目的:通過生物信息學(xué)技術(shù)分析腸道病毒D68型（EV-D68）的衣殼蛋白VP1的特性,并篩選出4個VP1蛋白最可能的B細胞表位,合成肽段,構(gòu)建EV-D68多肽疫苗。通過原核表達系統(tǒng)誘導(dǎo)表達重組VP1蛋白,運用鎳離子金屬鰲合親和層析的方法純化目的蛋白,構(gòu)建病毒亞單位疫苗。將以上兩種疫苗免疫小鼠,檢測特異性抗體的產(chǎn)生和中和抗體的作用,比較兩種疫苗的免疫保護效果。方法:應(yīng)用Bioedit、ExPASy、ProtParam等多種生物信息學(xué)工具,對EV-D68 VP1蛋白的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)功能和B細胞表位進行預(yù)測,并對B細胞表位肽段進行篩選,合成篩選出的肽段并偶聯(lián)KLH蛋白,PBS溶解后與等量氫氧化鋁佐劑混合,制備成多肽疫苗。應(yīng)用PCR技術(shù)擴增EV-D68的VP1基因,并克隆到原核表達載體pET28a（+）上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a（+）-VP1。重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切和測序鑒定后,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）中,IPTG誘導(dǎo)表達蛋白。表達的目的蛋白用鎳離子金屬鰲合親和層析的方法純化,濃縮后的蛋白溶液與等量氫氧化鋁佐劑混合,制備成亞單位疫苗。將多肽疫苗和亞單位疫苗分別腹腔注射免疫小鼠,檢測血清中抗體的... 

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略詞名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 EV-D68 VP1 蛋白的生物信息學(xué)分析和B細胞表位預(yù)測
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 實驗方法
    2 實驗結(jié)果
        2.1 VP1理化性質(zhì)預(yù)測
        2.2 VP1結(jié)構(gòu)功能預(yù)測
        2.3 B細胞表位
    3 討論
第二部分 VP1蛋白的表達和純化
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 實驗方法
    2 實驗結(jié)果
        2.1 目的基因VP1的擴增
        2.2 重組質(zhì)粒pET28a(+)-VP1 的雙酶切鑒定
        2.3 重組質(zhì)粒pET28a(+)-VP1 的測序結(jié)果
        2.4 目的蛋白的表達純化
        2.5 純化產(chǎn)物的WB鑒定
    3 討論
第三部分 亞單位疫苗和多肽疫苗的保護性研究
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 實驗方法
    2 實驗結(jié)果
        2.1 WB檢測EV-D68特異性抗體的產(chǎn)生
        2.2 ELISA檢測抗體效價
        2.3 微量中和試驗
    3 討論
全文總結(jié)
文獻綜述
參考文獻
致謝
碩士期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]人腸道病毒71型抗原表位的研究進展[J]. 祝苗,張?zhí)矸?高柳鶯,董長征.  中國細胞生物學(xué)學(xué)報. 2017(09)
[2]結(jié)核潛伏感染蛋白Rv2657c T細胞和B細胞表位的預(yù)測與分析[J]. 楊丹,白雪娟,陽幼榮,林明貴,吳雪瓊.  實用醫(yī)學(xué)雜志. 2017(01)
[3]腸道病毒71型六安地區(qū)分離株VP1基因的生物信息學(xué)分析及B細胞表位預(yù)測[J]. 俞海洋,陳偉,倪德群,常宏偉,王林定,湯仁樹,陳靈芝,丁曉娟,陳敬賢,王明麗.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2012(03)



本文編號：3666450