目的:本實(shí)驗(yàn)選用中藥黃芪的主要組份黃芪總皂苷,通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)來(lái)探討黃芪總皂苷是否通過(guò)干預(yù)Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路調(diào)控自噬緩解肺纖維化,初步探討黃芪總皂苷緩解肺纖維化的分子機(jī)制,為從中醫(yī)藥中尋求多靶點(diǎn)防治肺纖維化提供理論依據(jù),同時(shí)為臨床防治該疾病提供新的思路。方法:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分:通過(guò)博來(lái)霉素氣管滴注的方法復(fù)制肺纖維化小鼠模型,造模完成后給予黃芪總皂苷灌胃。制作HE染色、Masson染色的病理切片觀察空白對(duì)照組、模型組及藥物干預(yù)組小鼠肺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)與膠原沉積的情況;堿水解法檢測(cè)羥脯胺酸的含量;實(shí)時(shí)熒光定量PCR（QPCR）法檢測(cè)一型膠原（Col-I）、三型膠原（Col-III）的m RNA相對(duì)表達(dá)量;熒光雙標(biāo)的方法檢測(cè)Col-I、Col-III蛋白的表達(dá)水平;WB的方法檢測(cè)自噬相關(guān)基因LC3B-II、P62的蛋白表達(dá)水平;蛋白印跡法（Western blotting,WB）的方法檢測(cè)Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路的活化水平。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分:MTS法篩選細(xì)胞實(shí)驗(yàn)最適給藥濃度;TGF-β1刺激人肺成纖維細(xì)胞造模;給予黃芪總皂苷刺激,熒光雙標(biāo)的方法檢測(cè)Col-I、... 

【文章來(lái)源】：云南中醫(yī)藥大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

各組小鼠肺組織HE染色結(jié)果（200）

云南中醫(yī)藥大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文38況，且有纖維灶的形成；黃芪總皂苷組小鼠，經(jīng)過(guò)博來(lái)霉素的刺激，再給予黃芪總皂苷藥物干預(yù)，過(guò)量的膠原沉積的情況有所緩解。提示黃芪總皂苷可以一定程度緩解模型小鼠的肺部纖維化進(jìn)程。1.3各組小鼠肺組織中羥脯胺酸含量表3不同組別中小鼠肺組織中HYP的含量（n=3,X±S，μg/mg）HYP空白對(duì)照組0.32±0.02模型組0.43±0.10**黃芪總皂苷干預(yù)組0.38±0.04▲▲注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01。如表3，經(jīng)過(guò)博來(lái)霉素刺激后，模型組小鼠肺組織中HYP含量與空白對(duì)照組相比明顯上升，差異顯著，且該差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；黃芪總皂苷干預(yù)組的小鼠肺組織中HYP含量均有明顯降低（P＜0.01）。提示黃芪總皂苷可以緩解纖維化小鼠肺部膠原沉積。1.4小鼠肺組織中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的mRNA相對(duì)表達(dá)水平表4不同組別中小鼠肺組織中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的mRNA相對(duì)表達(dá)水平（n=3,X±S）Col-ICol-III空白對(duì)照組1±01±0模型組6.53±1.27**2.78±0.87**黃芪總皂苷干預(yù)組0.60±0.12▲▲0.18±0.04▲▲注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01。圖3不同組別中小鼠肺組織中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的mRNA相對(duì)表達(dá)水平（n=3,X±S）注：NSnon-significant,*P<0.05,**P<0.01

黃芪總皂苷通過(guò)ERK通路調(diào)控自噬緩解肺纖維化的實(shí)驗(yàn)研究39各組小鼠肺組織中Col-I、Col-III的mRNA相對(duì)表達(dá)量的結(jié)果如表4，圖3示，經(jīng)過(guò)博來(lái)霉素刺激后，模型組Col-I、Col-III的mRNA相對(duì)表達(dá)量與空白對(duì)照組相比明顯上升，差異顯著，且該差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；黃芪總皂苷干預(yù)組的Col-I、Col-III的mRNA表達(dá)水平均有明顯降低（P＜0.01）。提示黃芪總皂苷可以有效降低纖維化小鼠肺部膠原沉積。1.5小鼠肺組織中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA的蛋白表達(dá)量圖4各組小鼠肺組織中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA的蛋白表達(dá)量(100×)如圖4示，通過(guò)熒光三標(biāo)的方法檢測(cè)各組小鼠肺組織中Col-I、Col-III、α-SMA蛋白的表達(dá)水平，在綠色激發(fā)光照射下，可以明顯觀察到，模型組小鼠肺組織中的Col-I的表達(dá)水平與空白組相比顯著增多，給予黃芪總皂苷干預(yù)后，Col-I的表達(dá)水平有所降低；在紅色激發(fā)光照射下，模型組小鼠肺組織中的Col-III的表達(dá)水平與空白對(duì)照組相比明顯升高，黃芪總皂苷組的小鼠肺組織中的Col-III表達(dá)水平與模型組比較明顯降低；在粉色激發(fā)光照射下，可以明顯觀察到模型組小鼠肺組織中α-SMA的表達(dá)水平與空白對(duì)照組相比明顯升高，而黃芪總皂苷組與模型組相比α-SMA的表達(dá)水平明顯降低。綜上結(jié)果，說(shuō)明黃芪總皂苷可以有效減緩肺纖維化小鼠肺部膠原沉積，提示黃芪總皂苷有一定的抗纖維化的作用。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3546279