發(fā)布時間：2017-05-22 18:36

  本文關(guān)鍵詞：葉酸修飾川芎嗪納米粒體內(nèi)外靶向特征及增強腫瘤轉(zhuǎn)移抑制作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:優(yōu)化葉酸殼聚糖川芎嗪納米粒(主動靶向納米粒,FA-CS-LZ-NPs)的制備工藝,考察其體內(nèi)外靶向特征,探討其抑制腫瘤轉(zhuǎn)移作用與機制。方法:1.主動靶向納米粒制備和處方、工藝優(yōu)化。離子交聯(lián)法制備主動靶向納米粒,選取葉酸殼聚糖(FA-CS)濃度、多聚磷酸鈉(TPP)濃度、p H值為主要影響因素,以包封率、載藥量、粒徑作為評價指標(biāo),采用Box-Behnken實驗設(shè)計對納米粒處方和工藝進行優(yōu)化。2.主動靶向納米粒體外靶向性考察。Western Blotting法檢測細(xì)胞葉酸受體表達水平,篩選細(xì)胞用于下一步試驗。MTT法檢測主動靶向納米粒的細(xì)胞毒性,確定給藥劑量。取Bel7402細(xì)胞(葉酸受體高表達)分別給予主動靶向納米粒(FA-CS-LZ-NPs)、被動納米粒(CS-LZ-NPs)和川芎嗪溶液(LZ),另取L-02(葉酸受體低表達)給予FA-CS-LZ-NPs,HPLC法檢測不同時間內(nèi)細(xì)胞對LZ的攝取。FA-CS-LZ-NPs作用于三種葉酸受體表達水平不同的細(xì)胞,4h后,HPLC法檢測各組細(xì)胞內(nèi)LZ的濃度。3.主動靶向納米粒體內(nèi)靶向性考察。異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記FA-CS,紅外光譜、核磁共振光譜分析產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)表征。熒光素標(biāo)記主動納米粒(FITC-FA-CS-NPs)和被動納米粒(FITC-CS-NPs),H22荷瘤小鼠尾靜脈分別注射上述兩種標(biāo)記藥物和FITC溶液后,于30min后活體熒光成像,隨即小鼠離體組織熒光成像。另取,H22荷瘤小鼠分別尾靜脈給予FA-CS-LZ-NPs、CS-LZ-NPs和LZ,HPLC法分析在不同時間點小鼠血漿與組織內(nèi)川芎嗪藥物濃度。4.主動靶向納米粒抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的研究。建立小鼠H22腫瘤轉(zhuǎn)移模型,隨機分為8組,分別給予:FA-CS-LZ-NPs(40mg/kg,高劑量)、(20mg/kg,中劑量)、(10mg/kg,低劑量),CS-LZ-NPs(20mg/kg),LZ(20mg/kg),主動空納米粒(FA-CS-NPs),5-FU(20mg/kg),生理鹽水(0.2m L)。連續(xù)給藥21天,比較各組小鼠體重變化,免疫組織化學(xué)檢測移植瘤中MMP-9、VEGF的蛋白表達水平,比較各組小鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。結(jié)果:1.按照優(yōu)化處方(1mg/m L FA-CS,0.89mg/m L TPP,p H4.61)制備FA-CS-LZ-NPs,該納米粒的包封率為(36.72±0.65)%,載藥量為(9.44±0.17)%,粒徑為141.1±0.6 nm,分散度(PDI)為0.219±0.011,Zeta電位為20.8±1.4 mv,可知實驗觀察值和模型預(yù)測值都比較接近,模型預(yù)測性良好。2.Western Boltting測得Bel7402、L-02細(xì)胞葉酸表達水平具有顯著性差異,可用于后續(xù)試驗。主動靶向納米粒對Bel7402、L-02細(xì)胞的無毒劑量是LZ 47.5μg·m L-1。Bel7402和L-02細(xì)胞給藥4h后,胞內(nèi)川芎嗪濃度達到飽和,而且FA-CS-LZ-NPs組Bel7402細(xì)胞內(nèi)LZ藥物濃度顯著高于CS-LZ-NPs組、LZ溶液組以及L-02細(xì)胞FA-CS-LZ-NPs組。說明葉酸修飾的納米粒促進了Bel7402對藥物的攝取。Hela、Bel7402、L-02三種細(xì)胞分別給予FA-CS-LZ-NPs處理,經(jīng)HPLC檢測細(xì)胞內(nèi)川芎嗪濃度由高到低依次為HelaBel7402L-02,證明細(xì)胞內(nèi)藥物攝取量與細(xì)胞葉酸受體表達水平成正相關(guān)。3.FITC-FA-CS與FA-CS相比,紅外圖譜中,在1575cm-1處彎曲振動增強,是殼聚糖的氨基與FITC的異硫氰根反應(yīng)的結(jié)果;核磁氫譜圖中,δ6.715,δ6.949ppm處新增兩個位移值,為FITC芳烴質(zhì)子峰,證明FITC偶聯(lián)到葉酸殼聚糖骨架上�；铙w成像觀察發(fā)現(xiàn),與注射FITC-CS-NPs和FITC溶液相比,注射FITC-FA-CS-NPs荷瘤小鼠腫瘤部位的熒光強度要強。離體臟器成像和體內(nèi)LZ藥物分布結(jié)果顯示,主動納米粒組在腫瘤組織的分布顯著高于被動納米粒組、溶液組。經(jīng)過葉酸修飾的納米粒主要集中在腫瘤、肝、腎部位,而未經(jīng)葉酸修飾的納米粒主要集中在肝、肺部位,溶液組中組織分布較少。4.5-FU組小鼠體重呈下降趨勢,其他給藥組均有不同程度增長,表明川芎嗪納米粒毒副作用小。MMP-9、VEGF蛋白表達水平呈劑量依賴性下調(diào),且主動靶向納米粒抑制效果較好。FA-CS-LZ-NPs與CS-LZ-NPs、LZ溶液相比,抑制肺部轉(zhuǎn)移瘤效果更好,呈劑量依賴性。結(jié)論:本實驗優(yōu)化制備出的葉酸殼聚糖川芎嗪納米粒粒徑較小,包封率和載藥量較高。體外實驗表明此制劑對葉酸受體高表達的Bel7402細(xì)胞具有靶向性。體內(nèi)實驗表明該制劑對葉酸受體高表達的H22腫瘤模型靶向效果良好。與被動納米粒組、川芎嗪溶液組相比較,主動靶向納米粒對H22轉(zhuǎn)移模型具有更好的抑制腫瘤轉(zhuǎn)移作用,這一作用可能是通過下調(diào)MMP-9、VEGF表達水平實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：納米粒 川芎嗪 制備優(yōu)化 靶向性 抑制轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R943
【目錄】：

• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-16
• 材料和方法16-22
• 一、實驗材料16-17
• 1 儀器16
• 2 藥品與試劑16-17
• 3 細(xì)胞株與動物17
• 二、方法17-22
• 1 主動靶向納米粒制備和處方工藝優(yōu)化17-19
• 1.1 主動靶向納米粒的制備17
• 1.2 包封率和載藥量的測定17-18
• 1.3 粒徑、Zeta電位的檢測18
• 1.4 效應(yīng)面法優(yōu)化處方設(shè)計18-19
• 2 主動靶向納米粒靶向性考察19-21
• 2.1 體外細(xì)胞實驗19-20
• 2.2 動物實驗20-21
• 3 主動靶向納米粒抑制腫瘤轉(zhuǎn)移作用的研究21-22
• 3.1 建立腫瘤轉(zhuǎn)移模型21
• 3.2 分組給藥及處理21
• 3.3 免疫組織化學(xué)21-22
• 4 統(tǒng)計學(xué)處理22
• 結(jié)果22-39
• 1. 主動靶向納米粒制備和處方工藝優(yōu)化22-28
• 1.1 HPLC方法專屬性及川芎嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線22-23
• 1.2 精密度和回收率23
• 1.3 Box-Behnken實驗設(shè)計優(yōu)化結(jié)果23-28
• 1.4 FA-CS-LZ-NPs粒徑分析及Zeta電位28
• 2. 主動靶向納米粒體外靶向性考察28-31
• 2.1 細(xì)胞葉酸受體表達情況28-29
• 2.2 主動靶向納米粒的細(xì)胞毒性29-30
• 2.3 HPLC檢測細(xì)胞內(nèi)川芎嗪的攝取30
• 2.4 主動靶向納米粒的葉酸受體依賴靶向性30-31
• 3. 主動靶向納米粒的體內(nèi)靶向性考察31-36
• 3.1 FITC-FA-CS的結(jié)構(gòu)表征31-32
• 3.2 FITC-FA-CS-Nps活體成像32-33
• 3.3 主動靶向納米粒體內(nèi)分布33-36
• 4. 川芎嗪主動靶向納米粒抑制腫瘤轉(zhuǎn)移作用的研究36-39
• 4.1 FA-CS-LZ-NPs對H22轉(zhuǎn)移模型體重的影響36
• 4.2 腫瘤原發(fā)灶MMP和VEGF表達變化36-38
• 4.3 對肺部轉(zhuǎn)移瘤的影響38-39
• 討論39-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-46
• 綜述46-56
• 參考文獻52-56
• 致謝56-57

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1 忻志鳴;葉根深;;納米粒制劑研究進展[J];中國藥業(yè);2010年16期

2 潘研,鄭俊民,唐星,郝勁松,周蕾;可生物降解聚合物納米粒的研究進展[J];中國藥學(xué)雜志;2002年12期

3 胡俊,劉玉玲;載藥納米粒的研究進展[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;2004年05期

4 方超,施斌,裴元英;重組人腫瘤壞死因子隱形納米粒的制備及其穩(wěn)定性[J];藥學(xué)學(xué)報;2004年11期

5 沈成蓉;張陽德;趙勁風(fēng);;長循環(huán)納米粒的研究進展[J];岳陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報;2008年03期

6 謝向陽;劉宏;陳鷹;梅興國;;病毒納米粒在藥物遞送中的應(yīng)用[J];國際藥學(xué)研究雜志;2013年01期

7 王杰,張強;長循環(huán)納米粒[J];國外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊;1999年06期

8 陳大兵,楊天智,呂萬良,張強;紫杉醇長循環(huán)固態(tài)脂質(zhì)納米粒的制備和體內(nèi)外研究[J];藥學(xué)學(xué)報;2002年01期

9 梅之南,楊祥良,徐輝碧;生物降解聚合物長循環(huán)納米粒[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2002年07期

10 陳大兵,呂萬良,楊天智,李靜,張強;紫杉醇表面修飾脂質(zhì)納米粒的制備和性質(zhì)[J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2002年01期

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1 王琪;叢龍波;黃雅潔;岳鵬飛;袁海龍;;納米粒載藥系統(tǒng)研究進展[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會中成藥學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

2 高靜;張瑋;儲藏;王曉宇;張敏;武鑫;高申;;基于微針遞送的PLGA納米粒在人皮膚中的分布及其影響因素研究[A];第十一屆全國青年藥學(xué)工作者最新科研成果交流會論文集[C];2012年

3 陳潔;劉青鋒;馮程程;沈燁虹;邵夏炎;田志強;周佳辰;張奇志;;馬鈴薯凝集素修飾PLGA納米粒的制備及經(jīng)鼻入腦靶向性研究[A];2010年中國藥學(xué)大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

4 朱鉉;李福男;蘇美琴;;巰基殼聚糖的合成及其眼用納米粒的研究[A];第十一屆全國青年藥學(xué)工作者最新科研成果交流會論文集[C];2012年

5 高靜;張瑋;高申;;微針陣列技術(shù)對納米粒經(jīng)皮給藥的促透作用研究[A];2010年中國藥學(xué)大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

6 高小玲;武炳賢;陶煒興;陳鈞;蔣新國;;凝集素修飾納米粒介導(dǎo)多肽藥物經(jīng)鼻入腦的靶向性研究[A];2006第六屆中國藥學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

7 黃瀟;;眼用氟尿嘧啶納米粒制劑的制備[A];第六屆全國中醫(yī)中西醫(yī)結(jié)合眼科學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2007年

8 胡豫;;組織因子靶向性蛋白納米粒的制備及其在抗血栓治療中的應(yīng)用[A];第十二次全國臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議會議論文集[C];2010年

9 李學(xué)明;徐元龍;陳國廣;韋萍;;15-氟尿嘧啶納米粒的制備及其在大鼠的藥物動力學(xué)[A];2006第六屆中國藥學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

10 黃繼云;廖美華;陶蓉蓉;杜永忠;樓宜嘉;韓峰;;脂質(zhì)納米粒遞藥系統(tǒng)對腦內(nèi)自噬-溶酶體信號的影響及機制[A];中國毒理學(xué)會第六屆全國毒理學(xué)大會論文摘要[C];2013年

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1 劉霞;液體中的納米粒子可用于存儲信息[N];科技日報;2014年

2 王小龍;納米粒子可經(jīng)水果等食物進入人體[N];科技日報;2013年

3 解放軍總醫(yī)院病理科 紀(jì)小龍;納米技術(shù)在開拓新藥中應(yīng)用前景[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2001年

4 記者 白毅;新型藥物納米輸送系統(tǒng)研究取得多項創(chuàng)新[N];中國醫(yī)藥報;2010年

5 記者 華凌;磁電納米粒子可傳遞藥物直入大腦[N];科技日報;2013年

6 平其能;納米藥物制劑的現(xiàn)狀與未來[N];中國醫(yī)藥報;2002年

7 ;上海中藥研究所制備出氟苷新型給藥系統(tǒng)[N];中國醫(yī)藥報;2002年

8 記者　白毅;復(fù)合物納米�？勺鳛橐葝u素口服給藥新載體[N];中國醫(yī)藥報;2006年

9 記者 毛黎;放射性納米粒子可定向附著殺滅癌細(xì)胞[N];科技日報;2013年

10 甘勇 林艷瓊 陳慶華;微粒系統(tǒng)用于眼用制劑成新趨勢[N];中國醫(yī)藥報;2006年

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1 陳紅麗;多糖修飾的PLGA納米粒作為抗腫瘤藥物載體的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

2 韋偉;新型功能性油脂的生物催化合成，表征與應(yīng)用研究[D];浙江大學(xué);2015年

3 武敬亮;載阿霉素組氨酸修飾透明質(zhì)酸納米粒的制備及抗腫瘤研究[D];中國海洋大學(xué);2013年

4 趙小智;包裹芘的高分子納米粒的制備、表征以及體內(nèi)外行為的初步研究[D];華中科技大學(xué);2009年

5 張靜;油酰殼聚糖納米粒作為抗腫瘤藥物載體的研究[D];中國海洋大學(xué);2010年

6 蔣新宇;抗癌藥物納米粒載體系統(tǒng)的制備及其性能研究[D];中南大學(xué);2005年

7 袁弘;固體脂質(zhì)納米�？诜幬镙d體經(jīng)胃腸道轉(zhuǎn)運的研究[D];浙江大學(xué);2008年

8 陳潔;馬鈴薯凝集素修飾聚乙二醇—聚（乳酸—羥基乙酸）共聚物納米粒經(jīng)鼻入腦的遞藥特性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

9 孫彥華;基于金納米粒的生物分子化學(xué)發(fā)光分析新技術(shù)[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

10 劉玉梅;長春堿納米粒的制備及其抗腫瘤作用的實驗研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊建藤;羅哌卡因乳酸羥基乙酸共聚物納米粒的制備及硬膜外釋藥特性研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 劉峻;新型骨靶向納米給藥系統(tǒng)的研究[D];浙江大學(xué);2015年

3 王歡;介孔碳球納米粒用于阿霉素傳遞系統(tǒng)的研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

4 胡慧中;甘草次酸修飾的PEI-PLGA的合成及其作為納米粒載體的研究[D];廣東藥學(xué)院;2015年

5 楊濤;復(fù)合診療納米粒用于多模態(tài)成像和光熱治療的研究[D];蘇州大學(xué);2015年

6 郭苗;載Cypate多功能納米粒在腫瘤多模式治療中的應(yīng)用研究[D];蘇州大學(xué);2015年

7 孫川;靶向乳腺癌細(xì)胞的他莫昔芬納米粒的制備及體外初步評價[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

8 薛君;AFP單抗修飾的載DCN PLGA納米粒對HepG2細(xì)胞遷移和侵襲影響的實驗研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

9 劉婷先;基于結(jié)合型寡聚核苷酸構(gòu)建藥物與基因共載納米粒的研究[D];山東大學(xué);2015年

10 黃麗;Cypate/DOX-SiO_2納米粒用于腫瘤診療的初步研究[D];蘇州大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：葉酸修飾川芎嗪納米粒體內(nèi)外靶向特征及增強腫瘤轉(zhuǎn)移抑制作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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