發(fā)布時(shí)間：2017-08-01 18:35

  本文關(guān)鍵詞：自噬在晚期糖化終產(chǎn)物誘導(dǎo)MG63細(xì)胞分泌炎癥因子IL-6中的作用

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【摘要】：目的:晚期糖化終產(chǎn)物(AGEs)與糖尿病骨質(zhì)疏松癥相關(guān)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),AGEs通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)途徑,促進(jìn)人成骨肉瘤MG63細(xì)胞分泌炎癥因子白介素-6(IL-6),并與氧化應(yīng)激相關(guān)。本課題研究AGEs對MG63自噬水平的影響并探討自噬在AGEs誘導(dǎo)MG63細(xì)胞分泌IL-6中的作用,為糖尿病骨質(zhì)疏松癥的研究提供新的思路。方法:1,常規(guī)方法制備AGEs。200μg/ml AGEs/BSA,作用MG63細(xì)胞0、1、1.5、3、6、12、24、48h,Western-blot檢測自噬相關(guān)蛋白即微管相關(guān)的輕鏈蛋白3(LC3-II)表達(dá);再以不同濃度(0、50、100、200μg/ml)AGEs/BSA作用MG63細(xì)胞24h,Western-blot檢測LC3-II表達(dá)。2,200μg/ml AGEs作用MG63細(xì)胞0、1、3、6h及0、50、100、200μg/ml AGEs/BSA作用MG63細(xì)胞6h,流式細(xì)胞儀檢測活性氧(ROS)水平,同時(shí)設(shè)立H2O2陽性對照組;Western-blot觀察抑制劑牛磺酸熊脫氧膽酸(TUDCA)(0.1m M、2m M)N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)(2m M、10m M)預(yù)處理1h再以200μg/ml AGEs刺激24h后LC3-II表達(dá)水平的變化情況。3,自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素(RA)(10n M、100n M)、自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)(5m M、10m M)預(yù)處理1h后再用200μg/ml AGEs刺激24h,同時(shí)設(shè)立BSA對照組,MTT檢測細(xì)胞增殖,微量酶標(biāo)法檢測堿性磷酸酶(ALP)活性,ELISA檢測白介素-6(IL-6)表達(dá)。結(jié)果:1,AGEs、BSA分別作用于MG63細(xì)胞,Western blot結(jié)果顯示與空白對照組相比,50~200μg/ml AGEs作用細(xì)胞24h及200μg/ml AGEs作用細(xì)胞1、1.5、3、6、12、24、48h均可上調(diào)LC3-II表達(dá)水平(P0.01)。2.AGEs、BSA分別作用MG63細(xì)胞,流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示與空白對照組相比,50~200μg/ml AGEs作用細(xì)胞6h及200μg/ml AGEs作用細(xì)胞1、3、6h可誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生(P0.01);Western blot結(jié)果顯示與AGEs組相比,TUDCA、NAC均能抑制LC3-II表達(dá)(P0.01)。3.與200μg/ml AGEs相比,MTT結(jié)果顯示RA抑制細(xì)胞的生長,降低ALP活性,IL-6生成增多(P0.01);3-MA則促進(jìn)細(xì)胞生長,提高ALP活性,IL-6生成減少(P0.01)。結(jié)論:1.AGEs可促進(jìn)MG63細(xì)胞自噬。2.AGEs促進(jìn)MG63細(xì)胞ROS的產(chǎn)生;NAC及TUDCA均能降低AGEs誘導(dǎo)的MG63細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白的表達(dá),說明AGEs促進(jìn)MG63細(xì)胞自噬可能與氧化應(yīng)激-內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)。3.抑制自噬使AGEs誘導(dǎo)的MG63細(xì)胞增殖、增加ALP活性、減少IL-6分泌。
【關(guān)鍵詞】：自噬 晚期糖化終產(chǎn)物 MG63細(xì)胞 白介素-6
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2;R580
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-22
• 結(jié)果22-29
• 討論29-34
• 小結(jié)34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 綜述39-46
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 致謝46

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本文編號：605655