目的:腸道黏膜屏障損傷是炎癥后腸易激綜合征(PI-IBS)內(nèi)臟痛敏的關(guān)鍵原因,其具體發(fā)生機(jī)制尚不明確,也缺乏特異性的治療方法。我們前期研究發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素(Oridonin,ORI)可以改善PI-IBS大鼠腸道黏膜屏障損傷并減輕內(nèi)臟痛敏,其具體分子機(jī)制有待深入研究。近期研究顯示PXR/NF-κB負(fù)反饋環(huán)可調(diào)節(jié)腸道黏膜屏障功能,但冬凌草甲素是否通過該環(huán)路調(diào)控腸道屏障功能減輕內(nèi)臟痛敏尚不明確。本項目擬采用PI-IBS大鼠模型,考察冬凌草甲素減輕PI-IBS內(nèi)臟痛敏的療效;以PXR激動/拮抗PI-IBS大鼠模型結(jié)合腸道屏障功能評價指標(biāo),探究冬凌草甲素通過激動PXR改善腸道粘膜屏障功能的作用;在過表達(dá)/沉默PXR的細(xì)胞中,利用分子生物學(xué)手段,明確冬凌草甲素通過PXR/NF-κB負(fù)反饋環(huán)調(diào)節(jié)Caco-2細(xì)胞屏障功能的分子機(jī)制,研究結(jié)果對明確冬凌草甲素治療PI-IBS的分子機(jī)制以及進(jìn)一步認(rèn)識PI-IBS的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。方法:采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)制備PI-IBS大鼠模型,以病變活動指數(shù)(DAI),腹部收縮反射實(shí)驗(AWR),結(jié)腸長度及結(jié)腸組織病理學(xué)變化為指標(biāo),明確ORI對P...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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前言
第一部分 冬凌草甲素對PI-IBS腸道屏障功能的干預(yù)作用
    1 體內(nèi)探究冬凌草甲素對PI-IBS大鼠腸道屏障功能的保護(hù)作用
        1.1 材料與方法
            1.1.1 材料
            1.1.2 方法
        1.2 結(jié)果
            1.2.1 PI-IBS大鼠模型評價
            1.2.2 冬凌草甲素對PI-IBS大鼠藥效學(xué)探究
            1.2.3 冬凌草甲素對PI-IBS大鼠腸道通透性的影響
            1.2.4 冬凌草甲素對PI-IBS大鼠腸道屏障功能的影響
    2 體外探究冬凌草甲素對細(xì)胞屏障功能的干預(yù)作用
        2.1 材料與方法
            2.1.1 材料
            2.1.2 溶液的配制
            2.1.3 方法
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 不同濃度冬凌草甲素對Caco-2 的細(xì)胞活力檢測
            2.2.2 LPS誘導(dǎo)Caco-2 細(xì)胞屏障損傷模型
            2.2.3 冬凌草甲素對LPS致 Caco-2 細(xì)胞屏障損傷的保護(hù)作用
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 冬凌草甲素通過PXR/NF-κB信號通路改善PI-IBS的分子機(jī)制研究
    1 體內(nèi)探究冬凌草甲素對PI-IBS大鼠中PXR/NF-κB信號通路的影響
        1.1 材料與方法
            1.1.1 材料
            1.1.2 方法
        1.2 結(jié)果
            1.2.1 冬凌草甲素對PI-IBS大鼠結(jié)腸組織中PXR和 NF-κB基因表達(dá)量的影響.
            1.2.2 冬凌草甲素對PI-IBS大鼠結(jié)腸組織中PXR和 NF-κB蛋白表達(dá)水平的影響
            1.2.3 冬凌草甲素對PI-IBS大鼠結(jié)腸組織中PXR/NF-κB信號通路下游相關(guān)基因表達(dá)量的影響
            1.2.4 冬凌草甲素對PI-IBS大鼠結(jié)腸組織中PXR下游相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響
            1.2.5 冬凌草甲素對PXR潛在的激動作用
                (1)冬凌草甲素和PXR的分子對接分析
                (2)冬凌草甲素對正常大鼠結(jié)腸組織中 PXR 基因及蛋白表達(dá)水平的影響
    2 體外探究冬凌草甲素對Caco-2細(xì)胞炎癥模型中 PXR/NF-κB信號通路的影響
        2.1 材料與方法
            2.1.1 材料
            2.1.2 溶液的配制
            2.1.3 方法
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 冬凌草甲素對Caco-2 細(xì)胞屏障損傷模型中PXR和 NF-κB基因表達(dá)量的影    響
            2.2.2 冬凌草甲素對Caco-2 細(xì)胞屏障損傷模型中PXR/NF-κB信號通路下游相關(guān)基因表達(dá)量的影響
            2.2.3 細(xì)胞實(shí)驗驗證冬凌草甲素對PXR的激動作用
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷



本文編號：3780683