目的闡明腎主骨生長發(fā)育的中醫(yī)理論內(nèi)涵及現(xiàn)代醫(yī)學研究情況。以Cx43蛋白及其介導的GJIC功能為切入點探討腎主骨生長發(fā)育的理論實質(zhì),并通過大鼠BMSCs體外培養(yǎng)軟骨向誘導分化實驗,進行實驗研究,論證左歸丸對Cx43蛋白的調(diào)控作用及機制。方法1、理論研究:理論研究從理論淵源、理論內(nèi)涵、理論運用角度,闡明祖國醫(yī)學對“腎主骨生長發(fā)育”理論的認識。根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學腎主骨生長發(fā)育研究情況,探討其理論的現(xiàn)代醫(yī)學實質(zhì)。2、實驗研究:SPF級2月齡SD雄性大鼠中藥濃縮劑灌胃,通過血清藥理學方法,制備體積分數(shù)為10%的含藥血清培養(yǎng)液,進行共培養(yǎng)。采用密度梯度離心法制取BMSCs培養(yǎng)傳代,加入誘導液進行成軟骨誘導。實驗分組:設(shè)立正常對照A組(培養(yǎng)基加入灌服生理鹽水動物血清配制的誘導液)、左歸丸含藥血清B組(培養(yǎng)基加入左歸丸含藥血清配制的誘導液),左歸丸含藥血清+縫隙連接阻滯C組(同B組+AGA)。細胞分組處理后,每3d換液一次,誘導培養(yǎng)21d。培養(yǎng)過程中進行細胞形態(tài)學觀察;第14天采用RT-PCR技術(shù)檢測Cx43、GDF-5mRNA表達、免疫熒光染色檢測Cx43蛋白表達,劃痕染料標記示蹤法檢測細胞GJIC功能;第...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1細胞生長形態(tài)學觀察注:倒置相差顯微鏡×100倍

基于CX43研究腎主骨生長發(fā)育理論與相關(guān)實驗313結(jié)果3.1培養(yǎng)細胞形態(tài)學觀察原代細胞培養(yǎng)初期呈梭形或紡錘形，旋渦狀向四周擴增生長，見圖1-A；傳代細胞呈梭形波浪狀排列，見圖1-B。軟骨向分化誘導培養(yǎng)初期細胞為梭型，有星形多突起，見圖1-C；培養(yǎng)第7天，細胞增殖、體積增大，伸展出....

圖2目的基因瓊脂糖凝膠電泳圖

湖北中醫(yī)藥大學2020屆碩士學位論文32圖2目的基因瓊脂糖凝膠電泳圖注:數(shù)字0代表Mark;1,2代表A組;3,4代表B組;5,6代表C組。表2各組細胞目的基因Cx43、GDF-5mRNA相對表達量(sx)組別A組B組C組Cx431.000±0.0001.722±0.013*1.....

圖3免疫熒光染色檢測培養(yǎng)細胞Cx43蛋白表達注：A、B、C代表實驗的三個分組；1為目的蛋白Cx43染色，2為細胞DAPI核染，3為前兩種染色的疊加

基于CX43研究腎主骨生長發(fā)育理論與相關(guān)實驗33圖3免疫熒光染色檢測培養(yǎng)細胞Cx43蛋白表達注：A、B、C代表實驗的三個分組；1為目的蛋白Cx43染色，2為細胞DAPI核染，3為前兩種染色的疊加。（熒光顯微鏡×400倍）表3各組細胞Cx43蛋白表達定量(sx)組別A組B組C組平均....

圖4各組細胞縫隙連接熒光黃染料標記

湖北中醫(yī)藥大學2020屆碩士學位論文34間的擴散距離，B組與A組對比，差異顯著（P<0.O5），加用AGA后，GJIC功能明顯下降，C組與B組比較，P<O.O5。結(jié)果見圖4、表4。圖4各組細胞縫隙連接熒光黃染料標記注：A、B、C代表實驗的三個分組。(熒光顯微鏡×200倍)表4各組....

本文編號：4020848