新德里金屬-β-內(nèi)酰胺酶1（New Delhi metallo-beta-lactamase-1;NDM-1）是一種金屬離子依賴的-β-內(nèi)酰胺酶（metal-lactamase,MBL）,它可水解幾乎所有β-內(nèi)酰胺類抗生素但極難水解氨曲南（Aztreonam）。因此聯(lián)合應(yīng)用氨曲南、頭孢他啶-阿維巴坦治療絲氨酸β-內(nèi)酰胺酶（SBL）及金屬-β-內(nèi)酰胺酶（MBL）共表達(dá)表達(dá)的腸桿菌及假單胞銅綠桿菌在臨床治療和體外敏感性實(shí)驗(yàn)都觀察到了好的結(jié)果。然而氨曲南的治療機(jī)制仍然不完全清楚。另一方面,近期研究結(jié)果表明NDM-1在高濃度條件下可以水解氨曲南,因此NDM-1對(duì)氨曲南是否表現(xiàn)出條件依賴性耐藥,還有什么條件可導(dǎo)致NDM-1對(duì)氨曲南發(fā)生水解而出現(xiàn)耐藥也在很大程度上不清楚。在本研究中我們以純化的NDM-1、固相有NDM-1的酶珠（NDM-1酶珠）及裝載有NDM-1酶珠的酶熱傳感器（NDM-1酶熱傳感器）研究NDM-1與氨曲南在靜態(tài)與連續(xù)流動(dòng)條件下兩者相互作用對(duì)NDM-1的耐藥活性影響。首先在相對(duì)靜態(tài)的試管內(nèi)研究NDM-1對(duì)抗生素的水解活性時(shí)我們發(fā)現(xiàn)氨曲南能夠顯著抑制NDM-1對(duì)共處理的硝噻吩或美羅培... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

評(píng)價(jià)氨曲南對(duì)NDM-1水解頭孢硝噻吩和美羅培南的影響

第二章氨曲南競爭性抑制NDM-1對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的水解11（54.7±13.3%相對(duì)于4.6±2.3%），但與第一次處理時(shí)只加入青霉素G的酶珠在第二次處理時(shí)對(duì)青霉素G的水解率（92.5±4.4%）相比仍然明顯較低（圖2.3中標(biāo)記的第二次處理數(shù)據(jù)部分）。而且對(duì)第二次處理后的酶珠再次充分清洗后，并以與第二次處理酶珠相同的方式以5.4mM青霉素G第三次處理各酶珠。發(fā)現(xiàn)與第一次處理時(shí)只加入青霉素G處理的酶珠相比第一次處理時(shí)加入氨曲南共處理的酶珠對(duì)青霉素G的水解率仍然低30%左右（圖2.3中標(biāo)記的第三次處理數(shù)據(jù)部分）。這些數(shù)據(jù)表明與青霉素G單獨(dú)處理NDM-1酶珠不同，以氨曲南與青霉素G共同處理的NDM-1酶珠即使經(jīng)過2輪的清洗仍然只能對(duì)新加入的青霉素G進(jìn)行部分水解。所以氨曲南是通過與NDM-1形成穩(wěn)定的復(fù)合物占據(jù)了頭孢硝噻吩、美羅培南及青霉素G與NDM-1結(jié)合的位點(diǎn)從而對(duì)NDM-1水解這些抗生素起到了強(qiáng)烈的抑制作用。圖2.3評(píng)價(jià)氨曲南對(duì)NDM-1酶珠水解青霉素G的影響Fig.2.3EvaluationofeffectofAztreonamonhydrolysisofPenicillinGbyNDM-1immobilizedCPGbeads-2.4.4討論近年來聯(lián)合應(yīng)用氨曲南、頭孢他啶-阿維巴坦治療MBL表達(dá)的強(qiáng)耐藥腸桿菌及假單胞銅綠桿菌在臨床治療和體外敏感性實(shí)驗(yàn)都觀察到了好的結(jié)果[25]。然而其治療機(jī)制仍然不完全清楚。本研究中我們首先以分光光度計(jì)的方法分析NDM-1對(duì)氨曲南的水解，但發(fā)現(xiàn)即使在相對(duì)高濃度NDM-1處理16個(gè)小時(shí)的條件下氨曲南也沒發(fā)生水解。這些數(shù)據(jù)支持氨曲南對(duì)MBL穩(wěn)定的報(bào)道。然后發(fā)現(xiàn)以氨曲南共處理能夠顯著抑制NDM-1對(duì)頭孢硝噻吩和美羅培南的水解，且這種抑制呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性（圖2.2）。這些數(shù)據(jù)表明氨曲南可以抑制NDM-1對(duì)頭孢類和碳青霉烯類β-內(nèi)酰胺類抗生素的水解。抑制活性隨著氨曲南的

靜態(tài)與流動(dòng)對(duì)NDM-1和氨曲南的互作影響研究20分鐘穩(wěn)定基線；（4）待基線穩(wěn)定后，將31.25mg/L（每個(gè)濃度三次重復(fù)）的青霉素緩慢注入酶熱傳感器系統(tǒng)，等待5min，平穩(wěn)的基線出現(xiàn)峰值回歸平穩(wěn)后，可上下一個(gè)樣品。如此反復(fù)檢測不同濃度的青霉素。美羅培南依照檢測青霉素G的方法，重低濃度至高濃度依此檢測；（5）實(shí)驗(yàn)結(jié)束，使用含有EDTA和ZnSO4的1×PBS以10速?zèng)_洗儀器25min，之后關(guān)閉儀器；（6）記錄峰值的數(shù)據(jù)，每一種濃度的抗生素峰值取平均值，統(tǒng)計(jì)所得數(shù)據(jù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.4結(jié)果與討論3.4.1NDM-1酶熱傳感器系統(tǒng)模式圖酶熱傳感器的原理為，通過磷酸鹽緩沖液和含有抗生素濃度的待測溶液與酶柱中固定化的酶化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的熱量與含有抗生素溶液的抗生素濃度成正比，這種熱信號(hào)通過色譜系統(tǒng)轉(zhuǎn)化為易于觀察的峰值的高低�？股睾吭礁�，峰值越高（如圖3.1；3.2）。圖3.1酶熱傳感器模式圖


本文編號(hào)：3573879