發(fā)布時(shí)間：2017-12-08 16:32

  本文關(guān)鍵詞：豬博卡病毒NP1蛋白調(diào)控Ⅰ型干擾素反應(yīng)分子機(jī)制研究

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【摘要】：天然免疫應(yīng)答是宿主抵御病毒入侵的第一道防線(xiàn)。I型干擾素作為主要的抗病毒效應(yīng)分子在宿主體內(nèi)廣泛表達(dá),參與宿主免疫調(diào)控并誘導(dǎo)抗病毒效應(yīng)。而病毒為了有效的增殖和感染往往進(jìn)化出多種策略拮抗I型干擾素反應(yīng),逃避機(jī)體的抗病毒防御。豬博卡病毒(porcine bocavirus,PBoV)是一種新型細(xì)小病毒,常在發(fā)生仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征、腹瀉和呼吸道疾病的豬群中檢出,易與豬藍(lán)耳病毒、豬二型圓環(huán)病毒、豬流行性腹瀉病毒等病毒發(fā)生共感染,被認(rèn)為具有潛在的免疫抑制功能。PBoV編碼兩個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1、NP1)和兩個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(VP1、VP2),但這些蛋白在調(diào)控宿主免疫防御中的作用鮮有報(bào)道。本研究以PBoV編碼蛋白為研究對(duì)象,發(fā)掘出NP1蛋白具有干擾素拮抗和誘導(dǎo)炎癥功能,通過(guò)研究NP1調(diào)控宿主免疫防御系統(tǒng)的機(jī)制,為闡明PBoV的致病機(jī)理和免疫逃逸策略奠定基礎(chǔ),并部分還原PBoV在感染過(guò)程中所扮演的角色。具體研究?jī)?nèi)容包括:1.PBoV NP1負(fù)調(diào)控I型干擾素產(chǎn)生細(xì)小病毒科病毒廣泛感染不同宿主,然而其免疫逃避策略鮮有報(bào)道。本研究利用雙熒光素酶篩選到PBoV非結(jié)構(gòu)蛋白NP1能夠顯著抑制IFN-β啟動(dòng)子活性以及IFN-β和IFN-α等干擾素相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。通過(guò)對(duì)RLR信號(hào)通路研究,發(fā)現(xiàn)NP1靶向IRF3或其下游分子,并且對(duì)IRF3表達(dá)、磷酸化、轉(zhuǎn)核等過(guò)程均無(wú)影響。其通過(guò)阻遏IRF3與IFN-β啟動(dòng)子的結(jié)合抑制I型干擾素產(chǎn)生。2.PBoV NP1負(fù)調(diào)控I型干擾素信號(hào)級(jí)聯(lián)病毒進(jìn)化出多種策略抑制干擾素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。本研究利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng),篩選到PBoV NP1蛋白顯著抑制干擾素激活反應(yīng)元件ISRE的活化以及下游干擾素刺激因子ISG的表達(dá)。通過(guò)對(duì)JAK-STAT信號(hào)通路研究,發(fā)現(xiàn)NP1對(duì)轉(zhuǎn)錄因子STAT1/STAT2的表達(dá)、磷酸化及轉(zhuǎn)核均無(wú)影響,并且不影響轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物ISGF3的形成。其通過(guò)與ISGF3復(fù)合物發(fā)生互作影響ISGF3與ISRE的結(jié)合。3.PBoV NP1拮抗IRF3和IRF9啟動(dòng)子結(jié)合的分子機(jī)制盡管一些多效性病毒蛋白可以同時(shí)靶向干擾素的產(chǎn)生和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)環(huán)節(jié),但是鮮有蛋白被報(bào)道通過(guò)廣譜機(jī)制同時(shí)靶向IRF3及IRF9。通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PBoV NP1同時(shí)與IRF3及IRF9互作,并且與IRF3及IRF9的DNA結(jié)合域發(fā)生互作。細(xì)節(jié)研究表明,NP1與IRF3及IRF9 DNA結(jié)合域上關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)發(fā)生直接互作,影響IRF3和IRF9的啟動(dòng)子結(jié)合活性。綜上,這些結(jié)果表明PBoV NP1采用廣譜互作機(jī)制,同時(shí)抑制干擾素的產(chǎn)生及其信號(hào)級(jí)聯(lián),拮抗I型干擾素反應(yīng)。4.PBoV NP1誘導(dǎo)NF-κB活化一些具有干擾素拮抗作用的病毒同時(shí)誘導(dǎo)NF-κB激活,促進(jìn)其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)以及免疫抑制因子的表達(dá)。雙熒光素酶及定量試驗(yàn)顯示,PBoV NP1誘導(dǎo)NF-κB啟動(dòng)子活化,并且促進(jìn)其下游的促炎因子表達(dá)。通過(guò)對(duì)NF-κB活化過(guò)程研究,發(fā)現(xiàn)NP1通過(guò)誘導(dǎo)IκBα降解,增加p65磷酸化,促進(jìn)p65活化轉(zhuǎn)核。5.PBoV NP1亞細(xì)胞定位及免疫調(diào)控區(qū)域研究PBoV NP1蛋白具有I型干擾素應(yīng)答調(diào)控功能,然而其相應(yīng)功能域仍不清楚。通過(guò)構(gòu)建多個(gè)NP1突變體與GFP融合表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)行熒光觀察,發(fā)現(xiàn)NP1 N-端1-66氨基酸區(qū)域包含兩個(gè)經(jīng)典核定位信號(hào)序列和一個(gè)非經(jīng)典核定位信號(hào)序列。利用雙熒光素酶實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)NP1 N-端氨基酸區(qū)域同時(shí)參與調(diào)控干擾素的產(chǎn)生及信號(hào)級(jí)聯(lián)。此外,結(jié)果顯示,NP1 C-端168-218氨基酸區(qū)域直接參與NF-κB調(diào)控,并且經(jīng)典核定位信號(hào)區(qū)顯著增強(qiáng)了其N(xiāo)F-κB調(diào)控活性。這些結(jié)果表明,PBoV NP1蛋白在其N(xiāo)-和C-端氨基酸區(qū)域包含與兩個(gè)獨(dú)立的功能域,分別與亞細(xì)胞定位或干擾素拮抗以及NF-κB調(diào)控相關(guān)。6.噬菌體展示系統(tǒng)篩選與PBoV NP1相互作用的宿主蛋白NP1是博卡病毒屬的獨(dú)有編碼蛋白,其功能并不完全清楚。NP1與宿主的相互關(guān)系仍需深入了解。在本研究利用原核表達(dá)系統(tǒng),得到純化的NP1蛋白,并通過(guò)T7噬菌體表面展示系統(tǒng)篩選與NP1互作的宿主蛋白。通過(guò)序列比對(duì),在篩選陽(yáng)性克隆中鑒定出與NP1發(fā)生互作的兩個(gè)宿主蛋白,鋅指蛋白APA-1和磷脂酰絲氨酸合成酶1。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S852.651

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2 傅希;伍嚴(yán)安;;博卡病毒的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2007年15期

3 陳倩;胡正;;人博卡病毒的研究進(jìn)展[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2010年08期

4 李建寧;姚青;孫玉寧;;博卡病毒屬基因組特征與致病的分子機(jī)制[J];微生物學(xué)報(bào);2013年05期

5 何濤君;王瓊;何英;黃烈;張銀輝;林廣裕;陸學(xué)東;;采用半巢式PCR技術(shù)從臨床標(biāo)本中克隆人類(lèi)博卡病毒的全基因[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2014年01期

6 黃頭華;;我國(guó)醫(yī)學(xué)界首次發(fā)現(xiàn)人類(lèi)博卡病毒[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2006年09期

7 何慧;劉新;;新發(fā)現(xiàn)的呼吸道感染病原——人博卡病毒[J];醫(yī)學(xué)綜述;2008年21期

8 錢(qián)淵;;人博卡病毒研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)用兒科雜志;2009年01期

9 周建林;伍嚴(yán)安;;人博卡病毒的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2009年12期

10 鄒麗容;鄭夔;周杰;莫艷玲;方苓;陳秋霞;李暉;柯昌文;;熒光定量PCR方法快速檢測(cè)人博卡病毒的研究[J];華南預(yù)防醫(yī)學(xué);2009年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 曹虹;彭亮;;新型微小病毒——人類(lèi)博卡病毒[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點(diǎn)研討會(huì)論文集[C];2009年

2 林峰;曾愛(ài)平;楊寧敏;林海燕;鄭昌華;李樺;陳弘;李旭陽(yáng);郁明素;金大智;王升啟;;小兒博卡病毒感染的臨床與實(shí)驗(yàn)研究[A];2006（第三屆）江浙滬兒科學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省兒科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

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4 陸學(xué)東;林廣裕;周仁彬;王瓊;林創(chuàng)興;楊來(lái)智;陸長(zhǎng)東;;廣東地區(qū)首例人博卡病毒的檢出及鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

5 王婷;李昌崇;陳小芳;聶穎;崇蕾;;溫州地區(qū)人博卡病毒在急性喘息患兒中的檢測(cè)及其病毒載量與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)分析[A];2012年江浙滬兒科學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)、兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國(guó)家級(jí)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

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9 何彪;楊凡力;涂長(zhǎng)春;;中國(guó)蝙蝠病毒宏基因組學(xué)研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

10 王維;林書(shū)祥;黃敬孚;徐曉華;;天津地區(qū)嬰幼兒腹瀉博卡病毒的檢出及鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2012年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 記者　 鄧明 通訊員　 白培生 劉巧突;郴州在國(guó)內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)人類(lèi)博卡病毒[N];湖南日?qǐng)?bào);2006年

2 記者 吳德群;口岸連查4宗 人感染博卡病毒[N];深圳特區(qū)報(bào);2012年

3 陳茂j 趙斌;溫嶺市一院在我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)人博卡病毒[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

4 記者 王理略 通訊員 任麗瓊;首次克隆出人博卡病毒全基因組[N];湖北日?qǐng)?bào);2014年

5 貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 郝飛 湯德元;豬博卡病毒研究進(jìn)展[N];河北科技報(bào);2012年

6 記者　 龍軍;我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)人類(lèi)博卡病毒HBoV[N];光明日?qǐng)?bào);2006年

7 洪衛(wèi) 張敏;迎接照耀醫(yī)學(xué)高峰的新曙光[N];浙江日?qǐng)?bào);2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 李雪萌;博卡病毒感染的檢測(cè)和原始抗原效應(yīng)的相關(guān)研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 張若曦;豬博卡病毒NP1蛋白調(diào)控Ⅰ型干擾素反應(yīng)分子機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

3 程衛(wèi)霞;博卡病毒流行病學(xué)、致病性及基因進(jìn)化研究[D];蘭州大學(xué);2011年

4 趙慧;兒童腹瀉相關(guān)的人博卡病毒2型的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

5 鄧雪鋒;人類(lèi)博卡病毒感染性克隆的構(gòu)建及體外感染模型的研究[D];華中師范大學(xué);2013年

6 李京京;人類(lèi)博卡病毒HBoV1基因組克隆及轉(zhuǎn)錄、翻譯分子機(jī)制研究[D];華中師范大學(xué);2012年

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1 黃寶慧;豬博卡病毒NP08株的基因組序列分析及其對(duì)豬腸上皮細(xì)胞的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 鄭英帥;豬博卡病毒間接ELISA診斷方法的建立[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 劉萌萌;屠宰豬博卡病毒全基因序列測(cè)定及檢測(cè)技術(shù)研究[D];天津大學(xué);2014年

4 李亞敏;重癥急性呼吸道感染兒童中人博卡病毒和人腺病毒的分型檢測(cè)與分析[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2015年

5 崔換弟;人博卡病毒1-4型重組分析及人博卡病毒1型相關(guān)質(zhì)粒的構(gòu)建[D];蘭州大學(xué);2014年

6 姚爽;2014-2015年黑龍江三個(gè)地區(qū)犬博卡病毒的PCR檢測(cè)及遺傳變異分析[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2016年

7 馬俊;重組桿狀病毒介導(dǎo)的豬博卡病毒VP2蛋白的表達(dá)及其免疫原性的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

8 馬均;兒童急性呼吸道感染人博卡病毒檢測(cè)及分析[D];吉林大學(xué);2009年

9 梁丹丹;小兒呼吸道人類(lèi)博卡病毒感染免疫致病機(jī)制的初步研究[D];汕頭大學(xué);2011年

10 楊晚竹;豬博卡病毒分子生物學(xué)特征及感染性克隆構(gòu)建的初步探索[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2012年

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本文編號(hào)：1267081