線粒體雖擁有自身的遺傳物質(zhì)及遺傳體系,但超過99%線粒體蛋白仍由核基因編碼,這些蛋白在細胞質(zhì)合成N端含有前導(dǎo)序列的前體蛋白,被線粒體外膜蛋白TOM系統(tǒng)識別并轉(zhuǎn)運,最終轉(zhuǎn)運至線粒體不同區(qū)域而發(fā)揮作用。重組蕎麥胰蛋白酶抑制劑(recombinant buckwheat trypsin inhibitor,rBTI)是一種Potato I型抑制劑,可以特異性靶向線粒體,與線粒體外膜蛋白Tom 20相互作用,引發(fā)線粒體功能障礙,進而引起線粒體自噬而發(fā)揮抗腫瘤作用。結(jié)構(gòu)分析,rBTI三維結(jié)構(gòu)中含有一個α-螺旋,具備線粒體蛋白前導(dǎo)序列相似性質(zhì)。rBTI中這一α-螺旋與Tom 20的相互作用與該螺旋的疏水性質(zhì)是否相關(guān),以及該螺旋的氨基酸疏水性質(zhì)的改變對rBTI發(fā)揮抗腫瘤活性的影響還未知。因此本文將通過探究rBTI靶向線粒體的識別機制,即α螺旋區(qū)與Tom20的相互作用,進一步明確該螺旋的氨基酸組成對rBTI的抗腫瘤效應(yīng)的影響。主要通過以下內(nèi)容展開:1.采用原核重組方式表達并純化了Tom20胞內(nèi)區(qū)。Tom20是一種在線粒體蛋白輸入的起始受體膜蛋白,它可以識別具有不同氨基酸序列的前導(dǎo)序列。Tom20包含胞...

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 線粒體功能
        1.1.1 線粒體功能障礙
        1.1.2 線粒體功能障礙相關(guān)疾病
        1.1.3 線粒體靶向分子研究
    1.2 線粒體蛋白轉(zhuǎn)運
        1.2.1 線粒體蛋白轉(zhuǎn)運特點及相關(guān)轉(zhuǎn)運因子
        1.2.2 Tom20 的結(jié)構(gòu)與功能
    1.3 研究目的與意義
第二章 Tom20 胞內(nèi)區(qū)的原核表達與純化
    2.1 引言
    2.2 實驗材料、試劑及儀器
        2.2.1 實驗材料、試劑
        2.2.2 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 rTom20 的構(gòu)建
        2.3.2 rTom20 的原核表達與純化
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 rTom20 目的基因成功擴增
        2.4.2 pGEX-4T-1-Tom20 陽性克隆鑒定
        2.4.3 rTom20 的表達與純化
    2.5 討論
第三章 rBTI螺旋區(qū)多肽與rTom20 的相互作用
    3.1 引言
    3.2 實驗材料、試劑及儀器
        3.2.1 實驗材料、試劑
        3.2.2 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 rBTI螺旋區(qū)多肽的合成
        3.3.2 多肽與rTom20 相互作用檢測——紫外分光光度法
        3.3.3 多肽與rTom20 相互作用檢測——等溫滴定量熱法
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 rBTI螺旋區(qū)疏水性質(zhì)分析
        3.4.2 紫外分光光度計檢測多肽與rTom20 相互作用并計算結(jié)合常數(shù)
        3.4.3 等溫滴定量熱法檢測多肽與rTom20 相互作用并計算結(jié)合常數(shù)
    3.5 討論
第四章 rBTI及其突變體對HepG2 細胞增殖的影響
    4.1 引言
    4.2 實驗材料、試劑及儀器
        4.2.1 實驗材料、試劑
        4.2.2 實驗儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 構(gòu)建rBTI的突變體
        4.3.2 全面表達純化rBTI及其突變體
        4.3.3 MTT檢測多肽、rBTI及其突變體對HepG2 細胞活性的影響
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 成功構(gòu)建rBTI及其突變體并表達純化
        4.4.2 MTT檢測多肽、rBTI及其突變體蛋白對HepG2 的細胞活性
    4.5 討論
小結(jié)與展望
參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介及聯(lián)系方式



本文編號：3926062