本文關(guān)鍵詞：中國被毛孢菌絲體多糖提取、結(jié)構(gòu)表征及抗腫瘤活性研究

  更多相關(guān)文章： 中國被毛孢 菌絲體多糖 純化 結(jié)構(gòu) 抗腫瘤活性

【摘要】：冬蟲夏草是我國名貴的藥用真菌,具有多種藥效,多糖是其最主要的藥理活性成分之一。蟲草多糖具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、降血糖等多種生物活性,其生物活性與多糖的結(jié)構(gòu)緊密相關(guān),且多糖的結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜,所以研究和分析蟲草多糖結(jié)構(gòu)能夠?yàn)槠渖锘钚匝芯康於ɑA(chǔ)。本課題以本實(shí)驗(yàn)室保存的冬蟲夏草菌為研究對(duì)象,研究的主要內(nèi)容及結(jié)果如下：通過固體培養(yǎng)對(duì)菌種進(jìn)行驗(yàn)證。將活化好的菌種轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基上,在16℃、18℃、20℃、22℃的不同溫度條件下恒溫培養(yǎng)30天,以菌落直徑為判斷依據(jù),確定該菌種生長的最適溫度為18℃。然后在18℃下進(jìn)行固體培養(yǎng)菌種觀察其菌落、菌絲體和分生孢子的形態(tài)和大小,通過參考文獻(xiàn)確定該菌種是冬蟲夏草的無性型中國被毛孢。利用苯酚-硫酸法測(cè)定菌絲體中多糖含量為4.71%±0.09%；利用HPLC分別測(cè)定蟲草菌絲體中的腺苷和蟲草素含量為3.47%±0.31 mg/g和1.32±0.19 mg/g；利用紫外分光光度計(jì)法測(cè)定蟲草酸含量為8.50%±0.05%；利用凱氏定氮法測(cè)定蛋白含量為31.97%±0.08%；利用索氏抽提法測(cè)定脂肪含量為8.09％±0.89%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明人工培養(yǎng)得到的菌絲體與天然冬蟲夏草具有相似的有效成分,并且其含量與天然冬蟲夏草含量相近。對(duì)液體培養(yǎng)得到蟲草菌絲體,通過水提醇沉法,分離純化得到分子質(zhì)量均一的大分子多糖HSP-Ⅲ,其糖含量和分子質(zhì)量分別為89.87%和513.89 KDa。通過紫外光譜掃描檢測(cè),表明HSP-Ⅲ中無蛋白、多肽及核酸的存在。采用比旋光儀、紅外光譜、核磁共振、薄層層析、高碘酸氧化和Smith降解、氣相色譜、圓二色譜、電子顯微鏡等技術(shù)手段,分析大分子多糖HSP-Ⅲ為α-(1→3)糖苷鍵鏈接的呋喃葡聚糖主鏈的葡聚糖；單糖主要由甘露糖和半乳糖組成；HSP-Ⅲ能與剛果紅發(fā)生絡(luò)合,是具有(+) cotton效應(yīng)的三股螺旋結(jié)構(gòu)。HSP-Ⅲ的形貌為通過鏈狀和顆粒狀結(jié)構(gòu)交聯(lián)而成片狀聚集體。通過MTT法測(cè)得中國被毛孢菌絲體多糖的抗腫瘤活性,在100μg/mL和400μg/mL時(shí)效果最好,抑制率分別為79.04%和78.17%,HSP-Ⅲ的抗腫瘤效果高于HSP-Ⅱ。
【關(guān)鍵詞】：中國被毛孢 菌絲體多糖 純化 結(jié)構(gòu) 抗腫瘤活性
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R284;R285
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-10
• 1 前言10-20
• 1.1 冬蟲夏草概述10-11
• 1.1.1 蟲草屬真菌的種類資源10
• 1.1.2 冬蟲夏草生態(tài)學(xué)研究10-11
• 1.2 冬蟲夏草無性型研究概況11-13
• 1.2.1 無性型的培養(yǎng)11-12
• 1.2.2 無性型培養(yǎng)特征12
• 1.2.3 無性型鑒定方法12-13
• 1.3 冬蟲夏草有效成分的研究13-14
• 1.3.1 核苷類13
• 1.3.2 蟲草酸13
• 1.3.3 蛋白質(zhì)和氨基酸13-14
• 1.3.4 糖醇和甾醇14
• 1.3.5 脂肪和脂肪酸14
• 1.3.6 其他類成分14
• 1.4 蟲草多糖研究進(jìn)展14-17
• 1.4.1 蟲草多糖分離純化研究15
• 1.4.2 蟲草多糖結(jié)構(gòu)研究15-17
• 1.5 蟲草多糖抗腫瘤的研究現(xiàn)狀17-18
• 1.6 研究的目的、意義及主要內(nèi)容18-20
• 1.6.1 研究的目的和意義18
• 1.6.2 研究的主要內(nèi)容18-20
• 2 材料與方法20-35
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器20-23
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料20
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器20-21
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑21-23
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)主要溶液和培養(yǎng)基23
• 2.2 試驗(yàn)方法23-35
• 2.2.1 菌種活化實(shí)驗(yàn)23
• 2.2.2 菌種固體培養(yǎng)23-24
• 2.2.3 菌絲顯微結(jié)構(gòu)觀察24
• 2.2.4 菌種液體培養(yǎng)24-25
• 2.2.5 中國被毛孢有效成分分析25-27
• 2.2.6 菌絲體多糖提取27
• 2.2.7 菌絲體多糖純化27-28
• 2.2.8 多糖含量測(cè)定28-29
• 2.2.9 多糖純度鑒定29
• 2.2.10 多糖分子質(zhì)量分布的測(cè)定29
• 2.2.11 多糖比旋光的測(cè)定29-30
• 2.2.12 紅外光譜分析30
• 2.2.13 核磁共振分析30
• 2.2.14 單糖組成分析30-31
• 2.2.15 高碘酸氧化和Simth降解31-33
• 2.2.16 剛果紅試驗(yàn)33
• 2.2.17 圓二色譜分析33
• 2.2.18 掃描電鏡觀察33-34
• 2.2.19 抗腫瘤活性研究34-35
• 3 結(jié)果與討論35-60
• 3.1 冬蟲夏草菌固體培養(yǎng)35-38
• 3.1.1 菌種最適生長溫度的確定35-36
• 3.1.2 菌落特征觀察36
• 3.1.3 光學(xué)顯微鏡觀察36-37
• 3.1.4 掃描電鏡觀察37-38
• 3.1.5 蟲草菌固體培養(yǎng)總結(jié)38
• 3.2 中國被毛孢的液體培養(yǎng)38-41
• 3.2.1 種子液的生長曲線38-39
• 3.2.2 發(fā)酵液的生長曲線39-40
• 3.2.3 最適培養(yǎng)溫度的確定40-41
• 3.2.4 液體培養(yǎng)的總結(jié)41
• 3.3 中國被毛孢有效成分分析41-43
• 3.3.1 多糖含量分析41
• 3.3.2 腺苷和蟲草素含量分析41-42
• 3.3.3 蟲草酸含量分析42-43
• 3.3.4 蛋白質(zhì)含量分析43
• 3.3.5 脂肪含量分析43
• 3.3.6 有效成分分析總結(jié)43
• 3.4 中國被毛孢菌絲體多糖提取43-44
• 3.4.1 蟲草多糖提取43
• 3.4.2 蟲草多糖純化43-44
• 3.5 多糖含量的測(cè)定44-45
• 3.5.1 總糖含量的測(cè)定44
• 3.5.2 還原糖含量的測(cè)定44-45
• 3.5.3 多糖含量的計(jì)算45
• 3.6 多糖純度的鑒定45-46
• 3.7 多糖分子質(zhì)量的測(cè)定46-47
• 3.8 比旋光度分析47
• 3.9 多糖的紅外分析47-48
• 3.10 多糖的核磁分析48-50
• 3.10.1 ~1HNMR分析48-49
• 3.10.2 ~(13)CNMR分析49-50
• 3.11 多糖的單糖組成分析50-52
• 3.11.1 單糖薄層層析50-51
• 3.11.2 氣相分析51-52
• 3.12 多糖的連接方式分析52-55
• 3.12.1 高碘酸氧化分析52-53
• 3.12.2 Smith降解分析53-55
• 3.13 剛果紅試驗(yàn)55-56
• 3.14 圓二色譜分析56-57
• 3.15 多糖掃描電鏡分析57
• 3.16 多糖抗腫瘤活性分析57-60
• 4 結(jié)論60-61
• 5 展望61-62
• 6 參考文獻(xiàn)62-69
• 7 碩士期間發(fā)表論文等情況69-70
• 8 致謝70

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李建宏;謝放;王燦;張楠;;中國被毛孢分生孢子形成過程顯微結(jié)構(gòu)的研究[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2013年07期

2 傅惠英;張利棕;壽旗揚(yáng);周衛(wèi)民;屠玨;陳民利;;中國被毛孢和蝙蝠蛾擬青霉小鼠免疫功能調(diào)節(jié)作用的比較[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2012年09期

3 端木加敏;馮慧琴;楊明俊;張術(shù)易;楊慶堯;楊曉彤;;中國被毛孢胞內(nèi)多糖提取物中淀粉的酶法去除研究[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2012年15期

4 韓成芳;紅梅;涂峰;;中國被毛孢菌粉對(duì)小鼠抗疲勞、免疫功能的作用[J];中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2011年34期

5 壽旗揚(yáng);傅惠英;陳方明;周衛(wèi)民;張才喬;陳民利;;中國被毛孢發(fā)酵物對(duì)NOD小鼠1型糖尿病的預(yù)防作用[J];中草藥;2010年08期

6 沈龍海;安泳潼;楊慶堯;楊曉彤;沈旭;丁宏;;中國被毛孢菌絲體提取物抗腎損傷作用體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2011年11期

7 鄭林;;香草醛-冰醋酸法測(cè)定中國被毛孢總甾醇含量[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2011年11期

8 傅惠英;壽旗揚(yáng);;中國被毛孢發(fā)酵物對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年02期

9 傅惠英;壽旗揚(yáng);李艷偉;翟云燕;呂圭源;;中國被毛孢發(fā)酵物對(duì)睡眠剝奪亞健康大鼠的影響[J];中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2009年06期

10 黃河;姜建民;傅惠英;;中國被毛孢發(fā)酵物對(duì)小鼠T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的影響[J];浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2010年04期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 郭英蘭;;中國被毛孢形態(tài)特征訂正[A];加入WTO和中國科技與可持續(xù)發(fā)展——挑戰(zhàn)與機(jī)遇、責(zé)任和對(duì)策（上冊(cè)）[C];2002年

2 劉永霞;劉作易;;冬蟲夏草無性型——中國被毛孢液體發(fā)酵研究[A];生命科學(xué)與微生物專輯[C];2004年

3 馮慧琴;楊明俊;楊曉彤;楊慶堯;;中國被毛孢發(fā)酵菌絲體多糖組分免疫活性的體外篩選[A];中國菌物學(xué)會(huì)第六屆會(huì)員代表大會(huì)（2014年學(xué)術(shù)年會(huì)）暨貴州省食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展高峰論壇會(huì)議摘要[C];2014年

4 馮慧琴;張穎茁;宋利芳;楊明俊;曾平;馬博贏;楊慶堯;楊曉彤;;中國被毛孢甲醇提取物對(duì)LPS致大鼠肺泡巨噬細(xì)胞炎性反應(yīng)的抑制活性和機(jī)制[A];中國菌物學(xué)會(huì)第六屆會(huì)員代表大會(huì)（2014年學(xué)術(shù)年會(huì)）暨貴州省食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展高峰論壇會(huì)議摘要[C];2014年

5 馮慧琴;楊明俊;楊曉彤;楊慶堯;;HPLC分析中國被毛孢菌絲體多糖的單糖組分[A];中國菌物學(xué)會(huì)第五屆會(huì)員代表大會(huì)暨2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

6 壽旗揚(yáng);張利棕;蔡月琴;陳方明;周衛(wèi)民;陳民利;;中國被毛孢對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)IPF大鼠的治療作用及機(jī)制研究[A];2014年全國中藥學(xué)術(shù)研討會(huì)暨中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第六屆中藥專業(yè)委員會(huì)換屆改選會(huì)論文集[C];2014年

7 朱佳石;郭英蘭;姚藝桑;周妍嬌;陸繼紅;齊瑩;劉星階;吳子Z，

本文編號(hào)：655729