本文關(guān)鍵詞：五種中藥注射液對(duì)大鼠體外肝微粒體中CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9酶的影響

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【摘要】：目的:一、建立高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC),測(cè)定大鼠體外肝微粒體中對(duì)乙酰氨基酚、1-羥基咪達(dá)唑侖和4-羥基雙氯芬酸的濃度。二、建立大鼠體外肝微粒體孵育體系。選擇非那西丁、咪達(dá)唑侖和雙氯芬酸分別作為CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9的特異性探針?biāo)幬?用高效液相色譜法分別測(cè)定大鼠肝微粒體孵育后相應(yīng)的代謝物(對(duì)乙酰氨基酚、1-羥基咪達(dá)唑侖和4-羥基雙氯芬酸)的濃度,得出三種探針?biāo)幬锏拿竸?dòng)力學(xué)參數(shù),評(píng)價(jià)CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9三種酶的活性。三、考察五種中藥注射液對(duì)大鼠體外肝微粒體中CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9酶的影響。向孵育系統(tǒng)中分別加入不同濃度的丹參川芎嗪注射液、谷紅注射液、銀杏葉提取物注射液、參麥注射液以及參附注射液,測(cè)定探針?biāo)幬锎x產(chǎn)物對(duì)乙酰氨基酚、1-羥基咪達(dá)唑侖和4-羥基雙氯芬酸的濃度,計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50,考察五種中藥注射液對(duì)體外肝微粒體中CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9酶活性的影響。方法:建立和優(yōu)化高效液相色譜條件:1、測(cè)定大鼠肝微粒體中對(duì)乙酰氨基酚的濃度:柱溫選擇30℃,流速設(shè)定0.8m L·min-1,Hypersil BDS C18柱(150mm×4.6mm,5μm),檢測(cè)波長(zhǎng)245nm,流動(dòng)相A為乙腈,B為50.0mmol·L-1 Na2HPO4緩沖液(p H4.5),梯度洗脫;2、測(cè)定大鼠肝微粒體中1-羥基咪達(dá)唑侖的濃度:柱溫選擇30℃,流速設(shè)定1.0m L·min-1,Hypersil BDS C18柱(150mm×4.6mm,5μm),檢測(cè)波長(zhǎng)230nm;流動(dòng)相A為乙腈,B為10.0mmol·L-1Na2HPO4緩沖液(p H8.4),梯度洗脫;3、測(cè)定大鼠肝微粒體中4-羥基雙氯芬酸的濃度:柱溫選擇30℃,流速設(shè)定0.8m L·min-1,Hypersil BDS C18柱(250mm×4.6mm,5μm),檢測(cè)波長(zhǎng)276nm,流動(dòng)相A為乙腈,B為50.0mmol·L-1 Na2HPO4緩沖液(p H4.5),等度洗脫。優(yōu)化大鼠肝微粒體孵育體系的蛋白濃度,優(yōu)化孵育時(shí)間。以Lineweaver-Burk為坐標(biāo)求得Km與Vmax值。將不同濃度的丹參川芎嗪注射液、谷紅注射液、銀杏葉提取物注射液、參麥注射液以及參附注射液分別加入到孵育體系中,測(cè)定探針?biāo)幬锎x產(chǎn)物的濃度,評(píng)價(jià)對(duì)三種酶活性的影響,并分別計(jì)算出五種中藥注射液對(duì)CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9的半數(shù)抑制濃度(IC50)。結(jié)果:在建立的色譜條件下,探針?biāo)幬锖痛x產(chǎn)物峰形良好,各自內(nèi)標(biāo)亦符合標(biāo)準(zhǔn),整個(gè)體系中干擾因素較小。對(duì)乙酰氨基酚的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù):Km=102.0μmol·L-1,Vmax=1.05nmol·min-1·mg protein-1;對(duì)乙酰氨基酚線性區(qū)間0.10~49.90μmol/L。處理回收率85%,日內(nèi)、日間精密度均10%,穩(wěn)定性均10%,準(zhǔn)確度在85%~115%區(qū)間內(nèi)。1-羥基咪達(dá)唑侖的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù):Km=57.0μmol·L-1,Vmax=1.05nmol·min-1·mg protein-1;1-羥基咪達(dá)唑侖線性區(qū)間0.10~29.90μmol/L,處理回收率85%,日內(nèi)、日間精密度均10%,穩(wěn)定性均10%,準(zhǔn)確度在85%~115%區(qū)間內(nèi)。4-羥基雙氯芬酸的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)Km=16.9μmol·L-1,Vmax=1.26nmol·min-1·mg protein-1;4-羥基雙氯芬酸線性區(qū)間0.20~29.90μmol/L,處理回收率85%,日內(nèi)、日間精密度均10%,穩(wěn)定性均10%,準(zhǔn)確度在85%~115%區(qū)間內(nèi)。丹參川芎嗪注射液對(duì)CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9無抑制;谷紅注射液對(duì)CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9無抑制;銀杏葉提取物注射液對(duì)CYP3A4和CYP2C9的IC50分別為11.48%、12.91%;參麥注射液對(duì)CYP1A2、CYP3A4無抑制,對(duì)CYP2C9的IC50為3.68%;參附注射液對(duì)CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9的IC50分別為4.27%、6.65%、5.23%。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)采用體外肝微粒體孵育法,通過探針?biāo)幬?評(píng)價(jià)大鼠肝微粒體中CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9酶的活性,方法具有操作性、可靠性。通過建立大鼠肝微粒體孵育體系,考察五種中藥注射液對(duì)CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9酶活性產(chǎn)生的影響。經(jīng)數(shù)據(jù)整理后發(fā)現(xiàn):丹參川芎嗪注射液在體外對(duì)CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9無明顯抑制作用;谷紅注射液在體外對(duì)CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9無明顯抑制作用;銀杏葉提取物注射液在體外對(duì)CYP3A4和CYP2C9均有輕度抑制作用;參麥注射液在體外對(duì)CYP1A2和CYP3A4無明顯抑制作用,對(duì)CYP2C9有抑制作用;參附注射液在體外對(duì)CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9均有抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：高效液相色譜法 中藥注射液 大鼠肝微粒體 CYP1A2 CYP3A4 CYP2C9
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 材料和方法15-22
• 2.1 儀器、藥品與試劑15-16
• 2.2 肝微粒體的制備16-17
• 2.3 溶液配制17-18
• 2.4 肝微粒體孵育體系18
• 2.5 樣品處理18-19
• 2.6 色譜條件19
• 2.7 非那西丁的體外酶動(dòng)力學(xué)測(cè)定19-20
• 2.8 咪達(dá)唑侖的體外酶動(dòng)力學(xué)測(cè)定20
• 2.9 雙氯芬酸的體外酶動(dòng)力學(xué)測(cè)定20-21
• 2.10五種中藥注射液對(duì)CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9酶活性影響的測(cè)定21-22
• 結(jié)果22-35
• 3.1 測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚的方法學(xué)確證22-24
• 3.2 測(cè)定 1-羥基咪達(dá)唑侖的方法學(xué)確證24-26
• 3.3 測(cè)定 4-羥基雙氯芬酸的方法學(xué)確證26-28
• 3.4 非那西丁在大鼠肝微粒體中的酶動(dòng)力學(xué)28-29
• 3.5 咪達(dá)唑侖在大鼠肝微粒體中的酶動(dòng)力學(xué)29-30
• 3.6 雙氯芬酸在大鼠肝微粒體中的酶動(dòng)力學(xué)30-32
• 3.7 五種中藥注射液對(duì)CYP1A2、CYP3A4和CYP2C9酶活性的影響32-35
• 討論35-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 綜述40-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 致謝51-52

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3 張圣虎;高士祥;劉濟(jì)寧;石利利;吉貴祥;吳晟e，

本文編號(hào)：617061