本文關(guān)鍵詞：烏珠穆沁羊生長(zhǎng)過程中MRFs基因特性和肌纖維形態(tài)學(xué)變化分析　出處：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：烏珠穆沁羊肉作為"綠色食品",肉質(zhì)鮮嫩,不膻不膩,富含多種人體必需氨基酸和礦物質(zhì)等。烏珠穆沁羊體質(zhì)堅(jiān)實(shí)、耐寒耐旱、羔羊成活率高、生長(zhǎng)發(fā)育迅速、背腰寬平、產(chǎn)肉率高、因群體中存在多脊椎個(gè)體而被譽(yù)為"國(guó)家級(jí)畜禽資源保護(hù)品種"。此羊生存環(huán)境人煙稀少,地域遼闊,羊群多以"自然放牧"方式進(jìn)行粗放管理。然而,生態(tài)環(huán)境日趨惡劣、草場(chǎng)逐步退化的今天,這種飼養(yǎng)方式勢(shì)必對(duì)草原生態(tài)系統(tǒng)和動(dòng)物機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育具有微妙影響。本文以動(dòng)物個(gè)體發(fā)育過程中肌肉發(fā)達(dá)作為切入點(diǎn),分別從生肌調(diào)節(jié)因子(MRFs)基因相對(duì)表達(dá)量和肌纖維形態(tài)學(xué)變化著手研究,探討自然放牧條件下肌肉發(fā)育情況;并結(jié)合MRFs家族基因全長(zhǎng)序列克隆和基因多態(tài)性與個(gè)體生長(zhǎng)性狀間的聯(lián)系,分析烏珠穆沁羊多脊椎個(gè)體種質(zhì)資源,以期為肌肉發(fā)達(dá)機(jī)理提供可靠的基礎(chǔ)數(shù)據(jù),并為烏珠穆沁羊遺傳育種提供背景支持。具體結(jié)果如下:1.利用常規(guī)PCR技術(shù)首次克隆了烏珠穆沁羊生肌調(diào)節(jié)因子(MRFs)家族的三個(gè)成員基因,通過與GenBank數(shù)據(jù)庫里綿羊相應(yīng)基因序列進(jìn)行同源比對(duì),提交GenBank 獲得 了基因登錄號(hào)分別是 Myf5(KT899092),Myf6(KT899093)和Myogenin。MRFs家族各成員全長(zhǎng)基因序列均由三個(gè)外顯子和兩個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成,雖片段大小不同,但具有較高的序列同源性;各成員相應(yīng)預(yù)測(cè)蛋白也享有較高的保守區(qū)域,稱之為堿性螺旋-環(huán)-螺旋(Basci helix-loop-helix,bHLH)結(jié)構(gòu)域。將烏珠穆沁羊MRFs家族成員與NCBI中綿羊相應(yīng)序列比對(duì)發(fā)現(xiàn):所測(cè)樣本中Myf5基因全長(zhǎng)序列不含任何點(diǎn)突變位點(diǎn);Myf6全長(zhǎng)序列具有兩個(gè)突變位點(diǎn)分別位于g.1150 CA和g.1197CT,均屬于沉默突變位點(diǎn);Myogenin全長(zhǎng)序列范圍內(nèi)可能存在十個(gè)突變位點(diǎn)均為沉默突變位點(diǎn),其中八個(gè)位點(diǎn)與NCBI中山羊相應(yīng)序列相同,剩余兩個(gè)突變位點(diǎn)是烏珠穆沁羊所特有。2.以不同生長(zhǎng)性狀的烏珠穆沁羊(成年母羊)為受試動(dòng)物,采用直接測(cè)序法分析并獲得了 MRFs家族中Myf5、Myf6、Myogenin基因全長(zhǎng)序列范圍內(nèi)基因多態(tài)性位點(diǎn)。結(jié)果顯示,所測(cè)樣本中Myf5基因無SNPs特性;Myf6基因存在一個(gè)多態(tài)位點(diǎn),位于g.242 ACCCCT,動(dòng)物個(gè)體體重和體高等指標(biāo)在不同基因型間有顯著差異;Myogenin基因存在四個(gè)多態(tài)位點(diǎn),分別位于內(nèi)含子二區(qū)域內(nèi)g.212CA、g.401 GA、g.536 CG、g.556 CT,且動(dòng)物體尺指標(biāo)在同一位點(diǎn)的不同基因型間均無顯著差異。由此推測(cè),Myf6基因可用于衡量烏珠穆沁羊生長(zhǎng)指標(biāo)的候選基因或分子標(biāo)記。3.以不同生長(zhǎng)階段的烏珠穆沁羊作為研究材料,運(yùn)用熒光定量PCR技術(shù)獲得了MRFs家族中三個(gè)成員基因的不同時(shí)空表達(dá)模式。結(jié)果顯示,動(dòng)物出生后MRFs家族三大基因持相對(duì)穩(wěn)定的表達(dá)水平,各月齡間并無顯著減少或增加(P0.05)。由此推測(cè),自然放牧狀態(tài)下受試動(dòng)物的正常生長(zhǎng)過程對(duì)MRFs家族成員基因表達(dá)量可能無不良刺激。換言之,不同運(yùn)動(dòng)模式、運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度、季節(jié)氣候變化(牧草和溫度)和正常生長(zhǎng)過程等等對(duì)肌肉組織中MRFs家族基因表達(dá)量可能并無顯著的應(yīng)激反應(yīng)亦或部位特異性。4.以自由采食的烏珠穆沁羊作為研究對(duì)象,觀察了不同月齡受試動(dòng)物不同部位肌肉組織中肌纖維直徑及其類型百分比變化規(guī)律。結(jié)果顯示,隨著受試動(dòng)物年齡增長(zhǎng),肌肉組織(背最長(zhǎng)肌和股二頭肌)中肌纖維直徑呈逐步增加的趨勢(shì)并在9月齡時(shí)達(dá)到了最高值,而12月齡時(shí)該值反而略顯減少,成年后(18月齡)纖維直徑仍保持相對(duì)穩(wěn)定;肱三頭肌中,肌纖維直徑增粗一直持續(xù)到了 18月齡。推測(cè),肌纖維直徑增粗可能具有某程度的解剖學(xué)部位特異性。由肌纖維類型百分比變化得知,背最長(zhǎng)肌中各肌纖維類型(Ⅰ,Ⅱa和Ⅱb)百分比變化并不明顯;股二頭肌中Ⅰ型纖維比重較高,同時(shí)伴有6.19倍Ⅱa型肌纖維百分比的下降;肱三頭肌中Ⅰ和Ⅱa型比重呈持續(xù)變化狀態(tài)直至18月齡。綜上所述,自然放牧狀態(tài)下烏珠穆沁羊生長(zhǎng)過程中肌纖維直徑增粗和肌纖維類型百分比變化可能具有某種特定關(guān)聯(lián)關(guān)系。5.通過MRFs家族基因表達(dá)量、肌纖維直徑增粗和纖維類型百分比變化等三者之間相關(guān)性檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn):背最長(zhǎng)肌中Myf5基因表達(dá)與Ⅰ型肌纖維(r=-0.87,P0.05)、肌纖維類型比Ⅰ/Ⅱb呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.86,P0.05),同Ⅱa型肌纖維(r=0.81,P0.05)、肌纖維類型比 Ⅱa/Ⅱb(r=0.81,P0.05)和 Ⅱa/Ⅰ(r=0.89,P0.05)均呈顯著正相關(guān)關(guān)系;同時(shí),肌纖維直徑與Ⅰ型肌纖維(r=0.70,P0.05)、肌纖維類型比Ⅰ/Ⅱb(r=0.68,P0.05)、Myf5(r=-0.64,P0.05)基因表達(dá)均具有較高的相關(guān)關(guān)系。股二頭肌中MyoG基因表達(dá)與肌纖維類型比Ⅰ/Ⅱb顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.81,P0.05),同Ⅱb型肌纖維也具有較高的負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.80,P0.05);同時(shí),肌纖維直徑與MyoG基因表達(dá)具有較高負(fù)相關(guān)關(guān)系(r-0.79,P0.05)。肱三頭肌中,肌纖維直徑與Ⅰ型肌纖維(r=-0.93,P0.01)、肌纖維類型比Ⅰ/Ⅱb(r=-0.88,P0.05)呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系,同Ⅱa型肌纖維(r=0.90,P0.05)、肌纖維類型比Ⅱa/Ⅰ(r=0.92,P0.01)呈顯著正相關(guān)關(guān)系;同時(shí),與肌纖維類型比Ⅱa/Ⅱb(r=0.72,P0.05)和MyoG(r=-0.78,P0.05)具有較高的相關(guān)關(guān)系。由此推測(cè),動(dòng)物生長(zhǎng)過程中肌肉發(fā)達(dá)與上述三種指標(biāo)之間可能具有密切聯(lián)系,且伴有部位特異性。綜上所述,自然放牧條件下烏珠穆沁羊生長(zhǎng)過程中肌纖維直徑基本在9月齡時(shí)可達(dá)到最高值,該值在其成年及以后呈相對(duì)穩(wěn)定水平;而肌纖維類型變化可能存在ⅠⅡaⅡb和/或ⅡbⅡaⅠ兩種逐級(jí)轉(zhuǎn)換模式,該模式的激活/抑制可能受到動(dòng)物年齡(幼齡、青年、成年),自然環(huán)境(溫度、季節(jié)、氣候、草場(chǎng)等等),自由采食行為(動(dòng)物個(gè)體采食喜好、季節(jié)、采食環(huán)境區(qū)域植被結(jié)構(gòu))等等多種潛在因素的綜合調(diào)控;至今GenBank數(shù)據(jù)庫中反芻動(dòng)物MRFs家族基因全長(zhǎng)序列報(bào)道較少,在此彌補(bǔ)了這一空缺并與生長(zhǎng)性狀指標(biāo)相結(jié)合,推測(cè)Myf6基因?yàn)榭晒┯行Ш蜻x基因;同時(shí),在所測(cè)樣本中MRFs家族mRNA水平在其出生后并無顯著變化。
[Abstract]:Wuzhumuqin mutton as " green food " The results are as follows : 1 . In this paper , we have cloned the three member genes of the human body of Wuzhumuqin sheep by homologous comparison with the corresponding gene sequences of the sheep in GenBank . The results showed that there was no significant difference in the expression level of muscle fibers in muscle fibers in muscle tissue . The results showed that there were no significant differences in the expression of muscle fibers in muscle fibers in muscle tissue . There was a positive correlation between the expression of MyoG gene and muscle fiber type 鈪，

本文編號(hào)：1366022