本文關(guān)鍵詞：辣木多糖的提取與體外抗丙肝病毒活性的研究

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【摘要】：辣木(Moringa Oleifera),又名鼓槌樹(shù),屬于木本植物,不僅可以直接食用,且經(jīng)過(guò)加工處理后還可以制成保健品、化妝品等,還被許多實(shí)驗(yàn)人員作為試驗(yàn)材料進(jìn)行研究。辣木的營(yíng)養(yǎng)成分豐富,主要有鈣、鐵、多糖、黃酮等,其中多糖屬于辣木的主要活性成分之一。研究發(fā)現(xiàn)多糖主要分為動(dòng)物多糖、植物多糖和微生物多糖三種,具有抗病毒、抗腫瘤等生物活性,并且具備毒性低、來(lái)源廣、易制備等優(yōu)點(diǎn),可以作為一種理想的天然藥物和功能性食品進(jìn)行開(kāi)發(fā)利用。丙型肝炎病毒(HCV)屬于黃病毒科,全球感染人數(shù)逐年上升,嚴(yán)重威脅人類的健康。目前,HCV治療方案的療效低、副作用大,且針對(duì)HCV的疫苗依舊處于空白階段。盡管國(guó)內(nèi)外關(guān)于多糖活性的研究報(bào)道很多,如山藥多糖抗細(xì)小病毒、扇貝多糖抗乙肝病毒等,但是針對(duì)辣木及其多糖的研究卻鮮有報(bào)道,目前僅僅是局限在辣木成分的提取和分離上,尚未開(kāi)展關(guān)于辣木多糖抗病毒活性等方面的研究,更沒(méi)有其抗丙肝病毒的研究。本文以辣木為原料,系統(tǒng)地研究了辣木多糖的提取、分離和純化,并用WST-1法和熒光定量PCR法對(duì)其抗丙肝病毒的生物活性和作用方式進(jìn)行了初步探討。1、辣木多糖的提取、純化。本試驗(yàn)采用熱水提取法,提取工藝：提取料液比1：10,浸提溫度80℃,提取時(shí)間為90min,提取次數(shù)3次,并用DEAE Sepharose Fast Flow快速流纖維柱對(duì)溶解于濃度為0.1mol/L～lmol/L NaCl的辣木多糖進(jìn)行分離純化,分別考察了Sevage法、三氯乙酸法和酶解法三種除蛋白質(zhì)方法的純化效果,優(yōu)化了提取工藝,并用苯酚-硫酸法測(cè)定多糖的含量。研究證明：Sevage法去除蛋白質(zhì)所得到的辣木多糖,外觀上深黃色、塊狀、不易溶于熱水中,多糖含量為29.5%；三氯乙酸法去除蛋白質(zhì)所得到的多糖,外觀上黃白色、粉末狀、較易溶于熱水中,多糖含量為31.6%；酶解法所得多糖,外觀上淺黃色、棉花樣、極易溶于冷水中,多糖含量為39.5%。以上三種方法所得到的多糖均易返潮,需注意干燥保存。Sevage法去除蛋白質(zhì)試劑浪費(fèi)嚴(yán)重,并且多糖會(huì)隨著蛋白質(zhì)一起流失,導(dǎo)致多糖大量損失；三氯乙酸法去除蛋白質(zhì)多糖容易發(fā)生降解；酶解法輔助熱水提取多糖,多糖不容易發(fā)生降解,并且可以保持較高的活性,還能夠顯著提高多糖的含量,是一種較為理想的多糖提取方法。2、辣木多糖的抗病毒活性研究。本試驗(yàn)采用體外細(xì)胞培養(yǎng)法對(duì)辣木多糖抗丙肝病毒的活性進(jìn)行研究。用水溶性四唑鹽法(WST-1法)測(cè)定多糖對(duì)人肝癌細(xì)胞(Huh7.5.1)的細(xì)胞毒性作用,利用熒光定量PCR法,探討辣木多糖的抗病毒活性,并且采用三種不同的接種方式,即先加多糖后加病毒、先加病毒后加多糖、病毒多糖同時(shí)作用,初步研究辣木多糖抗病毒的作用方式。結(jié)果表明,在WST-1試驗(yàn)中得出濃度在7.8μg/mL～125μg/mL范圍內(nèi),辣木多糖對(duì)Huh7.5.1細(xì)胞無(wú)毒性作用,即安全濃度范圍。運(yùn)用熒光PCR法測(cè)定得到辣木多糖對(duì)HCV有一定的抗病毒活性,同時(shí)采用先加多糖后加病毒的作用方式優(yōu)于其他兩種方式,并且多糖的最適濃度為62.5μg/mL,存在一定的濃度依賴性,即加入的多糖濃度越大,抗HCV活性越好,提示在臨床應(yīng)用時(shí)辣木多糖可以用于預(yù)防。
【關(guān)鍵詞】：辣木多糖 提取純化 細(xì)胞毒性 抗病毒作用
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R284.2;R285
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 縮寫(xiě)說(shuō)明8-11
• 前言11
• 1 文獻(xiàn)綜述11-19
• 1.1 辣木的概況11-12
• 1.1.1 辣木的分布情況11
• 1.1.2 辣木的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值11
• 1.1.3 辣木的藥用價(jià)值11-12
• 1.2 植物多糖的研究現(xiàn)狀12-16
• 1.2.1 多糖的分離12-13
• 1.2.2 多糖的純化13-15
• 1.2.3 多糖的活性研究15-16
• 1.3 丙肝病毒的初步概況16-17
• 1.4 本課題的研究意義和研究?jī)?nèi)容17-19
• 1.4.1 研究意義17-18
• 1.4.2 主要的研究?jī)?nèi)容18-19
• 2 試驗(yàn)材料與方法19-25
• 2.1 試驗(yàn)材料19
• 2.1.1 主要試劑19
• 2.1.2 儀器設(shè)備19
• 2.2 試驗(yàn)方法19-25
• 2.2.1 辣木的處理19-20
• 2.2.2 辣木多糖的提取20
• 2.2.3 總糖含量的測(cè)定20-21
• 2.2.4 辣木多糖的純化21-22
• 2.2.5 辣木多糖抑制丙肝病毒感染試驗(yàn)22-25
• 2.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理25
• 3 結(jié)果與分析25-31
• 3.1 總糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立25-26
• 3.2 辣木多糖不同除蛋白方法的比較研究26
• 3.3 離子交換柱分離純化辣木多糖26-27
• 3.4 辣木多糖細(xì)胞毒性試驗(yàn)27-28
• 3.5 辣木多糖抗病毒試驗(yàn)28-31
• 3.5.1 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線28
• 3.5.2 熒光PCR檢測(cè)結(jié)果28-31
• 4 討論31-33
• 4.1 多糖的制備31-32
• 4.2 辣木多糖抗病毒活性的研究32-33
• 4.2.1 辣木多糖對(duì)Huh7.5.1細(xì)胞毒性作用32
• 4.2.2 先加多糖后接病毒32
• 4.2.3 先接病毒后加多糖32-33
• 4.2.4 同時(shí)加入病毒和多糖33
• 5 結(jié)論33-35
• 參考文獻(xiàn)35-40
• 致謝40

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 龔萍;;淺談辣木的藥食價(jià)值[J];實(shí)用中醫(yī)藥雜志;2007年07期

2 林玲;何舒瀾;;辣木的研究進(jìn)展[J];海峽藥學(xué);2013年11期

3 黃國(guó)清;肖仔君;;HG-AFS測(cè)定辣木中的Se[J];光譜學(xué)與光譜分析;2007年02期

4 ;從辣木葉中分離的一種硫代氨基甲酸鹽niaziminin對(duì)腫瘤促進(jìn)劑誘導(dǎo)的EB病毒激活的抑制作用及其構(gòu)效關(guān)系[J];國(guó)外醫(yī)藥(植物藥分冊(cè));1999年01期

5 饒之坤;封良燕;李聰;何嚴(yán)萍;歐靈澄;何嵋;張雖栓;謝勇;白世民;;辣木營(yíng)養(yǎng)成分分析研究[J];現(xiàn)代儀器;2007年02期

6 ;[J];;年期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 閻樹(shù)屏;戰(zhàn)鐵錚;陳建康;;辣木的發(fā)展現(xiàn)狀及前景[A];第十六屆中國(guó)科協(xié)年會(huì)——分11森林培育技術(shù)創(chuàng)新與特色資源產(chǎn)業(yè)發(fā)展學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2014年

2 黨選民;曹振木;楊(龍?zhí)?;張秀明;;熱帶珍稀植物辣木的特性及其開(kāi)發(fā)利用[A];2004年全國(guó)學(xué)術(shù)年會(huì)農(nóng)業(yè)分會(huì)場(chǎng)論文專集[C];2004年

3 潘春香;陳錦明;;辣木幼苗干旱脅迫的生理響應(yīng)的研究[A];全國(guó)“植物生物技術(shù)及其產(chǎn)業(yè)化”研討會(huì)論文摘要集[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王穎;元謀辣木種植面積占全國(guó)50%[N];楚雄日?qǐng)?bào)(漢);2014年

2 記者 寧啟文;中國(guó)—古巴辣木科技合作中心掛牌成立[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 方曉敏;辣木提取液對(duì)水中顆粒物去除效果及其應(yīng)用研究[D];浙江大學(xué);2016年

2 杜洋;辣木多糖的提取與體外抗丙肝病毒活性的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 呂曉靜;環(huán)境因素對(duì)辣木光合作用及與其相關(guān)生理指標(biāo)的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

4 徐永強(qiáng);辣木苗期施肥效應(yīng)和營(yíng)養(yǎng)診斷研究[D];中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院;2010年

5 孫鳴燕;辣木黃酮和多糖提取方法及其含量影響因素的初步研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

6 宿愛(ài)芝;辣木栽培技術(shù)與生物量關(guān)系的研究[D];中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院;2012年

7 趙翠翠;多用途木本植物辣木快繁體系建立的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2012年

8 姚其盛;氣霧栽培條件下藥食植物辣木生長(zhǎng)及品質(zhì)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2012年

9 魏靜;多油辣木的遺傳多樣性研究[D];中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院;2013年

10 張婧;辣木組織培養(yǎng)及有效成分分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：723557