本文選題：狂犬病病毒　切入點(diǎn)：細(xì)胞自噬　出處：《華南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(rabies virus,RABV)感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)而引起的一種烈性人獸共患傳染病。感染狂犬病病毒并出現(xiàn)臨床癥狀的人或動(dòng)物幾乎百分之百死亡。預(yù)防和治療狂犬病成為近幾十年的重要課題之一,目前狂犬病以預(yù)防為主,而在治療方面成效寥寥。病毒是一種專性細(xì)胞寄生生物,其依賴生物體復(fù)制和傳播,因此,探討狂犬病病毒與細(xì)胞的生物互作尤為重要。自噬,作為一種細(xì)胞自我保護(hù)性機(jī)制,進(jìn)化上高度保守,廣泛存在于真核生物,其主要功能是將細(xì)胞內(nèi)生物大分子及損壞的細(xì)胞器在溶酶體內(nèi)消化分解后供生物體重新利用,與凋亡、壞死一起稱為三大細(xì)胞死亡機(jī)制。自噬按其功能分為大自噬、微自噬和分子伴侶介導(dǎo)的自噬。自噬和病毒關(guān)系的研究近些年報(bào)道較多,有些病毒具備了逃逸宿主細(xì)胞自噬的功能,有些病毒在長期的進(jìn)化中學(xué)會(huì)了如何利用細(xì)胞自噬來促進(jìn)自身轉(zhuǎn)錄與復(fù)制。彈狀病毒科的其他成員:水皰性口炎病毒(VSV),出血性敗血癥病毒(VHSV)和鯉春病毒血癥病毒(SVCV)能夠誘導(dǎo)細(xì)胞自噬,但對(duì)于狂犬病病毒與細(xì)胞自噬關(guān)系的研究目前尚未報(bào)道,本研究從以下幾個(gè)方面對(duì)狂犬病毒與細(xì)胞自噬的關(guān)系進(jìn)行探討。一、狂犬病病毒的感染誘導(dǎo)SK和NA細(xì)胞發(fā)生自噬。為了明確狂犬病病毒是否能夠誘導(dǎo)細(xì)胞自噬,我們選擇生物學(xué)特性截然不同的兩株狂犬病病毒:強(qiáng)毒株GD-SH-01和弱毒株HEP-Flury病毒,通過對(duì)兩株病毒感染SK和NA細(xì)胞后的western-blot檢測(cè),電鏡觀察以及轉(zhuǎn)染GFP-LC3B質(zhì)粒后觀察GFP熒光點(diǎn)分布的方法,我們最終確定狂犬病病毒強(qiáng)毒株GD-SH-01株病毒可以誘導(dǎo)明顯的細(xì)胞自噬,而弱毒株的自噬水平與未感染狂犬病病毒的空白細(xì)胞組相似。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)是病毒株特異的。自噬誘導(dǎo)差異是否與強(qiáng)弱毒株特性相關(guān)還有待探討。二、狂犬病病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬與凋亡的關(guān)系。細(xì)胞自噬作為一把雙刃劍,既是一種細(xì)胞保護(hù)性機(jī)制又可以誘導(dǎo)細(xì)胞走向死亡。細(xì)胞自噬和細(xì)胞凋亡同為細(xì)胞程序性死亡,其相關(guān)研究已有很多報(bào)道,主要概括為合作關(guān)系、對(duì)抗關(guān)系及推動(dòng)關(guān)系。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明狂犬病病毒強(qiáng)毒株GD-SH-01可以同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡,接著我們探討了狂犬病病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬和凋亡的關(guān)系。我們通過增強(qiáng)其中一種現(xiàn)象來看另一種發(fā)生的變化的方法來進(jìn)行研究,結(jié)果顯示在加入自噬增強(qiáng)劑的細(xì)胞組狂犬病病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象明顯弱于未加藥物組,這個(gè)現(xiàn)象說明GD-SH-01誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬是作為一種細(xì)胞保護(hù)性機(jī)制來消除病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡這種不利細(xì)胞存活的生物學(xué)過程。三、GD-SH-01的M基因?qū)ψ允傻挠绊�。狂犬病病毒的基因組由5個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白構(gòu)成:N,P,M,G,L,那么究竟是哪個(gè)基因在狂犬病病毒誘導(dǎo)細(xì)胞自噬方面起到最關(guān)鍵的作用呢,我們實(shí)驗(yàn)室通過將GD-SH-01的單個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白基因與相對(duì)應(yīng)HEP-Flury基因進(jìn)行替換和病毒拯救,得到5株重組狂犬病病毒:r HEP-sh N、r HEP-sh P、r HEP-sh M、r HEP-sh G和r HEP-sh L,通過對(duì)其感染細(xì)胞后細(xì)胞自噬水平的研究得出r HEP-sh M與GD-SH-01一樣可以誘導(dǎo)明顯的LC3-I/LC3-II轉(zhuǎn)換,而r HEP-sh N、r HEP-sh P、和r HEP-sh G只能誘導(dǎo)較弱的細(xì)胞自噬。從而初步得出GD-SH-01的M基因在誘導(dǎo)細(xì)胞自噬方面起到最主要的作用。接下來,我們構(gòu)建了4個(gè)質(zhì)粒,它們分別可以表達(dá)結(jié)構(gòu)蛋白與m RFP蛋白融合的融合蛋白。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后我們發(fā)現(xiàn)單個(gè)蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)并不能誘導(dǎo)細(xì)胞自噬,因此GD-SH-01誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬是與病毒粒子的特性有關(guān)而不是單個(gè)狂犬病病毒結(jié)構(gòu)蛋白可以誘導(dǎo)的。本論文首次揭開了狂犬病病毒與細(xì)胞自噬的關(guān)系,首次證明狂犬病病毒可以誘導(dǎo)細(xì)胞自噬,且初步闡明了狂犬病病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬和細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系。M基因作為最主要促進(jìn)GD-SH-01誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的結(jié)構(gòu)基因是如何發(fā)揮此功能的,與宿主細(xì)胞之間又有何互作關(guān)系需要之后進(jìn)一步的研究與探討。
[Abstract]:In order to determine whether rabies virus can induce autophagy of cells , it is very important to study the relationship between rabies virus and cell autophagy . In this paper , we found that the M gene of GD - SH - 01 can induce the autophagy of cells , and the relationship between cell autophagy and apoptosis induced by rabies virus can be induced .

【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65;R373.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 YIN Jing Feng;DING Yu Lin;HUANG Ying;TAO Xiao Yan;LI Hao;YU Peng Cheng;SHEN Xin Xin;JIAO Wen Tao;LIANG Guo Dong;TANG Qing;WANG Feng Long;;Comparative Analysis of the Pathogenic Mechanisms of Street Rabies Virus Strains with Different Virulence Levels[J];Biomedical and Environmental Sciences;2014年10期

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本文編號(hào)：1679083