二氧化硫（SO₂）是一種有毒氣體,也是主要的大氣污染物之一,其主要來(lái)源于工業(yè)燃料的燃燒。流行病學(xué)研究表明,SO₂的暴露與心血管疾病有關(guān)。高血壓、冠狀動(dòng)脈疾病、動(dòng)脈粥樣硬化和充血性心力衰竭等心血管疾病是世界范圍內(nèi)的主要死亡原因,據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),2016年大約1790萬(wàn)人死于心血管疾病,占所有死亡比例的31%。MicroRNAs（miRNA,miR）是一類小分子內(nèi)源性非編碼RNA,通過(guò)與靶mRNA 3’UTR的序列特異性相互作用,介導(dǎo)靶mRNA的降解或翻譯,發(fā)揮基因調(diào)控作用。據(jù)估計(jì),miRNA可以介導(dǎo)30%以上的人類基因組,在細(xì)胞的多種生物學(xué)過(guò)程及多種疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。然而,miRNA是否參與了SO₂引起的心血管疾病并不十分清楚。本研究采用miRNA高通量測(cè)序技術(shù)和RT-PCR技術(shù)篩選并驗(yàn)證SO₂染毒人主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞中差異表達(dá)的miRNA,共檢出106個(gè)差異表達(dá)的miRNA,其中67個(gè)表達(dá)上調(diào),39個(gè)表達(dá)下調(diào);結(jié)合文獻(xiàn)及測(cè)序結(jié)果,隨機(jī)挑選5個(gè)可能與心血管疾病相關(guān)的miRNA... 

【文章來(lái)源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 SO_2 概述
        1.1.1 SO_2 的來(lái)源及污染現(xiàn)狀
        1.1.2 SO_2 的毒性
    1.2 心血管疾病及血管平滑肌細(xì)胞
        1.2.1 心血管疾病概述
        1.2.2 血管平滑肌細(xì)胞概述
    1.3 miRNA在心血管疾病中的作用
        1.3.1 miRNA概述
        1.3.2 miRNA在心血管疾病中的研究進(jìn)展
    1.4 課題的設(shè)立依據(jù),研究意義以及內(nèi)容
第二章 SO_2 染毒人主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞的miRNA測(cè)序
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 主要儀器設(shè)備
        2.2.2 主要試劑耗材
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)及染毒分組
        2.3.2 CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞活力
        2.3.3 樣品制備
        2.3.4 總RNA的提取與質(zhì)檢
        2.3.5 miRNA文庫(kù)的制備和測(cè)序
        2.3.6 測(cè)序數(shù)據(jù)基礎(chǔ)分析
        2.3.7 與心血管疾病相關(guān)的差異miRNA的篩選及驗(yàn)證
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 SO_2對(duì)VSMC的毒性分析
        2.4.2 總RNA提取和質(zhì)檢結(jié)果
        2.4.3 生物學(xué)樣本重復(fù)性質(zhì)控結(jié)果
        2.4.4 小RNA庫(kù)的測(cè)序結(jié)果分析
        2.4.5 檢出miRNA長(zhǎng)度分布統(tǒng)計(jì)結(jié)果
        2.4.6 堿基偏好性分析
        2.4.7 miRNA差異表達(dá)分析
        2.4.8 篩選得到差異miRNA的 RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果
    2.5 討論
第三章 miRNA的靶基因預(yù)測(cè)與生物信息學(xué)分析
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 miRNA的靶基因預(yù)測(cè)
        3.2.2 miRNA靶基因GO功能分析
        3.2.3 miRNA靶基因KEGG通路分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 miRNA靶基因分析
        3.3.2 miRNA靶基因GO功能富集結(jié)果
        3.3.3 miRNA靶基因KEGG通路富集結(jié)果
    3.4 討論
第四章 Hsa-miR-10b-3p與 PPP3CC的靶向關(guān)系鑒定
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 主要儀器設(shè)備
        4.2.2 主要試劑耗材
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 hsa-miR-10b-3p靶基因預(yù)測(cè)
        4.3.2 目的片段序列的設(shè)計(jì)及PCR釣取
        4.3.3 瓊脂凝膠回收與純化
        4.3.4 雙酶切primGLO載體
        4.3.5 目的片段與載體連接
        4.3.6 重組質(zhì)粒的提取與檢測(cè)鑒定
        4.3.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及雙熒光素酶報(bào)告基因活性檢測(cè)
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 hsa-miR-10b-3p靶基因預(yù)測(cè)
        4.4.2 野生型和突變型載體的構(gòu)建與鑒定
        4.4.3 雙熒光素酶報(bào)告基因
    4.5 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)況及聯(lián)系方式


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]《中國(guó)心血管病報(bào)告2018》概要[J]. 胡盛壽,高潤(rùn)霖,劉力生,朱曼璐,王文,王擁軍,吳兆蘇,李惠君,顧東風(fēng),楊躍進(jìn),鄭哲,陳偉偉.  中國(guó)循環(huán)雜志. 2019(03)
[2]microRNA調(diào)控平滑肌細(xì)胞分化和表型轉(zhuǎn)換的分子機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 張莎,任安經(jīng),吳弘.  醫(yī)學(xué)研究雜志. 2017(11)

博士論文
[1]MicroRNA-1178調(diào)控胰腺癌惡性生物學(xué)行為的研究[D]. 曹喆.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2017



本文編號(hào)：3637908