目的:靜脈注射用腺病毒載體轉(zhuǎn)染人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（hBMP-2）基因的脂肪干細(xì)胞（ADSCs）于兔骨質(zhì)疏松性骨折（OPF）模型體內(nèi),觀察其對骨折愈合的修復(fù)作用。方法:1在新西蘭大白兔頸項部提取適量脂肪組織,分離傳代培養(yǎng)ADSCs至第3代。用腺病毒載體將hBMP-2基因轉(zhuǎn)染至轉(zhuǎn)染ADSCs組干細(xì)胞內(nèi),熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。10 d后逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)法（RT-PCR）檢測hBMP-2mRNA的表達(dá)水平,采用蛋白印跡雜交法（WB）檢測hBMP-2蛋白的表達(dá)情況。2 48只新西蘭大白兔采用雙側(cè)卵巢去勢法,聯(lián)合右側(cè)股骨中下段2 mm骨缺損骨折法制備兔OPF模型。造模后隨機(jī)分組法分為3組:轉(zhuǎn)染干細(xì)胞組（16只,簡稱轉(zhuǎn)染組）、未轉(zhuǎn)染干細(xì)胞組（16只,簡稱空載組）、對照組（16只）;造模術(shù)后第3天開始靜脈移植干細(xì)胞,每天1次,共3天。各組在移植后4周和8周時間點進(jìn)行免疫組織化學(xué)法（IHC-P）檢測血清骨生化4項;用X線攝片半定量評分法比較各組兔子骨質(zhì)大體形態(tài)修復(fù)程度;HE染色方法了解各組兔子骨組織的病理變化;轉(zhuǎn)染組行共聚焦顯微鏡示蹤檢測熒光標(biāo)記蛋白表達(dá)情況,評估干細(xì)胞移植歸巢效果。結(jié)果:1分離... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒Ad-hBMP-2測序鑒定圖

圖2雙側(cè)

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文楊顯紅232結(jié)果2.1兔ADSCs培養(yǎng)及流式細(xì)胞鑒定完全培養(yǎng)基培養(yǎng)ADSCs，原代細(xì)胞顯微鏡下觀察多為圓形、橢圓形及不規(guī)則方形，12h后可見部分細(xì)胞貼壁生長，為長梭形，24h觀察見細(xì)胞已全部貼壁生長，5d后見細(xì)胞生長達(dá)培養(yǎng)瓶面積的80%，細(xì)胞呈長梭形。經(jīng)消化、傳代后細(xì)胞3d可生長達(dá)培養(yǎng)瓶面積的80%，生殖速度較原代快，第2、3代細(xì)胞呈梭形，經(jīng)3次傳代，細(xì)胞形態(tài)穩(wěn)定（如圖3）。流式細(xì)胞儀檢測第3代ADSCs結(jié)果顯示：CD45的細(xì)胞表達(dá)3.2%，CD14的細(xì)胞表達(dá)0.46%，符合兔脂肪干細(xì)胞表面抗原的一般表達(dá)情況，可以確定經(jīng)提取傳代的細(xì)胞為ADSCs。（如圖4）圖3兔ADSCs的傳代培養(yǎng)圖（×100）a：原代ADSCs呈圓形、橢圓形及不規(guī)則方形生長；b：24小時后ADSCs全部貼壁生長；c：第2代ADSCs呈梭形，生殖速度較原代快；d：第3代ADSCs形態(tài)穩(wěn)定，生殖速度快。abcd

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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