目的:通過(guò)生物信息學(xué)技術(shù)分析腸道病毒D68型（EV-D68）的衣殼蛋白VP1的特性,并篩選出4個(gè)VP1蛋白最可能的B細(xì)胞表位,合成肽段,構(gòu)建EV-D68多肽疫苗。通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)誘導(dǎo)表達(dá)重組VP1蛋白,運(yùn)用鎳離子金屬鰲合親和層析的方法純化目的蛋白,構(gòu)建病毒亞單位疫苗。將以上兩種疫苗免疫小鼠,檢測(cè)特異性抗體的產(chǎn)生和中和抗體的作用,比較兩種疫苗的免疫保護(hù)效果。方法:應(yīng)用Bioedit、ExPASy、ProtParam等多種生物信息學(xué)工具,對(duì)EV-D68 VP1蛋白的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)功能和B細(xì)胞表位進(jìn)行預(yù)測(cè),并對(duì)B細(xì)胞表位肽段進(jìn)行篩選,合成篩選出的肽段并偶聯(lián)KLH蛋白,PBS溶解后與等量氫氧化鋁佐劑混合,制備成多肽疫苗。應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增EV-D68的VP1基因,并克隆到原核表達(dá)載體pET28a（+）上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a（+）-VP1。重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切和測(cè)序鑒定后,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)蛋白。表達(dá)的目的蛋白用鎳離子金屬鰲合親和層析的方法純化,濃縮后的蛋白溶液與等量氫氧化鋁佐劑混合,制備成亞單位疫苗。將多肽疫苗和亞單位疫苗分別腹腔注射免疫小鼠,檢測(cè)血清中抗體的... 

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略詞名詞對(duì)照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 EV-D68 VP1 蛋白的生物信息學(xué)分析和B細(xì)胞表位預(yù)測(cè)
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 VP1理化性質(zhì)預(yù)測(cè)
        2.2 VP1結(jié)構(gòu)功能預(yù)測(cè)
        2.3 B細(xì)胞表位
    3 討論
第二部分 VP1蛋白的表達(dá)和純化
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 目的基因VP1的擴(kuò)增
        2.2 重組質(zhì)粒pET28a(+)-VP1 的雙酶切鑒定
        2.3 重組質(zhì)粒pET28a(+)-VP1 的測(cè)序結(jié)果
        2.4 目的蛋白的表達(dá)純化
        2.5 純化產(chǎn)物的WB鑒定
    3 討論
第三部分 亞單位疫苗和多肽疫苗的保護(hù)性研究
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 WB檢測(cè)EV-D68特異性抗體的產(chǎn)生
        2.2 ELISA檢測(cè)抗體效價(jià)
        2.3 微量中和試驗(yàn)
    3 討論
全文總結(jié)
文獻(xiàn)綜述
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人腸道病毒71型抗原表位的研究進(jìn)展[J]. 祝苗,張?zhí)矸?高柳鶯,董長(zhǎng)征.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2017(09)
[2]結(jié)核潛伏感染蛋白R(shí)v2657c T細(xì)胞和B細(xì)胞表位的預(yù)測(cè)與分析[J]. 楊丹,白雪娟,陽(yáng)幼榮,林明貴,吳雪瓊.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2017(01)
[3]腸道病毒71型六安地區(qū)分離株VP1基因的生物信息學(xué)分析及B細(xì)胞表位預(yù)測(cè)[J]. 俞海洋,陳偉,倪德群,常宏偉,王林定,湯仁樹(shù),陳靈芝,丁曉娟,陳敬賢,王明麗.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(03)



本文編號(hào)：3666450