背景:隨著世界人口老齡化,糖尿病患病人數(shù)逐年增加,根據(jù)2019年國際糖尿病聯(lián)盟數(shù)據(jù)顯示,全球20到79歲糖尿病患者已達(dá)4.63億,平均每11人中1人患有糖尿病,預(yù)計(jì)2045年將突破7億^[1]。長期體內(nèi)高血糖狀態(tài)將導(dǎo)致周圍血管組織病變,最終導(dǎo)致臟器的衰竭,如糖尿病腎病、糖尿病心臟病和糖尿病眼病等。而在糖尿病患者的死亡人數(shù)當(dāng)中,1/2患者死于心血管并發(fā)癥^[2]。糖尿病心血管疾病主要包括糖尿病心肌病和糖尿病動脈粥樣硬化。雖然長期高血糖導(dǎo)致心血管疾病發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,但大量研究證實(shí)心血管細(xì)胞內(nèi)炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡在糖尿病心血管疾病發(fā)病機(jī)制中占有重要地位,研究顯示,糖尿病患者心血管組織內(nèi)MAPK和NF-κB大量激活,而降低MAPK和NF-κB能改善炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡并降低心血管細(xì)胞損傷進(jìn)而改善心臟和血管功能^[3-4]。熱休克蛋白70羧基末端反應(yīng)蛋白（The carboxyl terminus of heat shock protein70 interacting protein:CHIP）是E3泛素連接酶的一個成員,首... 

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
    1.1 概要
第2章 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑與耗材
        2.1.3 主要儀器
    2.2 原代臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的提取、凍存與復(fù)蘇
        2.2.1 主要試劑的制備
        2.2.2 提取原代臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞
        2.2.3 原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的凍存
        2.2.4 原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的復(fù)蘇
    2.3 實(shí)驗(yàn)分組
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)前階段
        2.3.2 實(shí)驗(yàn)階段
    2.4 病毒轉(zhuǎn)染
    2.5 MTT檢測細(xì)胞存活率
        2.5.1 MTT溶液的配制
        2.5.2 實(shí)驗(yàn)步驟
    2.6 Tunel法檢測細(xì)胞凋亡率
        2.6.1 按照下表配制Tunel檢測液,備用。
        2.6.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        2.6.3 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
    2.7 ELISA檢測ET-1 含量
        2.7.1 標(biāo)準(zhǔn)品梯度配置表
        2.7.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        2.7.3 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
    2.8 NO檢測
        2.8.1 試劑的準(zhǔn)備
        2.8.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        2.8.3 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
    2.9 SOD檢測
        2.9.1 試劑的準(zhǔn)備
        2.9.2 細(xì)胞總SOD的提取
        2.9.3 實(shí)驗(yàn)步驟
        2.9.4 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
    2.10 氧自由基檢測
        2.10.1 試劑的準(zhǔn)備
        2.10.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        2.10.3 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
    2.11 qRT-PCR檢測炎癥因子mRNA表達(dá)
        2.11.1 總RNA提取
        2.11.2 總RNA純度檢測
        2.11.3 逆轉(zhuǎn)錄合成c DNA
        2.11.4 實(shí)時熒光定量PCR
        2.11.5 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
    2.12 Western blot
        2.12.1 試劑的準(zhǔn)備
        2.12.2 總蛋白質(zhì)提取
        2.12.3 BCA檢測蛋白質(zhì)濃度
        2.12.4 蛋白印跡過程
        2.12.5 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
    2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 慢病毒轉(zhuǎn)染臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)果
    3.2 下調(diào)CHIP表達(dá)加重高糖介導(dǎo)的臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞死亡率
    3.3 下調(diào)CHIP表達(dá)加重高糖介導(dǎo)的臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率
    3.4 下調(diào)CHIP表達(dá)加重高糖培養(yǎng)的臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞ET-1分泌并下調(diào)NO含量
    3.5 下調(diào)CHIP表達(dá)加重高糖培養(yǎng)的臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激水平
    3.6 下調(diào)CHIP表達(dá)加重高糖培養(yǎng)的臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥因子表達(dá)
    3.7 下調(diào)CHIP表達(dá)促進(jìn)高糖培養(yǎng)的臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞MAPK和 NF-κB磷酸化
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[9]吸入一氧化氮對兔的肺功能和血小板凝聚功能的影響[J]. 謝桂芬,高楓,孫波 ,吳玥 ,邵肖梅,樊紹曾,羅伯特·林德瓦爾.  上海醫(yī)學(xué). 1999(04)
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博士論文
[1]CHIP在骨發(fā)生及肝癌中的作用[D]. 李珊.清華大學(xué) 2014

碩士論文
[1]H2S通過抑制p38 MAPK/壞死性凋亡通路保護(hù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞對抗高血糖引起的損傷及炎癥[D]. 林佳瓊.南方醫(yī)科大學(xué) 2017
[2]JAK-STAT/NF-κB通路介導(dǎo)高糖引起的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的損傷與炎癥反應(yīng)[D]. 廖靜秋.南方醫(yī)科大學(xué) 2016



本文編號：3703289