[背景]低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞（vascular endothelial cells,VECs）炎癥在動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis,As）的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用,但其調(diào)節(jié)機(jī)制尚不清楚。新近研究表明,細(xì)胞焦亡是一種炎性、程序性的細(xì)胞死亡形式,與As的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。我們前期的研究表明,Tet甲基胞嘧啶雙加氧酶2（Tet methylcytidine dioxygenase 2,TET2）是剪切應(yīng)力敏感基因,低剪切應(yīng)力下調(diào)TET2的表達(dá),TET2 shRNA上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞琥珀酸脫氫酶復(fù)合體B亞基（Succinic acid dehydrogenase complex B,SDHB）的表達(dá)。在本文中,我們將探討TET2/SDHB在低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)VECs焦亡中的作用及其機(jī)制。[目的]探討低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)VECs焦亡的調(diào)節(jié)機(jī)制。[方法]1、采用平行平板流動(dòng)腔系統(tǒng),從細(xì)胞水平觀察低剪切應(yīng)力和生理剪切應(yīng)力下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）焦亡相關(guān)蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1... 

【文章來(lái)源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

低剪切力促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞焦亡相關(guān)基因表達(dá)并下調(diào)TET2的表達(dá)A-B.低剪切力上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18以及IL-1β蛋白的

163.2TET2shRNA促HUVECs焦亡為了進(jìn)一步觀察TTE2低表達(dá)與血管內(nèi)皮細(xì)胞焦亡之間的關(guān)系，于是我們使用了綠色熒光蛋白（Greenfluorescentprotein，GFP）標(biāo)記的TET2shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染HUVECs株，轉(zhuǎn)染72h后采用熒光顯微鏡觀察其轉(zhuǎn)染效率并采用Westernblot檢測(cè)其TET2的蛋白表達(dá)水平，結(jié)果表明TET2shRNA明顯下調(diào)TET2表達(dá)（圖3.2A-C），提示已成功構(gòu)建TET2低表達(dá)HUVECs。Westernblot檢測(cè)TET2shRNA組、空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組組中焦亡相關(guān)蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18以及IL-1β的表達(dá)水平，結(jié)果提示與陰性對(duì)照相比，TET2shRNA組上調(diào)了NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18以及IL-1β的表達(dá)，表明TET2shRNA促進(jìn)HUVECs焦亡(圖3.2D,E)。圖3.2TET2shRNA促HUVECs焦亡A,采用TET2shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染HUVECs72h，熒光顯微鏡檢測(cè)TET2shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染

18圖3.3過(guò)表達(dá)TET2抑制低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)的HUVECs焦亡A,過(guò)表達(dá)TET2的慢病毒轉(zhuǎn)染72h后采用熒光顯微鏡檢測(cè)TET2轉(zhuǎn)染效率；B-C,過(guò)表達(dá)TET2慢病毒轉(zhuǎn)染96h后，采用Westernblot檢測(cè)TET2蛋白的表達(dá)。***P<0.001vsControl組。D-E,過(guò)表達(dá)TET2慢病毒轉(zhuǎn)染96h后予以灌流6h處理,westernblot檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞焦亡相關(guān)蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18以及IL-1β的表達(dá)。**P<0.01，***P<0.001vs5dyne/cm2組，n=3。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3596507