基因編輯技術因其可以直接對基因組進行改造而被廣泛應用于單基因遺傳病治療的研究中。β-地中海貧血是由β-珠蛋白基因突變造成的,通過提高紅細胞內的γ-珠蛋白的表達可以減輕β-地中海貧血患者的癥狀。有研究表明,利用慢病毒載體遞送CRISPR/Cas9系統(tǒng)靶向CD34⁺造血干/祖細胞中γ-珠蛋白基因的啟動子區(qū),模擬遺傳性胎兒血紅蛋白持續(xù)存在癥病人中天然存在的γ-珠蛋白基因啟動子區(qū)-102到-114之間13bp的缺失,可以破壞轉錄抑制因子BCL11A在γ-珠蛋白基因啟動子區(qū)的結合位點,進而提高細胞內γ-珠蛋白的表達水平,但是這種方法并不利于臨床轉化,一是因為慢病毒載體在人的造血干細胞中的轉導效率低,二是因為慢病毒載體的隨機整合會有潛在致瘤風險,而且Cas9蛋白的持續(xù)表達可能增加脫靶風險。為了能夠創(chuàng)建直接用于臨床的β-地中海貧血基因編輯基因治療的技術平臺,在本課題中,我們探究了Cas9蛋白在人的CD34⁺造血干/祖細胞中高效編輯的條件。我們發(fā)現(xiàn),通過合成針對γ-珠蛋白基因啟動子區(qū)-102到-114位點的sgRNAs,并對其兩端進行了化學修飾,利用電穿孔將...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1基因治療的兩種策略（源自參考文獻10）

華東師范大學2020屆碩士學位論文2應并導致死亡7，引起人們對病毒載體免疫原性的重視。2003年，Salima團隊的報告指出10名X-連鎖重癥聯(lián)合免疫缺陷癥的兒童在接受基因治療3年后，其中2名兒童因γ-逆轉錄載體隨機插入原癌基因而罹患T細胞白血病8，這是最早的關于病毒載體的隨機整....

圖2核酸酶技術工作原理（源自參考文獻18）

華東師范大學2020屆碩士學位論文4基因治療研究的熱點。2基因編輯技術2.1基因編輯技術的發(fā)展我們把基于核酸酶發(fā)展而來的基因治療稱為新興的基因治療，其特點是直接操縱基因組DNA以達到治療疾病的目的。它的作用原理是利用核酸酶使DNA在特定位置產生雙鏈斷裂（doublestrandb....

圖3CRISPR/Cas系統(tǒng)的分類（源自參考文獻33,34）

華東師范大學2020屆碩士學位論文6血友并杜氏肌營養(yǎng)不良和酪氨酸尿癥等的基因治療中顯示出巨大的應用前景。2016年，基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)開發(fā)的堿基編輯技術問世，可以在沒有模板、不產生雙鏈斷裂的情況下，對基因組上的單個堿基進行替換，大大拓寬了基因編輯的應用范圍32。2.2....

圖4第一類CRISPR的作用原理（源自參考文獻36）

華東師范大學2020屆碩士學位論文7在I型系統(tǒng)Cas6和crRNA結合組成一個支架（圖4），再與其他Cas蛋白形成一個叫Cascade的復合物，Cascade識別DNA上的PAM，crRNA負責與DNA上的堿基配對，然后招募Cas3切割非靶向鏈。在III型系統(tǒng)中，crRNA充當一....

本文編號：3913495