發(fā)布時(shí)間：2017-09-08 07:43

  本文關(guān)鍵詞：中草藥獨(dú)角蓮根莖提取物β-谷甾醇（β-sitosterol）對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：研究背景:近期研究認(rèn)為,獨(dú)角蓮根莖水提取物(the aqueous extract from deied powdered rhizomes of Typhonium giganteum Engl.AEoTGE)對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的增殖具有抑制作用,其作用于細(xì)胞24h后,可顯著促進(jìn)細(xì)胞凋亡,凋亡率高達(dá)72%。然而,中草藥獨(dú)角蓮根莖成分復(fù)雜,其水提取物亦為混合物,并未能闡明其確切作用機(jī)制。獨(dú)角蓮莖塊中含有β-谷甾醇和β-谷甾醇-D-葡萄糖苷。并且,研究表明β-谷甾醇(β-sitosterol)對(duì)乳腺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞、口腔癌及食管癌等癌細(xì)胞的增殖活性均有抑制作用,通過內(nèi)源性和外源性途徑共同誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡。因此,β-谷甾醇(β-sitosterol)可能影響瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性。我們采用體外培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞方法,并以β-谷甾醇(β-sitosterol)作為研究藥物,以不同濃度作用于細(xì)胞,了解藥物作用下細(xì)胞的增殖過程,并檢測β-谷甾醇(β-sitosterol)是否促進(jìn)細(xì)胞凋亡,作為獨(dú)角蓮治療瘢痕的深入研究。目的:研究中草藥獨(dú)角蓮根莖提取物β-谷甾醇(β-sitosterol)對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖和凋亡的影響。方法:1、取患者耳部瘢痕疙瘩作為標(biāo)本,瘢痕疙瘩均由于皮膚穿刺受損后引起,發(fā)病3月余�；疾『蠡颊呶唇�(jīng)過任何手術(shù)、藥物注射及物理治療。所取組織于4攝氏度環(huán)境中運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室,原代瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞均由體外組織塊培養(yǎng)法提取。2、選用生長狀態(tài)良好第三代細(xì)胞,消化離心后,細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。收集細(xì)胞數(shù)量一百萬個(gè)細(xì)胞,乙醇脫水后,在透射電鏡下觀察細(xì)胞胞核、細(xì)胞質(zhì)、高爾基體以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等超微結(jié)構(gòu),并對(duì)細(xì)胞予以鑒定。3、選取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞,以含有濃度為20umol/L、30umol/L、40umol/L、50umol/Lβ-谷甾醇的培養(yǎng)液孵育培養(yǎng)細(xì)胞24h,采用Cell Counting Kit8細(xì)胞增殖檢測法測定24h內(nèi)β-谷甾醇對(duì)細(xì)胞活性的影響,于4h后用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度值。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行三次,得出有效濃度梯度。4、選用生長狀態(tài)良好第三代細(xì)胞,消化離心后,細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。對(duì)照組加入含有溶劑的全培養(yǎng)液,實(shí)驗(yàn)組分別加入不同濃度β-谷甾醇,終濃度為(30umol/L 40umol/L 50umol/L),孵育箱孵育24h后,離心、重懸,加入500ul Binding Buffer液輕輕重懸細(xì)胞,隨后加入5ul FITC-Annexin V和10ul PI染色液,檢測相應(yīng)濃度下細(xì)胞凋亡率。結(jié)果:1、β-谷甾醇作用24h后,30uM 40uM 50uM藥物濃度下,瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的生長明顯受到抑制。濃度為20uM時(shí),細(xì)胞活性未受到明顯影響,當(dāng)藥物濃度大于30uM時(shí),β-谷甾醇對(duì)細(xì)胞的抑制作用逐漸增強(qiáng),與溶劑組和對(duì)照組相比,抑制作用明顯(p0.05);2、FITC-Annexin V/PI細(xì)胞流式染色顯示藥物組(30umol/L40umol/L 50umol/L)凋亡率分別為8.5㳠,18.0㳠,33.2㳠,對(duì)照組為3㳠(p0.05)。結(jié)論:β-谷甾醇作用于瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞24h后,可明顯抑制細(xì)胞的增殖;并且β-谷甾醇亦可促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：獨(dú)角蓮 β-谷甾醇 瘢痕疙瘩 增殖
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R622
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-12
• 材料和方法12-17
• 1 材料12
• 2 實(shí)驗(yàn)試劑12
• 3 實(shí)驗(yàn)儀器12-13
• 4 主要試劑及配制13
• 5 溶劑與藥物配制方法13-14
• 6 實(shí)驗(yàn)方法14-15
• 7 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察及鑒定15
• 8 檢測β-谷甾醇對(duì)細(xì)胞活性的影響15-16
• 9 FITC-Annexin V/PI 細(xì)胞流式技術(shù)檢測相應(yīng)濃度下的細(xì)胞凋亡率16
• 10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析16-17
• 結(jié)果17-20
• 1 原代、第三代細(xì)胞形態(tài)及其鑒定17-18
• 2 CCK8 法檢測β-谷甾醇對(duì)細(xì)胞活性的影響18-19
• 3 FITC-Annexin V/PI 雙染色對(duì)凋亡率的檢測19-20
• 討論20-25
• 1 細(xì)胞的原代培養(yǎng)20-22
• 2.溶劑的選取22-23
• 3 CCK-8(cell counting kit)比色法23
• 4 細(xì)胞流式實(shí)驗(yàn)23-24
• 5 β-谷甾醇作用機(jī)制24-25
• 結(jié)論25-26
• 參考文獻(xiàn)26-28
• 綜述28-36
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 致謝36-37

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 彭鐮心;王姝;胡一冰;鄒亮;鄧麗君;饒軒臣;何鑫怡;趙鋼;;高效液相色譜法測定苦蕎中的β-谷甾醇[J];西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年02期

2 ;β-谷甾醇栓劑的研制[J];中國藥學(xué)雜志;1980年02期

3 姜德和 ,ХаледкийА.М.,ПерльманЯ.М.;β-谷甾醇和膽甾醇的乙�；糠磻�(yīng)探討[J];南京藥學(xué)院學(xué)報(bào);1962年08期

4 陳知本,熊那,朱巧慶;β-谷甾醇側(cè)鏈的微生物降解[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào);1991年04期

5 陳文浩,朱巧慶;從甘蔗皮及渣中提取β-谷甾醇[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào);1991年04期

6 魏金婷;劉文奇;;植物藥活性成分β-谷甾醇研究概況[J];莆田學(xué)院學(xué)報(bào);2007年02期

7 張小斌;;不同產(chǎn)地半夏中β-谷甾醇含量比較[J];陜西農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年02期

8 周霞;南艷平;萬軍;;半夏中β-谷甾醇的含量測定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年03期

9 白玫，，劉美麗;天南星及其炮制品中β－谷甾醇含量測定[J];中成藥;1996年12期

10 溫榮;張長弓;張耕;周銀波;王瓊;付琴琴;王薇;王仲;;高效液相色譜法測定蔥中β-谷甾醇含量[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2010年15期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 吳紅京;段建平;;高效液相色譜測定白芥子β-谷甾醇的研究[A];第十五次全國色譜學(xué)術(shù)報(bào)告會(huì)文集（下冊）[C];2005年

2 陶仕英;牛建昭;趙丕文;楊美娟;郝慶秀;孫艷玲;;β-谷甾醇的雌激素樣作用及其機(jī)制探討[A];中國解剖學(xué)會(huì)2013年年會(huì)論文文摘匯編[C];2013年

3 許文林;邵強(qiáng);黃一波;王雅瓊;;甲苯溶劑中吡啶催化β-谷甾醇與琥珀酸酐單酯化反應(yīng)動(dòng)力學(xué)[A];第一屆全國化學(xué)工程與生物化工年會(huì)論文摘要集(上)[C];2004年

4 楊海玲;張振凌;;白附子不同炮制方法中β-谷甾醇的含量比較[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第六屆中藥炮制學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

5 陶仕英;郝慶秀;趙丕文;楊美娟;李健;牛建昭;;β-谷甾醇對(duì)人類乳腺癌細(xì)胞增殖活性的影響及其機(jī)制研究[A];中國解剖學(xué)會(huì)2012年年會(huì)論文文摘匯編[C];2012年

6 李盈;汲晨鋒;季宇彬;;甾醇的研究進(jìn)展[A];第十屆全國藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2011年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王云志;菱角的藥用[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2006年

2 曹祈東;菱角的藥用小方[N];民族醫(yī)藥報(bào);2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 吳曉毅;多種分析技術(shù)對(duì)白芷硫磺熏蒸的創(chuàng)新性應(yīng)用研究和β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2015年

2 王莉;β-谷甾醇對(duì)子宮頸癌細(xì)胞株SiHa的生長抑制作用及其機(jī)制探討[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

3 王宇;Artocarpus altilis的化學(xué)成分分離、衍生以及生物活性評(píng)價(jià)[D];浙江大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 郭惠中;中草藥獨(dú)角蓮根莖提取物β-谷甾醇（β-sitosterol）對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

2 烏漢其木格;裸燕麥麩皮中β-谷甾醇的分離提取及其特性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

3 呂國提;毛竹筍頭中β-谷甾醇的提取分離研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 毛杏飛;白花蛇舌草甾體類化學(xué)成分及其β-谷甾醇含量測定方法的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2002年

5 楊豐滇;傳統(tǒng)山藥和無硫山藥β-谷甾醇、腺苷、亞油酸含量研究[D];河南中醫(yī)學(xué)院;2014年

本文編號(hào)：812761