目的:由于腫瘤細胞增殖過快普遍存在缺氧,而缺氧誘導的表觀遺傳改變可能是腫瘤細胞適應缺氧微環(huán)境的關鍵,是目前研究白血病重要發(fā)病機制之一。通過建立體外缺氧模型,研究缺氧對急性髓系白血病KG-1細胞增殖代謝影響、HIF-1α表達變化以及對基因組甲基化的影響,將腫瘤細胞缺氧代謝與表觀遺傳學聯(lián)系起來,為急性白血病等血液系統(tǒng)惡性腫瘤的診治研究提供了新的思路與實驗依據(jù)。方法:1.以不同氧濃度(21%、3%、1%)處理急性髓系白血病細胞系KG-1細胞24、48、72小時,以常氧為對照組。用CCK-8法檢測細胞活性,LDH試劑盒測定細胞培養(yǎng)基中LDH,以了解缺氧對KG-1細胞增殖代謝的影響。2.采用熒光實時定量PCR方法來檢測HIF-1αmRNA表達,Western blot方法檢測HIF-1α蛋白表達以了解缺氧對KG-1細胞中HIF-1α表達的影響。3.采用5-羥甲基化胞嘧啶(5-hmC)及5-甲基化胞嘧啶(5-mC)檢測試劑盒檢測5-hmC及5-mC含量,以了解缺氧及HIF-1α對KG-1細胞基因甲基化的影響。4.通過慢病毒感染HIF-1α真核表達質粒,使細胞過表達HIF-1α。實驗分為慢病毒載體G...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
第一章 前言
    1.1 缺氧微環(huán)境與白血病
    1.2 表觀遺傳學異常是白血病發(fā)病的重要機制
    1.3 缺氧在表觀遺傳改變中起著關鍵作用
第二章 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 研究對象
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要引物
    2.2 方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 CCK-8法檢測細胞活性
        2.2.3 細胞培養(yǎng)基中LDH的測定
        2.2.4 細胞總RNA提取
        2.2.5 逆轉錄cDNA的合成
        2.2.6 實時熒光定量PCR
        2.2.7 免疫印跡法(Western blot)
        2.2.8 慢病毒感染HIF-1α過表達
        2.2.9 化合物YC-1 抑制HIF-1α表達
        2.2.10 5-hmC含量測定
        2.2.11 基因組DNA中5-mC含量測定
        2.2.12 甲基化特異性PCR法(MSP)
        2.2.13 統(tǒng)計學方法
第三章 實驗結果
    3.1 缺氧對急性髓系白血病KG-1細胞增殖及代謝的影響
        3.1.1 CCK-8方法檢測細胞增殖活性結果
        3.1.2 細胞培養(yǎng)基中LDH測定結果
    3.2 缺氧對KG-1 細胞中HIF-1α表達的影響
        3.2.1 HIF-1α mRNA表達水平
        3.2.2 HIF-1α蛋白表達水平
    3.3 缺氧及HIF-1α對KG-1 細胞基因甲基化態(tài)勢的影響
        3.3.1 缺氧對KG-1細胞基因組甲基化的影響
        3.3.2 HIF-1α過表達對KG-1 細胞基因組甲基化及P15 基因甲基化的影響
        3.3.3 HIF-1α抑制對KG-1 細胞基因組甲基化及P15 基因甲基化的影響
第四章 討論
    4.1 缺氧對KG-1細胞增殖及代謝的影響
    4.2 缺氧對KG-1 細胞HIF-1α表達的影響
    4.3 缺氧對KG-1細胞甲基化的影響
第五章 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄一
附錄二
致謝



本文編號：3855175