本文關(guān)鍵詞：基于斑馬魚睡眠行為探討中藥復(fù)方及表面活性劑對(duì)生物的影響及其作用機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 斑馬魚 抗抑郁中藥復(fù)方 表面活性劑 睡眠/覺醒行為 基因表達(dá)

【摘要】：抑郁是一種具有嚴(yán)重危害性的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,抗抑郁中藥復(fù)方對(duì)于抑郁癥的治療具有多重優(yōu)勢(shì),但是其作用機(jī)制仍不清楚。本論文中,選擇了七個(gè)經(jīng)典的抗抑郁中藥復(fù)方(TCM),利用自動(dòng)的視頻追蹤系統(tǒng)對(duì)受精后4天(dpf)的斑馬魚幼魚睡眠／覺醒行為連續(xù)進(jìn)行48 h的觀察,基于5個(gè)行為學(xué)參數(shù),通過中藥與西藥的相關(guān)性分析,研究預(yù)測(cè)歸脾湯作用靶點(diǎn)可能為伽馬氨基丁酸(GABA)和谷氨酸,桃紅四物湯、杞菊地黃丸及六君子湯可能作用于腎上腺素、五羥色胺(5-HT)及多巴胺(DA)信號(hào)通路,甘麥大棗湯和溫膽湯與經(jīng)典的抗抑郁藥馬普替林、阿米替林可能具有相同的作用機(jī)制,這些結(jié)果還需進(jìn)一步的體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。本論文基于斑馬魚行為學(xué)評(píng)價(jià)平臺(tái),能實(shí)現(xiàn)自動(dòng)的、高通量的、快速的藥物及小分子化學(xué)物篩選。這個(gè)研究是首次在體內(nèi)結(jié)合中藥研究和斑馬魚睡眠／覺醒行為,為探究傳統(tǒng)中藥復(fù)方的生物靶點(diǎn)提供了一個(gè)新的思路。表面活性劑由于其良好的物理化學(xué)性質(zhì)廣泛應(yīng)用于工業(yè)、農(nóng)業(yè)及日常生活中,作為一種有機(jī)污染物,表面活性劑對(duì)水生生物的毒性也受到廣泛的關(guān)注。本文中探究了三個(gè)不同電荷的表面活性劑對(duì)斑馬魚幼魚睡眠行為及早期發(fā)育的影響,分別是十二烷基硫酸鈉(SDS)、十二烷基二甲基芐基氯化銨(1227)及脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO-7)。首先,通過自動(dòng)的視頻追蹤系統(tǒng)對(duì)4 dpf的斑馬魚幼魚睡眠／覺醒行為進(jìn)行48 h的觀察,基于5個(gè)行為學(xué)參數(shù),結(jié)果表明：1227增加了幼魚的自發(fā)活動(dòng)量,而AEO-7降低了其活躍程度。進(jìn)一步,對(duì)斑馬魚胚胎進(jìn)行表面活性劑處理后,SDS、1227、AEO-7均導(dǎo)致了幼魚發(fā)育延遲,并且造成了頭面積、眼面積及體長縮小,AEO-7處理組變化最顯著。為了探究其機(jī)制,我們檢測(cè)了胚胎外包標(biāo)記ntl與斑馬魚腦部發(fā)育相關(guān)基因krox 20的表達(dá)水平,原位雜交結(jié)果表明這兩個(gè)基因的表達(dá)模式均發(fā)生了改變,定量實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)(qRT-PCR)結(jié)果顯示表面活性劑處理組ntl的表達(dá)量增加,而krox 20的表達(dá)量降低。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步完善了不同類型表面活性劑的生態(tài)毒性評(píng)估,為表面活性劑的安全使用提供了依據(jù),對(duì)表面活性劑污水的排放起到了警示作用。
【關(guān)鍵詞】：斑馬魚 抗抑郁中藥復(fù)方 表面活性劑 睡眠/覺醒行為 基因表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：南開大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 符號(hào)說明10-12
• 第一章 緒論12-20
• 第一節(jié) 模式動(dòng)物—斑馬魚12-13
• 1.1.1 斑馬魚簡介12
• 1.1.2 斑馬魚作為模式生物的優(yōu)勢(shì)及應(yīng)用12-13
• 第二節(jié) 抗抑郁中藥復(fù)方作用機(jī)制的研究13-15
• 1.2.1 中藥復(fù)方概述13-14
• 1.2.2 中藥復(fù)方治療抑郁癥的研究現(xiàn)狀14-15
• 第三節(jié) 表面活性劑對(duì)斑馬魚的影響15-16
• 1.3.1 表面活性劑的概述及應(yīng)用15
• 1.3.2 表面活性劑對(duì)生物影響的研究現(xiàn)狀15-16
• 第四節(jié) 斑馬魚行為學(xué)16-20
• 第二章 斑馬魚睡眠/覺醒行為探討抗抑郁中藥復(fù)方的生物靶點(diǎn)20-38
• 第一節(jié) 引言20-22
• 第二節(jié) 材料與設(shè)備22
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法22-26
• 2.3.1 斑馬魚的飼養(yǎng)22-23
• 2.3.2 中藥復(fù)方的制備及成分分析23-24
• 2.3.3 預(yù)處理24
• 2.3.4 視頻追蹤設(shè)備24-25
• 2.3.5 行為參數(shù)的挖掘與數(shù)據(jù)分析25-26
• 第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-34
• 2.4.1 斑馬魚幼魚睡眠/覺醒實(shí)驗(yàn)方法的建立26-29
• 2.4.2 聚類分析29-31
• 2.4.3 睡眠/覺醒行為變化的定性與定量31-33
• 2.4.4 中藥復(fù)方神經(jīng)信號(hào)通路的預(yù)測(cè)33-34
• 第五節(jié) 討論34-38
• 第三章 表面活性劑對(duì)斑馬魚幼魚睡眠行為及早期發(fā)育的影響38-56
• 第一節(jié) 引言38-39
• 第二節(jié) 材料與設(shè)備39-40
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法40-45
• 3.3.1 化合物40
• 3.3.2 預(yù)處理40
• 3.3.3 斑馬魚睡眠/覺醒行為學(xué)實(shí)驗(yàn)40
• 3.3.4 斑馬魚早期發(fā)育形態(tài)學(xué)分析40-41
• 3.3.5 胚胎整體原位雜交41-43
• 3.3.6 qRT-PCR檢測(cè)ntl和krox 20的表達(dá)43-44
• 3.3.7 數(shù)據(jù)分析軟件44-45
• 第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-54
• 3.4.1 斑馬魚幼魚睡眠/覺醒實(shí)驗(yàn)方法的建立以及表面活性劑的表征45-46
• 3.4.2 睡眠行為表型的聚類分析46-47
• 3.4.3 斑馬魚睡眠/覺醒行為的定性與定量分析47-48
• 3.4.4 表面活性劑對(duì)斑馬魚早期發(fā)育的影響48-52
• 3.4.5 胚胎發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)52-54
• 第五節(jié) 討論54-56
• 第四章 結(jié)論56-58
• 第一節(jié) 研究成果小結(jié)56
• 第二節(jié) 不足之處56-58
• 附錄A 中藥復(fù)方UPLC和Q-TOF-MS分析58-70
• 附錄B 附屬圖片70-104
• 參考文獻(xiàn)104-110
• 致謝110-112
• 個(gè)人簡歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果112

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