本文關(guān)鍵詞：豬卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中Perilipins和PPARγ作用機(jī)制的研究　出處：《中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：豬卵母細(xì)胞和胚胎細(xì)胞內(nèi)以脂滴的形式儲(chǔ)存大量的內(nèi)源性脂質(zhì),這些脂質(zhì)為卵母細(xì)胞及早期胚胎發(fā)育供能。本研究旨在探討豬卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中脂滴相關(guān)蛋白(perilipin1) PLIN1和PLIN2(perilipin2)的表達(dá)定位,及上游轉(zhuǎn)錄因子過(guò)氧化物酶增殖活化受體(Peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARγ)舌化對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育的影響。實(shí)驗(yàn)一采用實(shí)時(shí)定量PCR、 Western blot免疫熒光染色檢測(cè)豬卵母細(xì)胞成熟前后PLIN1和PLIN2的表達(dá)和定位。結(jié)果顯示,豬卵母細(xì)胞成熟前后不表達(dá)PLIN1,但PLIN2mRNA穩(wěn)定存在,且PLIN2蛋白在MII卵母細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量顯著低于GV期卵母細(xì)胞(p0.05)。PLIN2蛋白與BODIPY493/503染色的脂滴呈現(xiàn)完全共定位的現(xiàn)象。這些結(jié)果證明PLIN2是豬卵母細(xì)胞內(nèi)的一種主要的脂滴相關(guān)蛋白。另外,實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步檢測(cè)豬卵母細(xì)胞成熟前后PPARymRNA的表達(dá),及PPARy激活劑曲格列酮(Troglitazone, TZD)對(duì)PLIN2mRNA表達(dá)的影響,結(jié)果表明：豬MII卵母細(xì)胞內(nèi)PPARymRNA的表達(dá)顯著升高(p0.01),且TZD可顯著下調(diào)豬MII卵母細(xì)胞內(nèi)的PLIN2mRNA水平(p0.05)。實(shí)驗(yàn)二研究PPARy活化對(duì)豬卵母細(xì)胞發(fā)育的影響及其調(diào)節(jié)途徑。將不同濃度的TZD添加至豬卵母細(xì)胞體外成熟體系中,結(jié)果顯示添加5μmol/L TZD可顯著提高豬卵母細(xì)胞的核成熟率(59.4%+1.7vs.48.8%+4.3)(P0.05)。進(jìn)一步檢測(cè)在成熟不同階段(前22h,后22h及全程44h)添加5μmol/L TZD對(duì)核成熟的影響,結(jié)果表明全程44h添加TZD可顯著提高卵母細(xì)胞的核成熟率(62.06%+3.34vs.50.59%+1.21)(P0.05)。之后,檢測(cè)添加5μmol/L TZD對(duì)卵丘擴(kuò)展直徑及卵母細(xì)胞發(fā)育能力的影響。結(jié)果表明,TZD添加組的卵丘擴(kuò)展直徑(371.64μm+12.60)和孤雌激活胚的卵裂率(72.3%±0.08)及囊胚率(35.7%+0.00)與對(duì)照組均無(wú)顯著性差異(P0.05)。最后,檢測(cè)FSH和LH是否參與調(diào)節(jié)TZD的促成熟效應(yīng)。結(jié)果表明,只有在FSH和LH存在的條件下,TZD可顯著提高卵母細(xì)胞的核成熟率(65.8%+2.78vs.2.57%+1.05)(P0.05)。 實(shí)驗(yàn)三采用Cryotop法對(duì)豬GV期卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(COCs)進(jìn)行玻璃化冷凍,檢測(cè)冷凍對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中cAMP水平的影響。結(jié)果顯示,冷凍組COCs體外培養(yǎng)至44h后,卵母細(xì)胞的存活率(82%+0.03)、極體排出率(36%+0.01)、激活后的卵裂率(41%+0.01)和囊胚率(5%土0.01)都顯著低于新鮮組(P0.05)。另外,新鮮組COCs的卵母細(xì)胞內(nèi)cAMP水平變化正常：即體外發(fā)育6h時(shí)卵母細(xì)胞內(nèi)cAMP水平出現(xiàn)峰值,24h顯著下降并維持至44h；冷凍組COCs的卵母細(xì)胞內(nèi)存在cAMP積累的現(xiàn)象,且體外培養(yǎng)24時(shí)卵母細(xì)胞內(nèi)cAMP出現(xiàn)峰值,44h時(shí)又顯著下降。 綜上所述,PLIN2是豬卵母細(xì)胞內(nèi)一種關(guān)鍵的脂滴相關(guān)蛋白,參與卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中的脂滴動(dòng)態(tài)重組。FSH和LH協(xié)同促進(jìn)TZD的促成熟效應(yīng)。冷凍COCs引起卵母細(xì)胞內(nèi)cAMP積累是導(dǎo)致卵母細(xì)胞發(fā)育能力降低的原因之一
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S814

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 喬利敏;李向臣;喬富強(qiáng);姚華;張文秀;關(guān)偉軍;馬月輝;;利用亮甲酚藍(lán)染色法預(yù)測(cè)牛卵母細(xì)胞發(fā)育潛能的研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2011年09期

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本文編號(hào)：1311085