目的:最近,有研究報道IL-37是炎癥的天然抑制劑,在多個組織中表達并調(diào)節(jié)炎性進展。本研究旨在探究IL-37在顳下頜關(guān)節(jié)炎癥中的抗炎作用及其分子機制。方法:首先使用ELISA和免疫組化染色(IHC)染色檢測人顳下頜關(guān)節(jié)中IL-37的表達。其次在體外實驗中,用人IL-37b蛋白預(yù)處理人顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞后,用IL-1β刺激誘導(dǎo)炎癥,用qPCR和Wester n blot手段檢測炎癥相關(guān)因子表達。并將siRNA-IL-1R8轉(zhuǎn)染到軟骨細(xì)胞中,qPCR檢測相關(guān)炎癥因子,Western blot檢測其信號通路。最后,在SD大鼠中建立顳下頜關(guān)節(jié)盤穿孔的炎癥模型,將人重組IL-37b蛋白用于SD大鼠顳下頜關(guān)節(jié)。通過Micro CT,IHC,qPCR,番紅固綠以及TRAP染色用于驗證治療效果。結(jié)果:IL-37在人顳下頜關(guān)節(jié)的滑膜,關(guān)節(jié)盤及其關(guān)節(jié)軟骨中有所表達。其次,顳下頜關(guān)節(jié)滑膜炎患者的滑液中IL-37的表達高于骨關(guān)節(jié)炎和不可復(fù)性盤前移位的患者。在體外的細(xì)胞實驗中,IL-37b亞型在人顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中高度表達,并抑制促炎因子IL-6,IL-8以及基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP1,MMP3,MMP9,MM...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
第一章 IL-37在顳下頜關(guān)節(jié)軟骨、滑膜、關(guān)節(jié)盤、滑液中的表達的研究
    1 材料
        1.1 實驗對象
        1.2 實驗試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
    2 實驗方法
        2.1 石蠟切片制備
        2.2 免疫組化(IHC)染色
        2.3 Elisa實驗
        2.4 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 IL-37在顳下頜關(guān)節(jié)組織中表達
        3.2 IL-37蛋白在顳下頜關(guān)節(jié)滑液中的表達
    4 討論
第二章 IL-37b在軟骨細(xì)胞中的抑炎作用及其機制探究
    1 材料
        1.1 實驗試劑
        1.2 主要儀器設(shè)備
        1.3 部分試劑的配置
    2 實驗方法
        2.1 人顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞傳代/細(xì)胞凍存
        2.3 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.4 瓊脂糖凝膠電泳
        2.5 IL-37b抑制IL-1β誘導(dǎo)的人顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞炎癥
        2.6 siRNA-IL-1R8 轉(zhuǎn)染技術(shù)
        2.7 實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)
        2.8 western blot
        2.9 免疫熒光染色
        2.10 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 IL-37亞型在顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中的表達
        3.2 IL-37b抑制炎癥作用的濃度篩選
        3.3 IL-37b抑制IL-1β誘導(dǎo)的炎癥因子的基因表達
        3.4 IL-37b抑制IL-1β誘導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶的蛋白表達
        3.5 IL-37b抑制炎癥因子的表達需要IL-1R8 參與
        3.6 IL-37b抑制軟骨細(xì)胞NF-?B核轉(zhuǎn)移
        3.7 IL-37b抑制MAPK通路磷酸化表達
    4 討論
第三章 IL-37b在關(guān)節(jié)盤穿孔模型中對關(guān)節(jié)軟骨以及軟骨下骨的作用
    1 材料
        1.1 實驗對象
        1.2 主要實驗試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
    2 實驗方法
        2.1 關(guān)節(jié)盤穿孔模型的制備
        2.2 顳下頜關(guān)節(jié)標(biāo)本制備
        2.3 番紅固綠染色
        2.4 熒光定量PCR(qPCR)
        2.5 Micro-CT
        2.6 Trap染色檢測大鼠TMJ軟骨下骨破骨細(xì)胞的表達
        2.7 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 顳下頜關(guān)節(jié)建模模式圖
        3.2 表觀結(jié)果
        3.3 番紅固綠染色結(jié)果
        3.4 熒光定量PCR檢測結(jié)果
        3.5 免疫組化(IHC)染色結(jié)果
        3.6 MICRO-CT定量分析結(jié)果
        3.7 Trap染色結(jié)果
    4 討論
總結(jié)
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3963051