嵌合抗原受體 T 細胞治療(Chimeric antigen receptor T cell therapy,CAR-T therapy)是一種新興的腫瘤免疫治療,該療法是通過對患者體內(nèi)的T細胞進行改造,在T細胞膜上表達一種腫瘤特異性的嵌合抗原受體(Chimeric antigen receptors,CARs),使其能夠通過腫瘤特異性的、非MHC分子依賴性的途徑激活,從而發(fā)揮抗腫瘤作用。CAR是一種跨膜受體,主要由胞外識別結(jié)構(gòu)域、跨膜區(qū)和胞內(nèi)激活結(jié)構(gòu)域組成,其胞外識別結(jié)構(gòu)域通常為腫瘤細胞特征性表面分子的單鏈抗體(single^chain variable fragment,scFv),胞內(nèi)激活結(jié)構(gòu)域為T細胞受體(T cell receptor,TCR)的CD3zeta片段,當CAR胞外的單鏈抗體與腫瘤細胞識別、結(jié)合,即可激活CD3zeta,進而直接激活T細胞。至今已發(fā)展出三代CAR,其中第二代CAR是研究最多、最具應用前景的CAR,第二代CAR分子在跨膜區(qū)和激活結(jié)構(gòu)域之間還偶聯(lián)了一個T細胞共刺激分子,如CD28、4-1BB等,在共刺激分子的協(xié)同作用下,CAR-T細...

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 嵌合抗原受體T細胞
    2 細胞因子IL-18和IL-21
    3 慢病毒載體表達系統(tǒng)
    4 本研究的目的和意義
第二章 共表達細胞因子IL-18或IL-21的嵌合抗原受體T細胞(CAR-T)的構(gòu)建及其功能研究
    引言
    一、材料
        1 細胞
        2 菌株及質(zhì)粒
        3 主要試劑
        4 實驗器材
        5 實驗常用試劑配制
    二、方法
        1 人全長細胞因子IL-18和IL-21序列的體外克隆
        2 共表達IL-18或IL-21的CAR分子的重組慢病毒表達載體的構(gòu)建
        3 慢病毒包裝
        4 JurCAR-T細胞制備
        5 JurCAR-T細胞功能檢測
        6 細胞殺傷實驗
        7 人臍帶血淋巴細胞CAR-T細胞制備
    三、結(jié)果
        1 αCD19scFv、4-1BB-CD3zeta的克隆及拼接
        2 IL-18、IL-21、IRES序列的克隆及拼接
        3 慢病毒V-CAR19、V-CAR19-IL-18、V-CAR19-IL-21的制備
        4 JurCAR-T (JurCAR19、JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21)細胞的制備
        5 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21細胞IFN-γ表達情況檢測
        6 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21細胞體外增殖能力檢測
        7 JurCARI9-IL-18、JurCAR19-IL-21細胞體外殺傷功能檢測
        8 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21細胞活化水平檢測
        9 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21細胞激活后體外增殖能力檢測
        10 CAR-T細胞制備
        11 CAR19-IL18-T、CAR19-IL21-T細胞體外殺傷功能檢測
        12 CAR19-IL18-T、CAR19-IL21-T細胞活化水平檢測
    四、討論
第三章 結(jié)論
附錄
參考文獻
致謝



本文編號：3792656