近年來,人類對癌癥發(fā)病機(jī)制不斷深入研究,對于腫瘤發(fā)生的細(xì)胞與分子機(jī)制逐漸清晰,許多潛在的干預(yù)靶點(diǎn)得到了發(fā)現(xiàn)和確認(rèn),并不斷推出許多新型抗癌藥物應(yīng)用于臨床,不僅延長了癌癥病人的生存期,同時(shí)也極大改善了他們的生活質(zhì)量。但是腫瘤細(xì)胞對化療的耐藥性限制了大多數(shù)抗癌藥物的治療效果,因其涉及許多機(jī)制,依然是癌癥治療中的主要挑戰(zhàn)。所以,發(fā)現(xiàn)并闡明新的腫瘤細(xì)胞耐藥性機(jī)制,針對新的靶點(diǎn)設(shè)計(jì)藥物進(jìn)而克服腫瘤耐藥性,這對于更有效的腫瘤治療具有重要意義。腫瘤耐藥性是硼替佐米（Bortezomib,BTZ）治療腫瘤的關(guān)鍵難題,而我們新近發(fā)現(xiàn)三基序蛋白28（Tripartite Motif Containing 28,TRIM28）可能在抗癌藥BTZ耐藥產(chǎn)生中具有一定的作用,所以本研究將構(gòu)建穩(wěn)定敲低/過表達(dá)TRIM28細(xì)胞系,利用免疫印跡、q-PCR等方法探討在BTZ藥物壓力下,TRIM28調(diào)控腫瘤細(xì)胞BTZ耐藥的產(chǎn)生。結(jié)果顯示,不論在轉(zhuǎn)錄水平還是在蛋白質(zhì)水平,TRIM28上調(diào)20S蛋白酶體的表達(dá),說明TRIM28對蛋白酶體是一個正調(diào)控作用。此外,為進(jìn)一步闡明TRIM28對蛋白酶體的調(diào)控機(jī)制,我們使用穩(wěn)定敲低/過表... 

【文章來源】：中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院)廣東省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

成功構(gòu)建敲低/過表達(dá)TRIM28細(xì)胞系A(chǔ)-B.免疫印跡分析HCT116、HepG2及MCF7細(xì)胞中分別穩(wěn)定表達(dá)對照或低表達(dá)

第3章結(jié)果31圖3.2TRIM28在mRNA水平上調(diào)蛋白酶體特定亞基A.HCT116細(xì)胞中分別穩(wěn)定表達(dá)對照或F-TRIM28，用BTZ(20nM)處理8h，qPCR檢測蛋白酶體核心復(fù)合物（20S）及調(diào)節(jié)復(fù)合物(19S)各個亞基基因水平變化。B.HepG2、MCF7細(xì)胞中用BTZ(150nM/100nM)處理8h，qPCR檢測蛋白酶體核心復(fù)合物（20S）活性亞基β1，β2，β5基因水平變化。C.MCF7細(xì)胞中分別穩(wěn)定表達(dá)對照或過表達(dá)TRIM28，用DMSO處理8h，qPCR檢測蛋白酶體核心復(fù)合物(20S)活性亞基β1，β2，β5基因水平變化。D.MCF7細(xì)胞中分別穩(wěn)定表達(dá)對照或敲低TRIM28，分別用DMSO和BTZ(100nM)處理8h，qPCR檢測蛋白酶體核心復(fù)合物(20S)活性亞基β1，β2，β5基因水平變化。呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)代表平均值±SEM(n=3)，顯著性差異的確定采用two-wayANOVA檢驗(yàn)分析，其中與對照相比，*表示P<0.05;**表示P<0.01;***表示P<0.005。Figure3.2Proteasome-specificsubunitsareupregulatedbyTRIM28atthemRNAlevelA.HCT116cellsstablyexpressedcontrolorF-TRIM28,respectively,treatedwithBTZ(20nM)for8hours,qPCRwasusedtodetectchangesingenelevelsofeachsubunitof

第3章結(jié)果33圖3.3在蛋白水平，TRIM28上調(diào)20S蛋白酶體的表達(dá)A.MCF7細(xì)胞用BTZ(100nM)處理8h，免疫印跡分析MCF7細(xì)胞中20S蛋白酶體，TRIM28蛋白的表達(dá)，其中β-tubulin為內(nèi)參蛋白；B.HCT116細(xì)胞中分別穩(wěn)定表達(dá)對照或低表達(dá)TRIM28蛋白，用不同濃度BTZ(50nM,100nM)處理8h，免疫印跡分析HCT116細(xì)胞中20S蛋白酶體，其中β-tubulin為內(nèi)參蛋白。C.MCF7細(xì)胞中分別穩(wěn)定表達(dá)對照或過表達(dá)TRIM28蛋白，用BTZ(100nM)處理8h，免疫印跡分析MCF7細(xì)胞中20S蛋白酶體，其中GAPDH為內(nèi)參蛋白。蛋白灰度分析統(tǒng)計(jì)圖均在右側(cè)顯示。Figure3.3TRIM28up-regulates20SproteasomeexpressionattheproteinlevelA.MCF7cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofBTZ(100nM)for8hours.Theexpressionof20Sproteasomes、TRIM28inMCF7cellswereanalyzedbywestern


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