蛋白生物標志物的高靈敏檢測對揭示疾病發(fā)展病理過程、輔助疾病早期診斷具有重要價值。本課題擬整合固相界面上的靶標特異性識別和均相溶液中的指數(shù)轉(zhuǎn)錄擴增,設(shè)計了一種新穎、通用的高靈敏蛋白質(zhì)檢測新策略。本文以血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)為模型靶標,首先將靶標VEGF捕獲在預(yù)先包被了抗VEGF多克隆抗體的96孔板上,引入生物素標記的抗VEGF單克隆抗體以形成“三明治”免疫復(fù)合物,從而實現(xiàn)在固相界面上對靶蛋白的特異性識別。隨后,以鏈霉親和素(SA)作為“橋梁”在免疫復(fù)合物上結(jié)合生物素標記的DNA(bio-DNA)探針。最后,被錨定的bio-DNA作為觸發(fā)均相指數(shù)轉(zhuǎn)錄(HET)過程的啟動鏈,在均相恒溫條件下高效指數(shù)擴增產(chǎn)生大量單鏈RNA產(chǎn)物。通過上述反應(yīng)過程可將固相界面上的靶蛋白識別信息有效轉(zhuǎn)化為溶液中指數(shù)擴增的大量核酸信息用于熒光檢測。經(jīng)驗證,該方法在0.01-1000 pg/mL VEGF濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)了良好的線性相關(guān)性,檢測限可低至1 fg/mL,比傳統(tǒng)的ELISA方法檢測限低3個數(shù)量級。此外,該方法可直接檢測腫瘤細胞培養(yǎng)上清...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略詞名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
1 實驗部分
2 結(jié)果和討論
3 結(jié)論
參考文獻
文獻綜述:基于核酸的超靈敏蛋白質(zhì)檢測策略研究進展
    參考文獻
致謝
攻讀碩士期間撰寫的文章目錄



本文編號：3763784