數(shù)量少，從而限制了靶向抗病毒藥物的研發(fā)。因此，研究PCV2培養(yǎng)特性、PCV2與宿主的相互作用，對于深入了解病毒的致病機(jī)理、尋找阻斷病毒復(fù)制的方法、篩選有效的藥物靶標(biāo)具有非常重要的理論意義和實(shí)際應(yīng)用價值。 本研究從斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）患病豬的肺臟中分離了一株P(guān)CV2，將其命名為PCV2CC1毒株。通過全基因組測序確定其基因分型為PCV2b型。 PCV2基因組小，編碼蛋白數(shù)量少，需要依賴宿主蛋白來完成其復(fù)制周期。根據(jù)PCV2的復(fù)制特點(diǎn)分別用D-氨基葡萄糖、NH4Cl、甲基-β-環(huán)糊精（MβCD）、艱難梭菌毒素B、刀豆蛋白A（ConA）、重組豬II型白介素（IL-2）和干擾素γ（IFN-γ）處理PK-15細(xì)胞系，并對PCV2的增殖效果進(jìn)行比較。結(jié)果表明IL-2、ConA、D-氨基葡萄糖和MβCD可持續(xù)促進(jìn)PCV2在PK-15細(xì)胞系中的增殖，且D-氨基葡萄糖、ConA和甲基-β-環(huán)糊精聯(lián)合處理對PCV2增殖的促進(jìn)效果更為明顯。 3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶（HMGCR）是膽固醇生物合成途徑的限速酶，可參與多種病毒的感染過程，然而目前尚無HMGCR與PCV2感染相關(guān)的報道。前期實(shí)驗(yàn)表明，用MβCD處理宿主細(xì)胞降低細(xì)胞膜膽固醇后，可促進(jìn)病毒的復(fù)制。因此，推測HMGCR對PCV2感染有影響。本研究發(fā)現(xiàn)，接種PCV2后PK-15細(xì)胞系中HMGCR的磷酸化水平升高，說明PCV2感染可降低細(xì)胞中HMGCR活性，因此推測HMGCR可能影響PCV2在PK-15細(xì)胞系中的復(fù)制。通過轉(zhuǎn)基因方法構(gòu)建了穩(wěn)定的HMGCR高表達(dá)細(xì)胞株P(guān)K-HMG；利用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建了HMGCR基因沉默細(xì)胞株P(guān)K-shHMG；根據(jù)顯性負(fù)性突變原理，將豬源HMGCR的S869磷酸化位點(diǎn)突變，構(gòu)建了HMGCR顯性負(fù)突變細(xì)胞株P(guān)K-S869Amutant，從而檢測上述細(xì)胞株中HMGCR的表達(dá)量對PCV2復(fù)制的影響。結(jié)果表明HMGCR高表達(dá)后PCV2的復(fù)制量顯著下降，而HMGCR基因沉默細(xì)胞株中的PCV2復(fù)制效果則顯著增強(qiáng)，說明PCV2的產(chǎn)量與宿主細(xì)胞中HMGCR的表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。 同時，還發(fā)現(xiàn)HMGCR顯性負(fù)突變細(xì)胞株在接種PCV2后48h時即發(fā)生明顯的細(xì)胞凋亡。比較幾種細(xì)胞株在接種PCV2后48h時的細(xì)胞凋亡程度和Caspase-3的活性，結(jié)果表明與對照細(xì)胞和HMGCR基因沉默細(xì)胞相比，HMGCR顯性負(fù)突變細(xì)胞在PCV2感染48h時發(fā)生更為明顯的細(xì)胞凋亡，且Caspase-3活性顯著升高；用Caspase-3抑制劑Z-VAD-FMK處理HMGCR顯性負(fù)突變細(xì)胞后，細(xì)胞中Caspase-3的活性顯著下降，而PCV2在HMGCR顯性負(fù)突變細(xì)胞中的復(fù)制則顯著增強(qiáng)，且與Caspase-3抑制劑的濃度呈劑量依賴關(guān)系。這些結(jié)果表明，HMGCR的表達(dá)量與PCV2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡呈負(fù)相關(guān)。 為進(jìn)一步證實(shí)上述結(jié)果，本研究構(gòu)建了PCV2感染的BALB/c小鼠動物模型，采用灌胃的方法每日定量給藥，從而在體內(nèi)研究了HMGCR抑制劑(阿托伐他汀)對PCV2復(fù)制的影響。結(jié)果表明，阿托伐他汀處理可促進(jìn)PCV2在小鼠體內(nèi)的復(fù)制，與體外研究結(jié)果相符。對腸系膜淋巴結(jié)進(jìn)行免疫組化檢測，結(jié)果顯示，PCV2主要定位于淋巴細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻(xiàn)

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 羅維;趙墩;蔣大良;余興龍;;適合豬圓環(huán)病毒2生長的PK15均質(zhì)細(xì)胞株的構(gòu)建[J];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2013年04期

2 ;Maintaining cholesterol homeostasis: Sterol regulatory element-binding proteins[J];World Journal of Gastroenterology;2004年21期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 董發(fā)明;龍塔;潘耀謙;張蓓;趙德明;;斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征淋巴結(jié)和脾臟病理組織學(xué)研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年25期

2 王振生;李煥榮;崔德鳳;孫英健;馬樂;;疑似PMWS患豬中PCV2的分離及全基因組序列分析[J];北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報;2007年03期

3 王忠田,楊漢春,呂艷麗;豬圓環(huán)病毒II型ORF2基因的克隆及序列分析[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2003年01期

4 趙立峰;斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2004年05期

5 賈貝貝,劉興友,劉長明;豬圓環(huán)病毒引發(fā)的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征致病機(jī)理[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2005年09期

6 尹業(yè)師;黃偉堅;陳瓊;劉海鵬;謝麗華;馮建遠(yuǎn);;豬圓環(huán)病毒感染的病理組織學(xué)和致病機(jī)理研究進(jìn)展[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2006年11期

7 趙鴻雁;李俊;叢曉燕;曹帥;王文志;張秀美;王金寶;;PCV-2 ORF2和PRRSV ORF5基因的擴(kuò)增與雙基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2006年11期

8 曾政;米自由;熊仲良;楊澤林;王健;;重慶市規(guī)模豬場豬病流行狀況調(diào)查[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年02期

9 鄭敏;;豬2型圓環(huán)病毒病病原學(xué)研究[J];福建畜牧獸醫(yī);2008年S1期

10 聶立欣,孔小明,羅滿林;斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征的免疫學(xué)研究進(jìn)展[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2003年02期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 尹雙輝;豬圓環(huán)病毒2型衣殼蛋白病毒樣顆粒的制備及其免疫原性的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

2 陳楊;PPV和PCV2核酸疫苗及PRV-PPV-PCV2基因工程疫苗的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 邢福珊;PCV-2 ORF2蛋白在桿狀病毒表面的展示及動物免疫試驗(yàn)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2011年

4 李俊;豬圓環(huán)病毒2型遺傳演化及含CpG基序的核酸疫苗研制[D];山東師范大學(xué);2012年

5 王忠田;豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因表達(dá)及重組蛋白ELISA方法的建立[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

6 蘆銀華;華東地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的分子流行病學(xué)調(diào)查及其感染性核酸的構(gòu)建[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

7 周雙海;豬圓環(huán)病毒2型感染對豬肺泡巨噬細(xì)胞功能的影響[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

8 溫立斌;豬圓環(huán)病毒2型的分子流行病學(xué)研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

9 司興奎;豬圓環(huán)病毒2型感染對豬免疫功能影響的細(xì)胞與分子機(jī)制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

10 秦曉冰;PCV2核酸疫苗和重組雞痘病毒疫苗的構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林大學(xué);2005年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 蔣大良;余興龍;;豬圓環(huán)病毒2型致病機(jī)制研究進(jìn)展[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2009年04期

2 劉長明;張超范;危艷武;譚斌;陸月華;谷守林;;豬圓環(huán)病毒2型細(xì)胞培養(yǎng)適應(yīng)毒株的培育和鑒定[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2006年03期

3 彭伍平;王延輝;胡東波;張方彪;姚亞麗;習(xí)向鋒;陶家權(quán);喬榮岑;孫進(jìn)忠;;豬圓環(huán)病毒2型PK15細(xì)胞系高敏感性細(xì)胞的克隆[J];中國獸藥雜志;2010年04期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 段麗麗,文心田,曹三杰,馬曉平;豬圓環(huán)病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2005年06期

2 丁昌春;鄭新勇;楊世興;;豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[J];中國動物檢疫;2006年08期

3 王慧杰;喬宏興;;豬圓環(huán)病毒河南株的分離鑒定[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2007年09期

4 Chun-Ming Lin;王廣秀;;檢測組織石蠟切片中豬圓環(huán)病毒2型間接原位PCR方法的建立與評估[J];中國畜牧獸醫(yī);2009年10期

5 謝昆;胡俊杰;全舒舟;高雨蔓;;豬圓環(huán)病毒的分子生物學(xué)檢測[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2011年01期

6 呂艷麗,楊漢春,郭鑫,陳艷紅,查振林;豬圓環(huán)病毒2型的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)雜志;2004年02期

7 胡哲,冷雪,崔曉華,史紀(jì)新,胡桂學(xué);豬圓環(huán)病毒檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2005年06期

8 殷鷹,聶奎,楊戈,胡燕賓,易華珍;豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[J];畜牧市場;2005年08期

9 王�；�;李艷玲;汪德剛;張桂云;;豬圓環(huán)病毒的研究進(jìn)展[J];家畜生態(tài)學(xué)報;2006年04期

10 劉麗霞;沈國順;;豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[J];畜牧獸醫(yī)雜志;2007年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃立平;劉長明;危艷武;陸月華;郭龍軍;溫士剛;武嘉男;吳洪麗;;檢測豬圓環(huán)病毒2型血清中和抗體阻斷ELISA方法的建立及應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（上冊）[C];2009年

2 程榮華;劉云志;孫健;呼延含蓉;趙欣;邵洪澤;張麗媛;楊金生;;淺談豬圓環(huán)病毒研究現(xiàn)況[A];低碳經(jīng)濟(jì)與科學(xué)發(fā)展——吉林省第六屆科學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2010年

3 王鑫;葉賀佳;李敏;仇微紅;孫招金;梁昭平;;豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會生物制品學(xué)分會中國微生物學(xué)會獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會2010年學(xué)術(shù)年會（第三屆中國獸藥大會學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

4 郎洪武;趙德明;王力;張廣川;程君生;宋立;;豬圓環(huán)病毒分離、鑒定及豬斷奶多系統(tǒng)衰弱綜合征[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)病理學(xué)分會第十一次獸醫(yī)病理學(xué)、第十次動物病理生理學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2001年

5 蘆銀華;談國蕾;陳德勝;陳溥言;;豬圓環(huán)病毒、豬繁殖和呼吸綜合征病毒快速檢測方法的研究[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第五屆理事會第二次全體會議暨防檢疫專業(yè)委員會第7次學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2002年

6 萬遂如;;豬圓環(huán)病毒感染[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

7 王一平;郭龍軍;唐青海;劉長明;;豬圓環(huán)病毒2型疫苗的研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會暨第六屆第十四次教學(xué)專業(yè)委員會論文集[C];2012年

8 翟淑燕;陳興慧;白娟;王先煒;姜平;;豬圓環(huán)病毒2型單克隆抗體研制與夾心ELISA抗原檢測方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

9 張慧敏;盛宗海;韓鶴友;何啟蓋;李文濤;;納米金增強(qiáng)免疫化學(xué)發(fā)光法檢測豬圓環(huán)病毒2型[A];中國化學(xué)會第十五屆全國有機(jī)分析及生物分析學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

10 張寧;侯韶毅;陳云霞;韋英益;李茂寧;肖愛歡;蘭家暖;廖承球;謝麗華;黃偉堅;張遠(yuǎn)波;劉芳;禤雄標(biāo);高永銳;盧桂娟;陸有飛;曾曉飛;;豬圓環(huán)病毒2型核酸疫苗在小鼠攻毒實(shí)驗(yàn)中免疫保護(hù)性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（上冊）[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 臨城縣畜牧辦公室 張榮連;[N];河北科技報;2014年

2 江蘇省農(nóng)科院獸醫(yī)所 俞正玉 林繼煌;[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報;2004年

3 李凱年 譯;[N];中國畜牧水產(chǎn)報;2001年

4 張曉鵬　記者 李麗云;[N];科技日報;2010年

5 記者 尹江勇;[N];河南日報;2010年

6 記者 孟山　李松戰(zhàn);[N];洛陽日報;2010年

7 記者 喬地　通訊員 聞亞麗;[N];科技日報;2010年

8 張曉鵬;[N];農(nóng)民日報;2010年

9 邢臺市獸醫(yī)院 邢蘭君 楊立帆;[N];河北科技報;2014年

10 本報記者 喬地　通訊員 馬焱 鄭世孝;[N];科技日報;2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蘆銀華;華東地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的分子流行病學(xué)調(diào)查及其感染性核酸的構(gòu)建[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

2 司興奎;豬圓環(huán)病毒2型感染對豬免疫功能影響的細(xì)胞與分子機(jī)制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

3 曲連東;豬圓環(huán)病毒2型地方株的分離鑒定和診斷方法的建立及應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

4 華利忠;豬圓環(huán)病毒2型誘導(dǎo)仔豬淋巴細(xì)胞凋亡途徑的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

5 溫立斌;豬圓環(huán)病毒2型的分子流行病學(xué)研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

6 董林;豬圓環(huán)病毒2型診斷試劑盒的研制與應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2014年

7 朱善元;江蘇部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的檢測及其免疫接種試驗(yàn)[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

8 潘群興;豬圓環(huán)病毒2型感染分子診斷與防制的相關(guān)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

9 朱玲;豬圓環(huán)病毒Ⅰ型、Ⅱ型全基因克隆及其基因交換重組的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

10 楊博超;豬圓環(huán)病毒2型的Cap蛋白表達(dá)、單克隆抗體制備及病毒體外感染單核源細(xì)胞的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張敏;豬圓環(huán)病毒2型感染豬肺泡巨噬細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 李文杰;豬圓環(huán)病毒2型分子流行病學(xué)調(diào)查[D];揚(yáng)州大學(xué);2006年

3 鄔良賢;福建省龍巖市豬圓環(huán)病毒感染的流行病學(xué)調(diào)查與防控[D];揚(yáng)州大學(xué);2006年

4 孫麗華;豬群中豬圓環(huán)病毒帶毒情況的調(diào)查及豬圓環(huán)病毒1型熒光定量PCR方法的建立[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

5 邵小雪;嵌合豬圓環(huán)病毒的構(gòu)建及其對仔豬的免疫原性[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 鮑偉華;豬圓環(huán)病毒感染的流行病學(xué)調(diào)查與控制[D];浙江大學(xué);2007年

7 張慧敏;豬圓環(huán)病毒2型檢測新方法研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

8 王克寧;抗豬圓環(huán)病毒藥物體外篩選研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

9 丁婷婷;豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定及其人工感染試驗(yàn)[D];揚(yáng)州大學(xué);2012年

10 孫賢;豬圓環(huán)病毒2型的流行病學(xué)調(diào)查與綜合防控措施研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：PCV2體外培養(yǎng)特性的研究及HMGCR對PCV2復(fù)制的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：202786