本文關(guān)鍵詞：芍藥內(nèi)酯苷臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究

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【摘要】：芍藥內(nèi)酯苷(Albiflorin)又名白芍苷是毛莨科(Ranunculaceae)植物芍藥(Paeonialacti flora Pall.)或赤芍(Paeoniaveitchii Lynch.)的干燥根提取物,屬于單萜類化合物。有研究證明,芍藥內(nèi)酯苷具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗驚厥作用,調(diào)節(jié)免疫力,舒張平滑肌,抗炎等作用,此外其還有殺滅病原微生物和保護(hù)肝臟的作用。芍藥內(nèi)酯苷理作用廣泛,近年來最新研究發(fā)現(xiàn),芍藥內(nèi)酯苷具有抗抑郁作用,可促進(jìn)睡眠、保護(hù)腦神經(jīng),其藥理活性甚至超過了中藥白芍中的主要成分芍藥苷。所以,該化合物具有良好的開發(fā)前景,現(xiàn)擬申報(bào)一類新藥。本研究工作旨在研究芍藥內(nèi)酯苷的藥代動(dòng)力學(xué)特性,為該化合物的臨床研究以及劑型研發(fā)提供初步依據(jù)。目的 對芍藥內(nèi)酯苷的藥代動(dòng)力學(xué)特性進(jìn)行較為全面的研究,獲得其吸收、分布、排泄以及代謝酶的相關(guān)數(shù)據(jù)。方法利用LC-MS/MS技術(shù)對芍藥內(nèi)酯苷的生物樣品進(jìn)行檢測,分析其血藥濃度、組織藥物濃度、排泄物藥物濃度等。通過計(jì)算得到芍藥內(nèi)酯苷的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。利用體外肝微粒溫孵技術(shù),確定芍藥內(nèi)酯苷是否被細(xì)胞色素P450各個(gè)亞型所代謝,以及是否對細(xì)胞色素P450各個(gè)亞型有抑制或誘導(dǎo)作用。利用體外Caco-2細(xì)胞模型技術(shù),研究芍藥內(nèi)酯苷的吸收特性。結(jié)果 建立了一種靈敏度高、專屬性強(qiáng)、簡單、快速的檢測ICR小鼠和Beagle犬生物樣品中芍藥內(nèi)酯苷分析方法。利用LC-MS/MS技術(shù),直接沉淀蛋白法,進(jìn)行生物樣品的測定。生物基質(zhì)不干擾芍藥內(nèi)酯苷的測定,經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證,芍藥內(nèi)酯苷的在1-1000ng/mL線性范圍良好,最低定量下限為1 ng/mL;該方法的日間和日內(nèi)精密度小于(RSD)小于12%,方法準(zhǔn)確度在93～107%之間,回收率在85%以上。小鼠單劑量口服芍藥內(nèi)酯苷(3.5 mg/kg、7 mg/kg、14 mg/kg)后于不同時(shí)間點(diǎn)從眼底靜脈叢快速準(zhǔn)確取血后,采用上述LC-MS/MS方法進(jìn)行血藥濃度檢測,并繪制出血藥濃度-時(shí)間曲線,采用DAS 2.0非房室模型法計(jì)算藥物的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果表明,ICR小鼠在服用芍藥內(nèi)酯苷后吸收和消除較快,在10h左右消除完全消除,三個(gè)劑量組的Cmax、AUC(0-∞)均與劑量呈線性相關(guān),符合一級(jí)消除動(dòng)力學(xué)。ICR小鼠單劑量給藥7 mg/kg后在10 min、1 h、6 h立即頸椎脫臼處死,測得各組織中藥物濃度。結(jié)果表明在10 min時(shí)各組織已均有芍藥內(nèi)酯苷分部,除腸、胃、腎外其余組織含量均較低；1h時(shí)各組織含藥濃度基本達(dá)峰；6h時(shí)各組織含藥濃度均顯著降低。所以,芍藥內(nèi)酯苷在各器官內(nèi)無藥物蓄積情況。Beagle犬單劑量口服芍藥內(nèi)酯苷(0.5 mg/kg、1 mg/kg、2 mg/kg)后測得藥物的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果表明,比格犬在服用芍藥內(nèi)酯苷后吸收和消除較快,在10h左右消除完全消除,三個(gè)劑量組的Cmax、AUC (0-∞)均與給藥劑量呈線性相關(guān),符合一級(jí)消除動(dòng)力學(xué)。Beagle犬在連續(xù)十天(每天口服一次)口服芍藥內(nèi)酯苷1 mg/kg,通過服藥前監(jiān)控血藥濃度發(fā)現(xiàn),在服藥前芍藥內(nèi)酯苷在比格犬體內(nèi)已經(jīng)基本消除完全；通過最后一次給藥后計(jì)算的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與單劑量給藥的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)相比較,發(fā)現(xiàn)多次給藥與單次給藥的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)無差異。結(jié)果表明芍藥內(nèi)酯苷在多次服用時(shí)無藥物蓄積現(xiàn)象。利用體外溫孵技術(shù),將芍藥內(nèi)酯苷與細(xì)胞色素P450各亞型及人肝原代細(xì)胞孵育,結(jié)果發(fā)現(xiàn)芍藥內(nèi)酯苷對P450酶各亞型和人肝原代細(xì)胞無誘導(dǎo)和抑制作用。利用Caco-2細(xì)胞模型,考察芍藥內(nèi)酯苷的吸收機(jī)制,結(jié)果發(fā)現(xiàn)芍藥內(nèi)酯苷的在Caco-2單細(xì)胞模型中吸收較差,外排率大于2。結(jié)論 芍藥內(nèi)酯苷在ICR小鼠和Beagle犬體內(nèi)吸收、消除較快,吸收較差、生物利用度較低,在體內(nèi)無蓄積作用,對P450酶各亞型和人肝原代細(xì)胞無誘導(dǎo)和抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：芍藥內(nèi)酯苷 藥代動(dòng)力學(xué) 臨床前藥代動(dòng)力學(xué) LC-MS/MS 組織分布 排泄 細(xì)胞色素P450 肝原代細(xì)胞 Caco-2細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 研究生指導(dǎo)老師4
• 課題指導(dǎo)小組成員4-10
• 摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 縮寫符號(hào)說明14-15
• 前言15-17
• 第一章 白芍研究進(jìn)展17-22
• 1.1 化學(xué)成分17-20
• 1.1.1 單萜及其苷類化合物17-18
• 1.1.2 三萜類化合物18
• 1.1.3 黃酮類化合物18
• 1.1.4 揮發(fā)油18-20
• 1.2 藥理作用20-22
• 第二章 生物樣品中的芍藥內(nèi)酯苷檢測方法的建立22-29
• 2.1 材料22-23
• 2.1.1 藥品和試劑22
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器22
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物22-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-25
• 2.2.1 色譜條件23
• 2.2.2 質(zhì)譜條件23
• 2.2.3 專屬性實(shí)驗(yàn)23
• 2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)液配制23-24
• 2.2.5 血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線配制24
• 2.2.6 生物樣品處理24
• 2.2.7 準(zhǔn)確度與精密度考察24
• 2.2.8 回收率考察24
• 2.2.9 基質(zhì)效應(yīng)考察24-25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-28
• 2.3.1 專屬性實(shí)驗(yàn)25-26
• 2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制26
• 2.3.3 準(zhǔn)確度與精密度考察26-27
• 2.3.4 提取回收率考察27-28
• 2.3.5 基質(zhì)效應(yīng)考察28
• 2.4 討論28-29
• 第三章 小鼠口服和靜脈注射芍藥內(nèi)酯苷的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究29-40
• 3.1 材料29
• 3.1.1 藥品和試劑29
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器29
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物29
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法29-31
• 3.2.1 色譜、質(zhì)譜方法29
• 3.2.2 小鼠口服芍藥內(nèi)酯苷后血漿藥代動(dòng)力學(xué)特征29-30
• 3.2.3 小鼠靜脈注射芍藥內(nèi)酯苷后血漿藥代動(dòng)力學(xué)特征30
• 3.2.4 小鼠口服芍藥內(nèi)酯苷后體內(nèi)主要臟器組織分布30
• 3.2.5 小鼠口服芍藥內(nèi)酯苷后尿液和糞便排泄30-31
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-38
• 3.3.1 小鼠單次口服芍藥內(nèi)酯苷后血漿藥代動(dòng)力學(xué)特征31-35
• 3.3.2 小鼠單次靜脈注射芍藥內(nèi)酯苷后血漿藥代動(dòng)力學(xué)特征35-36
• 3.3.3 小鼠口服芍藥內(nèi)酯苷后體內(nèi)主要臟器組織分布36-38
• 3.3.4 小鼠口服芍藥內(nèi)酯苷后尿液和糞便排泄38
• 3.4 討論38-40
• 第四章 Beagle犬口服和靜脈注射芍藥內(nèi)酯苷的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究40-52
• 4.1 材料40
• 4.1.1 藥品和試劑40
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器40
• 4.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物40
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法40-41
• 4.2.1 色譜、質(zhì)譜方法40
• 4.2.2 Beagle犬口服芍藥內(nèi)酯苷后血漿藥代動(dòng)力學(xué)特征40-41
• 4.2.3 Beagle犬靜脈注射芍藥內(nèi)酯苷后血漿藥代動(dòng)力學(xué)特征41
• 4.2.4 Beagle犬多劑量口服芍藥內(nèi)酯苷后血漿藥代動(dòng)力學(xué)特征41
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-50
• 4.3.1 Beagle犬口服芍藥內(nèi)酯苷后血漿藥代動(dòng)力學(xué)特征41-46
• 4.3.2 Beagle犬靜脈注射芍藥內(nèi)酯苷后血漿藥代動(dòng)力學(xué)特征46-48
• 4.3.3 Beagle犬多次口服芍藥內(nèi)酯苷后血漿藥代動(dòng)力學(xué)特征48-50
• 4.4 討論50-52
• 第五章 芍藥內(nèi)酯苷對藥物代謝酶的誘導(dǎo)、抑制作用研究52-69
• 5.1 材料52
• 5.1.1 藥品和試劑52
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器52
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法52-56
• 5.2.1 芍藥內(nèi)酯苷體外代謝穩(wěn)定性研究52-53
• 5.2.2 芍藥內(nèi)酯苷對細(xì)胞色素P450酶抑制作用研究53-54
• 5.2.3 芍藥內(nèi)酯苷對人原代肝細(xì)胞CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4的誘導(dǎo)作用研究54-56
• 5.2.4 數(shù)據(jù)分析56
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果56-68
• 5.3.1 芍藥內(nèi)酯苷體外代謝穩(wěn)定性研究56-57
• 5.3.2 芍藥內(nèi)酯苷體對人肝微粒體主要CYP450酶的抑制作用研究57-60
• 5.3.3 芍藥內(nèi)酯苷對人原代肝細(xì)胞CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4的誘導(dǎo)作用研究60-68
• 5.4 討論68-69
• 第六章 Caco-2細(xì)胞模型研究芍藥內(nèi)酯苷的吸收機(jī)制69-73
• 6.1 材料69
• 6.1.1 藥品和試劑69
• 6.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器69
• 6.2 實(shí)驗(yàn)方法69-71
• 6.2.1 Caco-2細(xì)胞模型研究芍藥內(nèi)酯苷的吸收機(jī)制操作方法69-70
• 6.2.2 數(shù)據(jù)處理70-71
• 6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果71-72
• 6.4 討論72-73
• 結(jié)語73-74
• 參考文獻(xiàn)74-77
• 論著 GC-MS聯(lián)用法分析不同產(chǎn)地白芍和赤芍揮發(fā)油成分77-93
• 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果93-94
• 致謝94

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本文編號(hào)：590912