心衰是一種復雜的臨床綜合征,其病情發(fā)展快,預后差,死亡率及再入院率高。其在兒童時期屬于較為常見的急危重癥,若未及時診斷治療,可危及患兒生命。心衰標志物的監(jiān)測對于心衰的早期診斷和及時干預尤為重要,響應于心室壁壓力超負荷而增加分泌的腦鈉肽已是國際公認的心衰標志物�；瘜W發(fā)光免疫分析法、酶聯(lián)免疫吸附測定和免疫層析法等多種方法已被報道用于腦鈉肽的檢測,但這些方法存在靈敏度不夠或易受干擾等缺點。因此,本文基于納米氧化石墨烯和羥基氧化鈷開發(fā)了兩種用于腦鈉肽超靈敏檢測的熒光適體傳感器。本文的主要研究內(nèi)容如下:第一部分:基于氧化石墨烯的熒光適體傳感器用于腦鈉肽的超靈敏檢測為實現(xiàn)對兒童心衰的早期診斷,開發(fā)了一種用于心衰標志物?腦鈉肽（BNP）超靈敏檢測的熒光共振能量轉移（FRET）平臺。已可商業(yè)化購買、成本低、性質穩(wěn)定的氧化石墨烯被用作能量受體,而熒光染料標記的核酸適配體被用作能量供體及BNP特異性識別元件�；诖嬖贐NP時的FRET“開”的狀態(tài)（強的熒光發(fā)射）和不存在BNP時FRET“關”的狀態(tài)（熒光猝滅）,實現(xiàn)了BNP的超靈敏檢測,線性范圍為0.074?0.56 pg/mL,檢出限為0.045 pg/... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

用于BNP檢測的FRET平臺示意圖

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文18圖1.2加入不同試劑后體系的熒光發(fā)射光譜Fig.1.2Fluorescenceemissionspectraofthesystemwiththeadditionofdifferentreagents.TheconcentrationsofFAMaptamer,GO,andBNPwere3.75nmol/L,20μg/mL,and0.30pg/mL,respectively.2.3機制研究2.3.1原子力顯微鏡表征利用AFM研究了GO與FAMaptamer和BNP作用前后的表面形貌。如圖1.3所示，GO納米片的平均厚度約為1.5nm，表明GO納米片在溶液中分散良好，幾乎都是以單層或雙層形式存在[43]。加入FAMaptamer后，在GO納米片的表面出現(xiàn)了一些平均高度約為5.0nm的“島”，說明FAMaptamer吸附在了GO表面。然而，當BNP加入后，納米片的高度又恢復到了1.5nm，同時在納米片的旁邊形成了許多高度約為60nm的復合物，表明FAMaptamer能以更強的作用力與BNP結合。DLS測試結果（圖1.4）與AFM表征結果一致。但由于DLS測定的是水合粒徑，因此DLS測得的尺寸分布比AFM測量的大[44]。

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文19圖1.3（A）GO；（B）GO和FAMaptamer混合物；（C）GO、FAMaptamer和BNP混合物的AFM圖像和高度測量Fig.1.3AFMimagesandheightmeasurementsof(A)GO,(B)themixtureofGOandFAMaptamer,and(C)themixtureofGO,FAMaptamerandBNP.ThefinalconcentrationsofFAMaptamer,GO,andBNPwere3.75nmol/L,20μg/mL,and0.30pg/mL,respectively.圖1.4動態(tài)光散射粒徑分布圖Fig.1.4Thedynamiclightscattering(DLS)measurementsofGO,FAMaptamerGOcomplex,andthemixtureofFAMaptamerGOandBNP.Finalconcentrations:FAMaptamer,0.125μmol/L;GO,20μg/mL;BNP,0.32pg/mL.2.3.2圓二色光譜圓二色光譜（CD，圖1.5A）顯示，BNP僅在202nm處表現(xiàn)出負的圓二色信號，對應蛋白質的無規(guī)卷曲結構。適配體分別在278nm和243nm處顯示出正的

【參考文獻】：
期刊論文
[1]A New Method for Blood NT-proBNP Determination Based on a Near-infrared Point of Care Testing Device with High Sensitivity and Wide Scope[J]. ZHANG Xiao Guang,SHU Yao Gen,GAO Ju,WANG Xuan,LIU Li Peng,WANG Meng,CAO Yu Xi,ZENG Yi.  Biomedical and Environmental Sciences. 2017(06)



本文編號：3582153