蛋白生物標(biāo)志物的高靈敏檢測(cè)對(duì)揭示疾病發(fā)展病理過程、輔助疾病早期診斷具有重要價(jià)值。本課題擬整合固相界面上的靶標(biāo)特異性識(shí)別和均相溶液中的指數(shù)轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增,設(shè)計(jì)了一種新穎、通用的高靈敏蛋白質(zhì)檢測(cè)新策略。本文以血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)為模型靶標(biāo),首先將靶標(biāo)VEGF捕獲在預(yù)先包被了抗VEGF多克隆抗體的96孔板上,引入生物素標(biāo)記的抗VEGF單克隆抗體以形成“三明治”免疫復(fù)合物,從而實(shí)現(xiàn)在固相界面上對(duì)靶蛋白的特異性識(shí)別。隨后,以鏈霉親和素(SA)作為“橋梁”在免疫復(fù)合物上結(jié)合生物素標(biāo)記的DNA(bio-DNA)探針。最后,被錨定的bio-DNA作為觸發(fā)均相指數(shù)轉(zhuǎn)錄(HET)過程的啟動(dòng)鏈,在均相恒溫條件下高效指數(shù)擴(kuò)增產(chǎn)生大量單鏈RNA產(chǎn)物。通過上述反應(yīng)過程可將固相界面上的靶蛋白識(shí)別信息有效轉(zhuǎn)化為溶液中指數(shù)擴(kuò)增的大量核酸信息用于熒光檢測(cè)。經(jīng)驗(yàn)證,該方法在0.01-1000 pg/mL VEGF濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)了良好的線性相關(guān)性,檢測(cè)限可低至1 fg/mL,比傳統(tǒng)的ELISA方法檢測(cè)限低3個(gè)數(shù)量級(jí)。此外,該方法可直接檢測(cè)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略詞名詞對(duì)照
中文摘要
英文摘要
前言
1 實(shí)驗(yàn)部分
2 結(jié)果和討論
3 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述:基于核酸的超靈敏蛋白質(zhì)檢測(cè)策略研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3763784