本文關(guān)鍵詞： 無(wú)乳鏈球菌 莢膜多糖 表面免疫相關(guān)蛋白 纖維蛋白原結(jié)合蛋白 蛋白—多糖偶聯(lián)物 亞單位疫苗　出處：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：奶牛乳房炎是奶牛的常見(jiàn)病、多發(fā)病,由于其病因復(fù)雜多樣,病原種類(lèi)繁多,易反復(fù)發(fā)作等特點(diǎn),目前已成為奶牛養(yǎng)殖中造成經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的疾病。無(wú)乳鏈球菌是引起奶牛乳房炎最重要的病原菌之一。本研究采用傳統(tǒng)細(xì)菌學(xué)鑒定方法與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合,對(duì)華北地區(qū)2012年至2016年采集的隱形乳房炎乳樣中的無(wú)乳鏈球菌進(jìn)行分離鑒定。并采用紙片擴(kuò)散法和PCR的方法對(duì)這些菌株分別進(jìn)行耐藥譜測(cè)定、莢膜分子分型、表面蛋白基因及毒力因子的檢測(cè)。在無(wú)乳鏈球菌生物學(xué)特性的了解的基礎(chǔ)上,制備了多糖—蛋白偶聯(lián)亞單位疫苗,并進(jìn)行了免疫效果的初步研究。1.本次調(diào)查的牧場(chǎng)中的592份乳樣中,共分離得到無(wú)乳鏈球菌63株其分離率為10.64%。全部為血清型Ⅰa型,其表面蛋白均為未定型,對(duì)無(wú)乳鏈球菌進(jìn)行7種毒力因子的檢測(cè),結(jié)果表明7種毒力基因在63株牛源無(wú)乳鏈球菌之間分布無(wú)差異。其耐藥譜也基本接近。90%-100%的菌株對(duì)青霉素G、頭孢噻肟、氨芐西林、紅霉素、氧氟沙星、克林霉素、萬(wàn)古霉素敏感,82.14%的菌株對(duì)四環(huán)素耐藥。在耐藥基因的檢測(cè)中,首次在牛源無(wú)乳鏈球菌中檢測(cè)到tetK基因。2.本試驗(yàn)采用在我國(guó)華北地區(qū)流行的Ⅰa型作為研究對(duì)象,從營(yíng)養(yǎng)條件和培養(yǎng)條件對(duì)莢膜形成的影響做了初步的研究,從多個(gè)方面研究了無(wú)乳鏈球菌液體培養(yǎng)的影響因素。初步得出了無(wú)乳鏈球菌的最佳培養(yǎng)基組分及最佳培養(yǎng)條件,為大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵奠定了基礎(chǔ)。3.本試驗(yàn)選取了在無(wú)乳鏈球菌重要的表面抗原Sip.FbsA以及Sip-FbsA串聯(lián)作為載體蛋白與血清型Ⅰa莢膜多糖偶聯(lián),構(gòu)建亞單位疫苗。Western-blot分析表明,其具有免疫反應(yīng)性。在此基礎(chǔ)上以莢膜多糖CP、Sip蛋白、FbsA蛋白、Sip-FbsA蛋白、蛋白-多糖偶聯(lián)物CP+Sip-FbsA為疫苗對(duì)wistar大鼠進(jìn)行免疫試驗(yàn)。通過(guò)ELISA方法檢測(cè)免疫大鼠血清的特異性抗體效價(jià),以及T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)、全血吞噬調(diào)理試驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、以及攻毒保護(hù)試驗(yàn)評(píng)價(jià)比較其免疫學(xué)特性。結(jié)果表明偶聯(lián)物CP+Sip-FbsA通過(guò)首次肌肉免疫,加強(qiáng)免疫經(jīng)乳房基底部注射,免疫大鼠后,可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較好的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng),機(jī)體不僅可產(chǎn)生良好的系統(tǒng)性免疫,還增強(qiáng)了乳腺有效的局部免疫應(yīng)答,效果在各免疫組中最佳。以上結(jié)果說(shuō)明,我們研制的奶牛乳房炎無(wú)乳鏈球菌亞單位疫苗可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫,該研究成果對(duì)華北地區(qū)奶牛乳房炎的防治具有參考價(jià)值,并為研制預(yù)防和治療性無(wú)乳鏈球菌性奶牛乳房炎的基因工程亞單位疫苗提供了理論基礎(chǔ)和試驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:Cow mastitis is a common disease in dairy cows. Streptococcus actinomycetes is one of the most important pathogens in dairy cow mastitis. The traditional bacteriological identification method and molecular biological technique were used in this study. Streptococcus acuminata was isolated and identified from the milk samples of invisible mastitis collected from 2012 to 2016 in North China. The drug resistance spectrum and capsule molecular typing of these strains were determined by disk diffusion method and PCR method respectively. The detection of surface protein gene and virulence factor. Based on the understanding of the biological characteristics of Streptococcus lactis, a polysaccharide protein-coupled subunit vaccine was prepared. Among 592 milk samples collected from the pastures investigated, 63 strains of Streptococcus lactococcus were isolated and the isolation rate was 10.64%. All of them were serotype 鈪，

本文編號(hào)：1549875