本文關(guān)鍵詞：奶牛乳房炎大腸桿菌F17A-MF59疫苗免疫學(xué)特性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2015年

奶牛乳房炎大腸桿菌F17A-MF59疫苗免疫學(xué)特性研究

劉永夏  

【摘要】：大腸桿菌(E. coli)是奶牛乳房炎(bovine mastitis)最主要的環(huán)境致病菌,給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究首先對(duì)北京及周邊地區(qū)的奶牛乳房炎大腸桿菌進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查,細(xì)菌分離鑒定結(jié)果顯示,2012年9月-2013年10月從北京、河北和天津的6個(gè)規(guī)模化奶牛場(chǎng)采集的663份奶牛乳房炎樣本中,分離出大腸桿菌70株,流行率為10.6%。大腸桿菌引發(fā)的奶牛乳房炎是通過自身的粘附性菌毛定植在奶牛乳腺上皮細(xì)胞,在奶牛乳腺內(nèi)大量繁殖,繼而產(chǎn)生多種毒素導(dǎo)致乳腺組織的炎癥。為進(jìn)一步分析乳房炎源性大腸桿菌的流行特征,根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道通過PCR的方法對(duì)分離的大腸桿菌進(jìn)行了種系分群,毒力因子檢測(cè)和耐藥性分析。結(jié)果顯示,奶牛乳房炎源性大腸桿菌主要種系進(jìn)化群為B1群(58.6%)和A群(35.7%),流行的主要毒力基因?yàn)閒17A(15.7%),irp2(14.3%),astA (10.0%), iucD (7.1%)和colV (5.7%),而且B1群大腸桿菌比A群毒力因子分布更加廣泛；大多數(shù)分離的大腸桿菌(87.1%)具有耐藥性,耐藥性最強(qiáng)的是鏈霉素、卡那霉素和氨芐西林,而且B1群大腸桿菌比A群耐藥性要強(qiáng),其中鏈霉素耐藥表型與基因型具有一致性。 先前的報(bào)道和前期對(duì)大腸桿菌毒力因子的調(diào)查結(jié)果均顯示,F17菌毛是乳房炎源性大腸桿菌的優(yōu)勢(shì)菌毛,所以本研究擬通過制備F17菌毛亞單位疫苗對(duì)大腸桿菌性奶牛乳房炎進(jìn)行防控。在本研究中,首先以分離的大腸桿菌E-BJ-1菌株為模板,通過PCR方法擴(kuò)增了f17A基因,將該基因與pET28a載體連接構(gòu)建了f17A-pET28a原核表達(dá)載體,經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證后轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞BL21(DE3)制備了F17A蛋白原核表達(dá)菌株；對(duì)重組菌株經(jīng)1mM IPTG誘導(dǎo)后,F17A蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng),隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng),表達(dá)量逐漸增加,在誘導(dǎo)4h后己達(dá)到較高水平,SDS-PAGE分析F17A蛋白主要以包涵體的形式存在；隨后對(duì)誘導(dǎo)菌體進(jìn)行超聲破碎裂解,以包涵體溶解液溶解目的蛋白,利用重組蛋白的His標(biāo)簽對(duì)其進(jìn)行了親和層析純化,經(jīng)蛋白復(fù)性處理后,獲得了高質(zhì)量的F17A重組蛋白。 隨后,將F17A重組蛋白作為抗原,MF59作為佐劑,制備了F17A-MF59亞單位疫苗,并對(duì)疫苗的免疫學(xué)特性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。安全性試驗(yàn)結(jié)果顯示,疫苗免疫后小鼠精神、食欲均未出現(xiàn)異常,剖檢小鼠內(nèi)臟器官完好,未出現(xiàn)異常病理變化,說明該疫苗的安全性良好；免疫原性分析結(jié)果顯示,疫苗免疫后小鼠對(duì)于F17A蛋白的特異性抗體水平明顯高于無佐劑組,而且持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng),抗體亞類以IgG1和IgG2a為主,說明MF59佐劑不僅能有效增強(qiáng)機(jī)體的體液免疫,對(duì)于Thl型細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫也有較強(qiáng)的促進(jìn)作用；存活率試驗(yàn)結(jié)果顯示,疫苗免疫后小鼠攻毒的存活率要顯著高于未免疫組,而且恢復(fù)正常所需時(shí)間更短；主要組織器官載菌量和組織病理學(xué)分析結(jié)果顯示,F17A-MF59疫苗免疫組小鼠的主要內(nèi)臟器官(肝臟、脾臟、腎臟)在時(shí)間和細(xì)菌殘留數(shù)量上對(duì)大腸桿菌的清除效率要顯著高于未免疫組,特別是肝臟和脾臟,而且F17A-MF59疫苗免疫攻毒組小鼠的病理損傷程度比未免疫攻毒組小鼠有所降低；T淋巴細(xì)胞亞群分析結(jié)果顯示,與正常組相比,未免疫攻毒組CD4+和CD8+T細(xì)胞比例均出現(xiàn)顯著降低,F17A-MF59免疫攻毒組小鼠CD4+T細(xì)胞比例出現(xiàn)顯著升高,說明MF59能顯著增強(qiáng)機(jī)體的體液免疫反應(yīng),但CD8+T細(xì)胞比例發(fā)生了顯著的降低(降低幅度低于未免疫組)這可能由于攻毒后小鼠由于細(xì)菌的感染,機(jī)體的免疫機(jī)能受損,或者大腸桿菌主要是胞外致病菌,細(xì)胞免疫機(jī)能受到抑制所致�？偟目磥�,F17A-MF59疫苗能有效增強(qiáng)機(jī)體對(duì)于大腸桿菌的抗感染免疫反應(yīng),尤其是體液免疫,對(duì)于大腸桿菌感染具有良好的免疫保護(hù)效果,該研究證實(shí)F17A-MF59疫苗具有一定的應(yīng)用價(jià)值,為進(jìn)一步研究奶牛乳房炎相關(guān)疫苗提供了理論依據(jù)和實(shí)踐基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.61
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻(xiàn)

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 段玉;;奶牛乳腺炎危害性分析[J];中國(guó)畜禽種業(yè);2007年08期

2 嚴(yán)丹紅;郝葆青;吳潤(rùn);農(nóng)向;;致病性大腸埃希菌毒力因子致病性及研究進(jìn)展[J];西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年S1期

3 金爾光;曾新華;周木清;陳潔;陳橙;錢運(yùn)國(guó);;奶牛乳房炎研究概況[J];養(yǎng)殖與飼料;2008年06期

4 陳祥;崔一晨;高崧;焦新安;;腸出血性大腸桿菌傳播模式[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2008年06期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張桂賢;;奶牛乳房炎致病菌的分離和鑒定[J];山東畜牧獸醫(yī);2010年01期

2 鄧霞;李雁楠;周建琴;馬志敏;;某市部分牛奶中抗生素殘留情況的檢測(cè)分析[J];大理學(xué)院學(xué)報(bào);2009年10期

3 劉雅婷;楊宇;王旺;吉尚志;劉麗娟;曹剛強(qiáng);王靜;;熒光定量PCR快速檢測(cè)食品中腸出血性大腸桿菌O104[J];中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志;2012年02期

4 楊峰;王旭榮;李新圃;羅金印;王玲;李宏勝;;N-乙酰-L-半胱氨酸對(duì)Ⅰa型牛源無乳鏈球菌誘導(dǎo)的小鼠肝臟氧化損傷的保護(hù)作用[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2013年08期

5 隗黎麗;吳華東;熊六鳳;;柱狀黃桿菌對(duì)草魚TLRs基因表達(dá)水平的影響[J];大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào);2013年04期

6 Orawan Khow;Sunutcha Suntrarachun;;Strategies for production of active eukaryotic proteins in bacterial expression system[J];Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine;2012年02期

7 廖萌;嚴(yán)孫杰;;成骨細(xì)胞Toll樣受體4信號(hào)通路研究進(jìn)展[J];中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志;2013年03期

8 王凱;何天駿;胡福良;;蜂膠佐劑在獸用疫苗中的應(yīng)用[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年10期

9 李衛(wèi)娟;胡鐘仁;劉琴;周亞平;李東江;杜文華;趙德宏;趙富;王蓮梅;;薩能奶山羊乳體細(xì)胞數(shù)與乳汁成分變化的研究[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2013年09期

10 馬埡杰;安曉娟;王毅;;臨澤地區(qū)荷斯坦奶牛春季體細(xì)胞數(shù)變化規(guī)律及其與產(chǎn)乳性能相關(guān)性研究[J];中國(guó)牛業(yè)科學(xué);2013年05期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 畢海普;三峽庫區(qū)突發(fā)水污染事故的數(shù)值模擬及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究[D];重慶大學(xué);2011年

2 孫玉靜;腫瘤基因工程納米疫苗的研制及抗腫瘤效應(yīng)的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

3 徐道華;基于CTL表位的宮頸癌治療性多肽疫苗的分子設(shè)計(jì)、合成及免疫學(xué)效應(yīng)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

4 葛偉;腫瘤基因工程納米乳劑疫苗的藥效學(xué)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

5 趙一萍;蒙古馬免疫相關(guān)基因表達(dá)研究及脾臟表達(dá)譜分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 薛雪;AQP4基因缺失對(duì)中腦TGF-β產(chǎn)生的影響及其與帕金森疾病的相關(guān)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

7 王晶晶;中華絨螯蟹免疫致敏現(xiàn)象及相關(guān)分子機(jī)制的初步研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2013年

8 王雷雷;扇貝補(bǔ)體相關(guān)分子的結(jié)構(gòu)及功能研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2013年

9 趙敏;高脂飲食對(duì)大鼠肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和炎癥的影響及低脂膳食干預(yù)效果研究[D];華中科技大學(xué);2013年

10 桂朗;中國(guó)明對(duì)蝦兩種免疫相關(guān)蛋白的表達(dá)與功能研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2012年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 高樹新,許尚忠,李金泉,馬云,王國(guó)斌;奶牛乳房炎研究進(jìn)展[J];中國(guó)草食動(dòng)物;2004年05期

2 張?jiān)侥?張彥明,張懷喜;大腸桿菌毒力因子研究概況[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2003年04期

3 郭昌明;張乃生;周昌芳;楊正濤;魏東;張志剛;;髓過氧化物酶檢測(cè)奶牛隱性乳房炎研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2006年06期

4 周緒正;張繼瑜;李劍勇;李金善;李宏勝;蒲萬霞;魏小娟;牛建榮;徐忠贊;張占峰;楊輝;楊明成;康明海;田建明;;“乳源康”對(duì)奶牛乳房炎的療效研究[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年02期

5 蔣春茂,周新民,周廣生,王子軾;奶牛乳房炎研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2004年05期

6 李波;周虛;;奶牛乳房炎的預(yù)防及治療的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2006年10期

7 易明梅;馮華;朱建國(guó);華修國(guó);孟和;孫懷昌;袁耀明;;生物制劑在奶牛乳房炎防治中的應(yīng)用[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2007年05期

8 梁愛華;抗菌藥誘導(dǎo)的內(nèi)毒素釋放作用[J];國(guó)外醫(yī)藥(抗生素分冊(cè));2001年05期

9 苗玉濤,劉建輝,郭樹森;奶牛乳房炎的測(cè)試調(diào)查與分析[J];河北畜牧獸醫(yī);2001年03期

10 田文儒,劉大海,張雪清;乳酸環(huán)丙沙星治療奶牛乳房炎的效果觀察[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);1995年10期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孔雪旺;陳功義;;奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J];中國(guó)奶牛;2007年01期

2 代敏;王雄清;王紅寧;羅英;陳希文;郭文宇;;綿陽市奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及耐藥性分析[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2007年03期

3 夏勝超;吳聰明;王紹琛;劉金鳳;沈建忠;;奶牛乳房炎病例中金黃色葡萄球菌毒素基因的檢測(cè)[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2007年04期

4 郎景民;布日額;張婷;劉麗;姬守德;;奶牛乳房炎生物制劑研究進(jìn)展[J];內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年05期

5 伍清林，金蘭梅，汲軍;奶牛乳房炎與氣候關(guān)系的探討[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)氣象;1994年06期

6 蘇志強(qiáng);;中草藥防治奶牛乳房炎[J];青年科學(xué);2007年08期

7 劉忠琛;李加香;;如何防治奶牛乳房炎[J];科技致富向?qū)?2000年09期

8 冀玉湞,閆常平,孫文毅,黃俊武,許臘梅;奶牛乳房炎病原菌的分離與鑒定[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2005年01期

9 劉文進(jìn),陳創(chuàng)夫,滕文軍,吳潔,任雪艷;新疆墾區(qū)奶牛乳房炎致病菌的調(diào)查[J];中國(guó)草食動(dòng)物;2005年02期

10 劉文進(jìn),陳創(chuàng)夫,王遠(yuǎn)志,吳潔,任雪艷;新疆墾區(qū)奶牛乳房炎致病菌的調(diào)查[J];農(nóng)業(yè)科學(xué)研究;2005年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 崔群維;王根林;;奶牛乳房炎分子水平診斷的研究進(jìn)展[A];中國(guó)牛業(yè)健康發(fā)展與科技創(chuàng)新——中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)第七屆養(yǎng)牛學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

2 孫英峰;丁伯良;;奶牛乳房炎的血液學(xué)變化[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專業(yè)委員會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

3 張久榮;;防治夏季奶牛乳房炎的新方法[A];“科技進(jìn)步推進(jìn)畜牧業(yè)現(xiàn)代化”科技論文集[C];2011年

4 劉士武;李彥民;王萬俊;陳平;;奶牛乳房炎的預(yù)防與診治[A];河北省畜牧獸醫(yī)科技創(chuàng)新論壇論文集[C];2007年

5 晏勇邦;周貴;;奶牛乳房炎的防治研究[A];科技創(chuàng)新與節(jié)能減排——吉林省第五屆科學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2008年

6 富艷玲;劉愛玲;李旭東;;奶牛乳房炎防治技術(shù)研究進(jìn)展[A];首屆中國(guó)獸藥大會(huì)動(dòng)物藥品學(xué)暨中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物藥品學(xué)分會(huì)2008學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

7 張少華;任麗琴;包永占;秦建華;史萬玉;;中藥透皮劑治療奶牛乳房炎的研究進(jìn)展[A];紀(jì)念《元亨療馬集》付梓400周年中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)中獸醫(yī)學(xué)分會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)華東區(qū)第十八次中獸醫(yī)科研協(xié)作與學(xué)術(shù)研討會(huì)暨獸藥發(fā)展論壇論文集[C];2008年

8 李娜;賈建林;坎吉古麗;趙殿玲;;奶牛乳房炎的預(yù)防與治療[A];中國(guó)奶業(yè)協(xié)會(huì)年會(huì)論文集2008（上冊(cè)）[C];2008年

9 宋亞攀;楊利國(guó);孫麗萍;宋洛文;滑國(guó)華;;奶牛乳房炎防治新技術(shù)簡(jiǎn)介[A];第三屆中國(guó)奶牛發(fā)展大會(huì)論文集[C];2008年

10 丁春華;王雷;;中藥防治奶牛乳房炎的研究與應(yīng)用[A];第三屆中國(guó)奶牛發(fā)展大會(huì)論文集[C];2008年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;[N];瓜果蔬菜報(bào).農(nóng)業(yè)信息周刊;2006年

2 ;[N];吉林農(nóng)村報(bào);2008年

3 寧新旺;[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2012年

4 見習(xí)記者 努麗亞;[N];新疆科技報(bào)(漢);2013年

5 記者 尚靜;[N];新疆科技報(bào)(漢);2013年

6 獸醫(yī)專家 張守印;[N];吉林農(nóng)村報(bào);2014年

7 高祀敏;[N];山東科技報(bào);2004年

8 ;[N];新疆科技報(bào)(漢);2003年

9 劉忠琛 李加香;[N];云南科技報(bào);2000年

10 ;[N];云南科技報(bào);2004年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李成應(yīng);治療奶牛乳房炎的復(fù)方中藥制劑的開發(fā)研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

2 吳金梅;甘草總黃酮抗金黃色葡萄球菌作用及其治療奶牛乳房炎的應(yīng)用研究[D];吉林大學(xué);2012年

3 戰(zhàn)永波;治療奶牛乳房炎蒙藥復(fù)方的篩選及其抗炎免疫機(jī)理的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 李建平;奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型及其主要毒力因子和耐藥性的研究[D];浙江大學(xué);2009年

5 牛麗莉;奶牛乳房炎相關(guān)血漿蛋白質(zhì)初步分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2009年

6 范鑫;奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌亞單位疫苗的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 史冬艷;奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌耐藥性及以黏附素為靶位的疫苗的基礎(chǔ)研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 王建鋒;臨床型奶牛乳房炎乳腺組織亞細(xì)胞比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

9 曹隨忠;應(yīng)用SSH技術(shù)篩選和克隆奶牛乳房炎抗性相關(guān)基因[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

10 高樹新;BoLA基因多態(tài)性及其與奶牛乳房炎的關(guān)聯(lián)研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 紀(jì)志輝;中藥軟膏治療奶牛乳房炎的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

2 馮萬新;奶牛乳房炎主要病原菌分離鑒定及其多聯(lián)苗抗體檢測(cè)研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

3 劉磊;石家莊地區(qū)奶牛乳房炎流行病學(xué)調(diào)查及相關(guān)研究[D];河北師范大學(xué);2009年

4 張敏;防治奶牛乳房炎中藥凝膠劑的研究[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2010年

5 白龍;呼市地區(qū)奶牛乳房炎鏈球菌的分離鑒定及某些生物學(xué)特性的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 郭春燕;牧區(qū)某集約化牛場(chǎng)奶牛乳房炎與環(huán)境致病菌研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 陳欽華;長(zhǎng)沙地區(qū)奶牛乳房炎病原學(xué)調(diào)查及其耐藥性檢測(cè)[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

8 李秀萍;應(yīng)用基因芯片檢測(cè)奶牛乳房炎主要致病菌的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

9 孫先明;水溶性殼聚糖對(duì)奶牛乳房炎防治效果的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

10 劉文進(jìn);北疆地區(qū)奶牛乳房炎病原學(xué)調(diào)查與免疫治療的研究[D];石河子大學(xué);2005年

  本文關(guān)鍵詞：奶牛乳房炎大腸桿菌F17A-MF59疫苗免疫學(xué)特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：163006